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Notch1在BMP9诱导iMEF细胞成骨分化中的作用 被引量:6
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作者 杨伦韵 张晓艳 +3 位作者 廉静 曹俊杰 罗进勇 唐敏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期39-45,共7页
目的研究Notch信号中Notch1受体在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导的永生化小鼠胚胎成纤维细胞(immortalized mouse embryonic fibroblasts,i MEF)成骨分化中的作用。方法利用Notch1受体显性负性突变体(domina... 目的研究Notch信号中Notch1受体在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导的永生化小鼠胚胎成纤维细胞(immortalized mouse embryonic fibroblasts,i MEF)成骨分化中的作用。方法利用Notch1受体显性负性突变体(dominant negative mutant,dn Notch1)处理i MEF细胞,首先分别采用细胞化学染色、活性测定和RT-PCR了解Notch1对早期成骨指标碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和晚期成骨指标骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的影响;其次用Western blot、荧光素酶和RT-PCR检测Notch1对BMP9经典信号通路中Smad1/5/8磷酸化和Smad结合元件(smad-binding element,SBE)活性影响;最后用结晶紫染色和流式细胞仪分析其对细胞增殖、周期及凋亡的影响。结果与对照组相比,dn Notch1处理i MEF第3、5、7天后,ALP活性均降低(P<0.05),并呈剂量依赖性,11 d时OPN和OCN表达量也下调(P<0.05);BMP9经典通路中Smad1/5/8蛋白量没有明显变化,而p-Smad1/5/8蛋白及SBE活性受到了抑制(P<0.05);结晶紫染色及流式细胞仪分析结果显示dn Notch1能够抑制BMP9诱导的i MEF早期细胞增殖,但对细胞凋亡无影响。结论 dn Notch1竞争抑制Notch1信号,使BMP9诱导i MEF的成骨分化能力显著下降,其可能通过抑制BMP信号通路的活化和i MEF早期增殖两方面来实现。 展开更多
关键词 NOTCH1 骨髓间充质干细胞 永生化小鼠胚胎成纤维细胞 骨形态发生蛋白9
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DLL1在骨形态形成蛋白9诱导骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用 被引量:3
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作者 廉静 杨伦韵 +3 位作者 曹俊杰 罗进勇 何百成 唐敏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期38-43,共6页
目的探讨Notch配体Delta-like1(DLL1)在骨形态形成蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化中的作用及机制。方法利用DLL1重组腺病毒上调永生化小鼠胚胎成纤维细胞(immo... 目的探讨Notch配体Delta-like1(DLL1)在骨形态形成蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化中的作用及机制。方法利用DLL1重组腺病毒上调永生化小鼠胚胎成纤维细胞(immortalized mouse embryonic fibroblasts,i MEF)中DLL1 mRNA的表达,分别采用细胞化学染色、活性测定对早期成骨指标碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和晚期成骨指标钙盐沉积的影响;其次裸鼠皮下异位成骨实验进一步了解DLL1的体内成骨作用;最后用qRT-PCR、Western blot和荧光素酶检测DLL1对BMP9经典信号通路中Ⅰ型受体、Smad1/5/8磷酸化和Smad结合元件(smad-binding element,SBE)转录活性影响。结果与对照组相比,DLL1在体外能明显促进BMP9诱导的MSCs早期成骨指标ALP活性和晚期成骨指标钙盐沉积的生成;同时也能明显促进BMP9诱导的MSCs裸鼠皮下异位成骨作用;BMP9信号通路中ALK2表达明显增加,而对ALK1则没有影响;Smad1/5/8蛋白量没有明显变化,而p-Smad1/5/8蛋白及SBE活性明显增加(P<0.05)。结论 DLL1可以促进BMP9诱导的MSCs成骨分化,可能通过影响BMP9信号通路来实现其促成骨作用。 展开更多
关键词 间充质干细胞 Delta-like1 骨形态发生蛋白9 NOTCH信号通路
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内参基因GAPDH和β-actin在BMP9诱导的骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的表达情况 被引量:4
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作者 杨伦韵 张晓艳 +2 位作者 廉静 罗进勇 唐敏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期546-549,共4页
目的:观察常用内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和β肌动蛋白(β-actin)在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成... 目的:观察常用内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和β肌动蛋白(β-actin)在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化过程中表达情况,以确定相关研究的内参基因。方法:检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)确定BMP9诱导的MSCs(包括C3H10、C2C12和MEF)向成骨分化;以real-time PCR分别检测0、1、3、5、7 d GAPDH和β-actin的m RNA表达水平;以Western blot检测GAPDH和β-actin蛋白。结果:(1)β-actin在BMP9诱导的MSCs成骨分化过程中m RNA表达水平逐渐升高,0 d与5 dβ-actin的m RNA表达量存在统计学差异(C3H10、C2C12和MEF的P值均为0.000,GAPDH的m RNA表达水平未见明显改变(P>0.05);β-actin蛋白表达量随成骨分化逐渐增加,而GAPDH蛋白表达未见明显变化。结论:在BMP9诱导的MSCs成骨分化过程中,GAPDH比β-actin更适合做内参。 展开更多
关键词 内参基因 骨髓间充质干细胞 成骨分化 骨形态发生蛋白9
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携带siRbpj重组腺病毒载体的构建及其对BMP9诱导骨髓间充质干细胞成骨分化作用影响 被引量:1
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作者 张晓艳 杨伦韵 +3 位作者 谢佳瑛 左国伟 罗进勇 唐敏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期601-606,共6页
目的:构建并筛选特异性干扰Notch信号通路核转录因子Rbpj基因的重组腺病毒,探讨通过Rbpj的经典Notch信号通路在骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)9诱导骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化中的作用。... 目的:构建并筛选特异性干扰Notch信号通路核转录因子Rbpj基因的重组腺病毒,探讨通过Rbpj的经典Notch信号通路在骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)9诱导骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化中的作用。方法:设计3对针对小鼠Rbpj的siRNA序列,将其分别亚克隆至pSES-HUS穿梭质粒,再与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183内同源重组获得重组质粒,经脂质体转染至HEK293细胞中包装扩增腺病毒,利用RT-PCR及Western blot进行筛选、验证有效的干扰腺病毒。该重组腺病毒与AdBMP9处理MSCs细胞株C3H10T1/2,采用组织化学和RT-PCR检测早期成骨指标碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和晚期成骨指标骨桥蛋白(osteopontin,OPN),骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)及BMP下游靶基因Id 1、Runx 2等的表达。结果:成功构建了3个重组腺病毒,并筛选出干扰效率最好的AdsiRbpj-2重组腺病毒,转染C3H10T1/2,AdsiRbpj-2可以明显下调BMP9诱导的早期成骨指标ALP的活性及晚期成骨指标OPN、OCN的表达,成骨相关基因Runx 2等的表达也有下降。结论:成功构建了特异性阻断Notch经典信号通路腺病毒载体AdsiRbpj-2,该重组腺病毒能够抑制BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的成骨分化进程,从而进一步证明Notch信号通路在BMP9诱导的MSCs成骨分化过程中有着重要的作用。 展开更多
关键词 Rbpj(CBF1) 重组腺病毒 SIRNA NOTCH 骨形态发生蛋白 骨髓间充质干细胞
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