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PP2A B56α调节亚基原核表达载体的构建及表达
1
作者
赵亚平
程晓清
+2 位作者
孙晓莉
李良渊
张朝
《南京师大学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期74-78,共5页
为了构建PP2A B56α调节亚基原核表达载体,以p CEP-4HA-B56α质粒为模板,设计引物克隆人源PP2A B56αc DNA,连入p GEX-4T-1载体中,测序正确后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并将诱导表达重组蛋白的菌体超声破碎后,进行可溶性分析...
为了构建PP2A B56α调节亚基原核表达载体,以p CEP-4HA-B56α质粒为模板,设计引物克隆人源PP2A B56αc DNA,连入p GEX-4T-1载体中,测序正确后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并将诱导表达重组蛋白的菌体超声破碎后,进行可溶性分析,对可溶性蛋白进行纯化.SDS-PAGE电泳及Western Blot分析鉴定重组蛋白.结果表明,经测序和酶切鉴定后成功构建重组质粒p GEX-4T-1-B56α,表达大小约79 k D的重组蛋白,可溶性表达的重组蛋白为菌体总蛋白质量的8.6%,经GST纯化系统纯化得到纯度约为78.9%的重组蛋白,回收率达到52.2%.因此,本研究成功构建了PP2A B56α原核表达体系,获得重组蛋白,为研究PP2A B56α的生物学功能奠定了基础.
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关键词
PP2A
B56α
原核表达
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职称材料
题名
PP2A B56α调节亚基原核表达载体的构建及表达
1
作者
赵亚平
程晓清
孙晓莉
李良渊
张朝
机构
南京师范大学生命科学学院
出处
《南京师大学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期74-78,共5页
基金
国家自然科学基金(30570662、30871228、31171302)
文摘
为了构建PP2A B56α调节亚基原核表达载体,以p CEP-4HA-B56α质粒为模板,设计引物克隆人源PP2A B56αc DNA,连入p GEX-4T-1载体中,测序正确后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并将诱导表达重组蛋白的菌体超声破碎后,进行可溶性分析,对可溶性蛋白进行纯化.SDS-PAGE电泳及Western Blot分析鉴定重组蛋白.结果表明,经测序和酶切鉴定后成功构建重组质粒p GEX-4T-1-B56α,表达大小约79 k D的重组蛋白,可溶性表达的重组蛋白为菌体总蛋白质量的8.6%,经GST纯化系统纯化得到纯度约为78.9%的重组蛋白,回收率达到52.2%.因此,本研究成功构建了PP2A B56α原核表达体系,获得重组蛋白,为研究PP2A B56α的生物学功能奠定了基础.
关键词
PP2A
B56α
原核表达
Keywords
PP2A, B56α, prokaryotic expression
分类号
Q28 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PP2A B56α调节亚基原核表达载体的构建及表达
赵亚平
程晓清
孙晓莉
李良渊
张朝
《南京师大学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016
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