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题名人皮肤表皮干细胞外泌体的分离培养与鉴定
被引量：2
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作者
李碧优
马洁
张启宇
章华兵
朱云平
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机构
安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
军事医学研究院生命组学研究所蛋白质组学国家重点实验室
北京协和医院皮肤科
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出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2023年第2期224-229,共6页
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基金
国家重点研发计划重点专项项目(编号:2021YFA1301603)
蛋白质组学国家重点实验室开放课题(编号:SKLP-O2020005)。
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文摘
目的通过优化技术流程,探究人皮肤表皮干细胞(EPSCs)体外分离培养及表皮干细胞外泌体(EPSCs-Exo)分离纯化的方法。方法首先通过优化人源EPSCs的分离酶,运用改良的无血清培养液,添加10种因子刺激EPSCs生长,促进其分泌EPSCs-Exo,同时维持EPSCs干性和增殖性,延缓EPSCs的分化和成熟。进一步优化差速离心的条件,高效高纯度提取人源的EPSCs-Exo。对人皮肤组织进行免疫荧光染色溯源EPSCs;对分离的EPSCs进行Western blot和免疫荧光染色检测其表面多个标志物;对EPSCs-Exo从形态、粒径大小、多个胞内和膜上标志物进行鉴定。结果人皮肤组织分层表达表皮细胞的标志物,EPSCs高表达整合素α6(integrin-α6)、整合素β1(integrin-β1)、P63蛋白(P63)、细胞角蛋白19(CK19)等标志物,EPSCs上清液超速离心后的透射电镜显示茶托状结构,粒径大小检测直径介于30~150 nm,蛋白印迹显示Tsg101、CD9、CD63(溶酶体相关膜蛋白3)呈阳性,Calnexin、GAPDH呈阴性。结论该研究成功在体外分离培养了人源EPSCs并获得人源EPSCs-Exo。
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关键词
外泌体
人表皮干细胞
超速离心
再生医学
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Keywords
exosomes
human epidermal stem cells
ultracentrifugation
regenerative medicine
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分类号
R459.9
[医药卫生—治疗学]
Q2-33
[生物学—细胞生物学]
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