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牲畜链霉菌(Streptomyces cattleya)thienamycin合成阻断变株的筛选、阻断部位的确定及变株原生质体的研究
被引量:
1
1
作者
李戎锋
王以光
《中国抗生素杂志》
CSCD
北大核心
1996年第2期89-93,共5页
以thienamycin(TNM)产生菌S.cattleya为出发菌株,利用终浓度为1.5mg/ml强诱变剂亚硝基胍在pH9.0、37℃条件下对其孢子悬液处理30min,得到稳定的TNM生物合成阻断变株Y_3。纸层析...
以thienamycin(TNM)产生菌S.cattleya为出发菌株,利用终浓度为1.5mg/ml强诱变剂亚硝基胍在pH9.0、37℃条件下对其孢子悬液处理30min,得到稳定的TNM生物合成阻断变株Y_3。纸层析后进行茚三酮显迹和生物显迹表明Y_3变株积累一种无活性中间产物,其迁移率不同于TNM。建立了Y_3变株中间产物的分离纯化方法。酸水解和氨基酸组分分析表明Y_3中间产物为谷氨酸和丙氨酸组成的二肽,可能是形成碳青霉烯双环母核的底物,提示丙氨酸可能也是TNM的前体,Y_3变株阻断在形成碳青霉烯双环母核的环化步骤。Y_3变株具有较高的原生质体形成率和再生率。原生质体在40℃进行处理可以在不影响再生率的前题下提高DNA转化率。通过以上研究建立了以Y_3变株为宿主的TNM环化酶基因克隆受体系统。
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关键词
牲畜链霉菌
阻断变株
原生质体
thienamycin
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职称材料
Thienamycin环化酶基因的结构及在大肠杆菌中表达的研究
2
作者
李戎锋
王以光
《中国抗生素杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1997年第5期321-327,共7页
对来自重组质粒p6BC12外源片段上的1.3kb片段进行核苷酸序列分析,结果表明整个片段的G+C含量为68.6%,基因结构符合链霉菌基因特点,其上存在一个完整的开放阅读框架(ORF),由405个碱基组成,编码134个...
对来自重组质粒p6BC12外源片段上的1.3kb片段进行核苷酸序列分析,结果表明整个片段的G+C含量为68.6%,基因结构符合链霉菌基因特点,其上存在一个完整的开放阅读框架(ORF),由405个碱基组成,编码134个氨基酸,起始密码为ATG,终止密码为TGA,起始密码上游有保守的SD序列GGAGG。推测的-10区为CAGCCT,-35区为TTGCAG。终止密码下游有一个长为18bp的反转重复序列。根据基因定位的结果,认为是thienamycin环化酶基因。它与异青霉素N合成酶基因连锁。与S.clavuligerus中异青霉素N合成酶及克拉维胺酸合成酶相比氨基酸序列的同源性极低,表明这可能是一个新的基因。利用PCR技术将环化酶基因扩增并克隆至大肠杆菌高表达载体pT7-7,使其在大肠杆菌中得到表达,同位素参入实验结果表明蛋白分子量为14.5kD,与理论值相符。表达产物在体外可分别将纯化的thienamycin环化酶基因阻断变株Y3的中间产物和Y3发酵液转化为具抗菌活性物质。
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关键词
thienamycin
环化酶
基因表达
抗生素
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职称材料
题名
牲畜链霉菌(Streptomyces cattleya)thienamycin合成阻断变株的筛选、阻断部位的确定及变株原生质体的研究
被引量:
1
1
作者
李戎锋
王以光
机构
中国医学科学院协和医科大学医药生物技术研究所
出处
《中国抗生素杂志》
CSCD
北大核心
1996年第2期89-93,共5页
文摘
以thienamycin(TNM)产生菌S.cattleya为出发菌株,利用终浓度为1.5mg/ml强诱变剂亚硝基胍在pH9.0、37℃条件下对其孢子悬液处理30min,得到稳定的TNM生物合成阻断变株Y_3。纸层析后进行茚三酮显迹和生物显迹表明Y_3变株积累一种无活性中间产物,其迁移率不同于TNM。建立了Y_3变株中间产物的分离纯化方法。酸水解和氨基酸组分分析表明Y_3中间产物为谷氨酸和丙氨酸组成的二肽,可能是形成碳青霉烯双环母核的底物,提示丙氨酸可能也是TNM的前体,Y_3变株阻断在形成碳青霉烯双环母核的环化步骤。Y_3变株具有较高的原生质体形成率和再生率。原生质体在40℃进行处理可以在不影响再生率的前题下提高DNA转化率。通过以上研究建立了以Y_3变株为宿主的TNM环化酶基因克隆受体系统。
关键词
牲畜链霉菌
阻断变株
原生质体
thienamycin
Keywords
S.cattleya
Block mutant
Protoplast
Thienamycin
分类号
TQ465.2 [化学工程—制药化工]
TQ927 [轻工技术与工程—发酵工程]
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职称材料
题名
Thienamycin环化酶基因的结构及在大肠杆菌中表达的研究
2
作者
李戎锋
王以光
机构
中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所
出处
《中国抗生素杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1997年第5期321-327,共7页
基金
国家自然科学基金
文摘
对来自重组质粒p6BC12外源片段上的1.3kb片段进行核苷酸序列分析,结果表明整个片段的G+C含量为68.6%,基因结构符合链霉菌基因特点,其上存在一个完整的开放阅读框架(ORF),由405个碱基组成,编码134个氨基酸,起始密码为ATG,终止密码为TGA,起始密码上游有保守的SD序列GGAGG。推测的-10区为CAGCCT,-35区为TTGCAG。终止密码下游有一个长为18bp的反转重复序列。根据基因定位的结果,认为是thienamycin环化酶基因。它与异青霉素N合成酶基因连锁。与S.clavuligerus中异青霉素N合成酶及克拉维胺酸合成酶相比氨基酸序列的同源性极低,表明这可能是一个新的基因。利用PCR技术将环化酶基因扩增并克隆至大肠杆菌高表达载体pT7-7,使其在大肠杆菌中得到表达,同位素参入实验结果表明蛋白分子量为14.5kD,与理论值相符。表达产物在体外可分别将纯化的thienamycin环化酶基因阻断变株Y3的中间产物和Y3发酵液转化为具抗菌活性物质。
关键词
thienamycin
环化酶
基因表达
抗生素
Keywords
Thienamycin, Cyclase gene, DNA sequencing, Gene expression
分类号
TQ465.1 [化学工程—制药化工]
R394.8 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牲畜链霉菌(Streptomyces cattleya)thienamycin合成阻断变株的筛选、阻断部位的确定及变株原生质体的研究
李戎锋
王以光
《中国抗生素杂志》
CSCD
北大核心
1996
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
Thienamycin环化酶基因的结构及在大肠杆菌中表达的研究
李戎锋
王以光
《中国抗生素杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1997
0
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职称材料
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引证文献
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