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火鸡组织滴虫ME 1基因的原核表达及其定位分析
1
作者
李在凡
陈晨
+5 位作者
陈乔光
王双
刘丹丹
候照峰
陶建平
许金俊
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期32-37,50,共7页
为研究火鸡组织滴虫(Histomonas meleagridis)胞质烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)依赖性苹果酸酶(ME 1)的抗原性及其在火鸡组织滴虫中的定位,本研究根据本实验室前期对火鸡组织滴虫ME 1基因的测序结果设计引物,以虫体cDNA为模板,经RT-...
为研究火鸡组织滴虫(Histomonas meleagridis)胞质烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)依赖性苹果酸酶(ME 1)的抗原性及其在火鸡组织滴虫中的定位,本研究根据本实验室前期对火鸡组织滴虫ME 1基因的测序结果设计引物,以虫体cDNA为模板,经RT-PCR扩增火鸡组织滴虫ME 1(HmME 1)基因,结果显示HmME 1基因全长1182 bp,将其克隆至pET28a(+)构建重组表达载体后转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,利用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白rHmME 1,经SDS-PAGE和western blot鉴定,结果显示,rHmME 1以可溶形式存在,相对分子量约为46 ku,且纯化的rHmME 1条带单一,浓度为0.4 mg/mL。将该纯化的rHmME 1免疫小鼠,制备该重组蛋白的鼠抗血清(多克隆抗体),采用间接ELISA方法检测多克隆抗体的效价,结果显示制备的多克隆抗体效价为1∶409600。采用western blot分别检测rHmME 1与制备的鼠源rHmME 1阳性血清和鸡源火鸡组织滴虫阳性血清的反应原性,以及鉴定虫体天然表达的HmME 1蛋白与制备的鼠源rHmME 1阳性血清的反应原性,结果显示rHmME 1蛋白能同时被鸡源火鸡组织滴虫阳性血清及鼠源rHmME 1阳性血清特异性识别,制备的鼠源rHmME 1阳性血清也可以与虫体天然表达的HmME 1蛋白反应。利用间接免疫荧光试验(IFA)对虫体内的HmME 1蛋白进行定位分析,结果显示HmME 1广泛存在于火鸡组织滴虫的胞质内。上述结果首次表明,HmME 1的反应原性及抗原性均较强,可以作为火鸡组织滴虫重组亚单位疫苗研制的潜在靶标,该结果为进一步研究火鸡组织滴虫的致病机制及疫苗研制奠定了基础。
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关键词
火鸡组织滴虫
ME
1蛋白
原核表达
抗原性
定位
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题名
火鸡组织滴虫ME 1基因的原核表达及其定位分析
1
作者
李在凡
陈晨
陈乔光
王双
刘丹丹
候照峰
陶建平
许金俊
机构
扬州大学兽医学院
江苏动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期32-37,50,共7页
基金
国家自然科学基金面上项目(31772727)
江苏高校优势学科建设三期工程资助项目。
文摘
为研究火鸡组织滴虫(Histomonas meleagridis)胞质烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)依赖性苹果酸酶(ME 1)的抗原性及其在火鸡组织滴虫中的定位,本研究根据本实验室前期对火鸡组织滴虫ME 1基因的测序结果设计引物,以虫体cDNA为模板,经RT-PCR扩增火鸡组织滴虫ME 1(HmME 1)基因,结果显示HmME 1基因全长1182 bp,将其克隆至pET28a(+)构建重组表达载体后转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,利用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白rHmME 1,经SDS-PAGE和western blot鉴定,结果显示,rHmME 1以可溶形式存在,相对分子量约为46 ku,且纯化的rHmME 1条带单一,浓度为0.4 mg/mL。将该纯化的rHmME 1免疫小鼠,制备该重组蛋白的鼠抗血清(多克隆抗体),采用间接ELISA方法检测多克隆抗体的效价,结果显示制备的多克隆抗体效价为1∶409600。采用western blot分别检测rHmME 1与制备的鼠源rHmME 1阳性血清和鸡源火鸡组织滴虫阳性血清的反应原性,以及鉴定虫体天然表达的HmME 1蛋白与制备的鼠源rHmME 1阳性血清的反应原性,结果显示rHmME 1蛋白能同时被鸡源火鸡组织滴虫阳性血清及鼠源rHmME 1阳性血清特异性识别,制备的鼠源rHmME 1阳性血清也可以与虫体天然表达的HmME 1蛋白反应。利用间接免疫荧光试验(IFA)对虫体内的HmME 1蛋白进行定位分析,结果显示HmME 1广泛存在于火鸡组织滴虫的胞质内。上述结果首次表明,HmME 1的反应原性及抗原性均较强,可以作为火鸡组织滴虫重组亚单位疫苗研制的潜在靶标,该结果为进一步研究火鸡组织滴虫的致病机制及疫苗研制奠定了基础。
关键词
火鸡组织滴虫
ME
1蛋白
原核表达
抗原性
定位
Keywords
Histomonas meleagridis
ME 1
prokaryotic expression
antigenicity
localization
分类号
S852.7 [农业科学—基础兽医学]
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作者
出处
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1
火鸡组织滴虫ME 1基因的原核表达及其定位分析
李在凡
陈晨
陈乔光
王双
刘丹丹
候照峰
陶建平
许金俊
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
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