为了在体外细胞水平模拟多浪绵羊肌肉生长发育过程,本研究以多浪绵羊为试验动物,采用胶原酶和胰酶两步酶消化法分离多浪绵羊骨骼肌卫星细胞(satellite cells,SCs),并利用差速贴壁的方法纯化分离得到的SCs。利用免疫荧光技术检测SCs标记...为了在体外细胞水平模拟多浪绵羊肌肉生长发育过程,本研究以多浪绵羊为试验动物,采用胶原酶和胰酶两步酶消化法分离多浪绵羊骨骼肌卫星细胞(satellite cells,SCs),并利用差速贴壁的方法纯化分离得到的SCs。利用免疫荧光技术检测SCs标记基因Desmin、Pax7和MyoD1的表达情况,鉴定分离得到的SCs。采用血清撤离的方法诱导SCs向成肌方向分化。通过显微镜观察和成肌分化标记基因肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)的免疫荧光,检测肌管的形成情况。通过对SCs标记基因Desmin、Pax7和MyoD1的免疫荧光鉴定,确认本研究成功分离得到多浪绵羊SCs。采用血清撤离的方法诱导SCs成肌分化,显微镜观察和MHC免疫荧光可以明显观察和检测到肌管的形成。本研究对多浪绵羊SCs成功地进行了分离和鉴定,并建立了体外培养条件下多浪绵羊SCs的成肌诱导分化。展开更多
应用绵羊精子提取物体外激活绵羊体细胞核移植胚和山羊-绵羊异种核移植胚,比较了不同浓度的绵羊精子提取物对绵羊同种和异种重构胚的激活作用,并与传统的化学激活方法对重构胚的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数做了比较。结果表明,绵羊精子...应用绵羊精子提取物体外激活绵羊体细胞核移植胚和山羊-绵羊异种核移植胚,比较了不同浓度的绵羊精子提取物对绵羊同种和异种重构胚的激活作用,并与传统的化学激活方法对重构胚的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数做了比较。结果表明,绵羊精子提取物可以有效地激活绵羊体细胞核移植胚和山羊-绵羊异种核移植胚,每一重构胚注射3 pL浓度为5 mg/mL的绵羊精子提取物,对同种和异种胚的发育效果均为最好,并显著高于其他试验组(P<0.05)。注射绵羊精子提取物对绵羊-山羊异种核移植胚的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数的影响,与离子霉素联合6-DAMP激活法差异不显著(P>0.05)。注射绵羊精子提取物对绵羊同种核移植胚的卵裂率和囊胚率的影响,与离子霉素联合6-DAMP激活法差异也不显著(P>0.05),但精子提取物注射法的绵羊核移植胚的囊胚细胞数显著(P<0.05)高于化学激活法的细胞数(72.4 vs 65.2)。展开更多
卵母细胞是胚胎工程技术研究中最为重要的一种试验材料,卵母细胞的体外成熟(maturation in vitro,IVM)可以为用体细胞核移植的方法生产大型转基因动物的研究提供大量MⅡ期卵母细胞,同样也是动物体外受精技术的关键环节。作者就卵母细胞...卵母细胞是胚胎工程技术研究中最为重要的一种试验材料,卵母细胞的体外成熟(maturation in vitro,IVM)可以为用体细胞核移植的方法生产大型转基因动物的研究提供大量MⅡ期卵母细胞,同样也是动物体外受精技术的关键环节。作者就卵母细胞体外成熟的影响因素做了简要的论述,主要介绍了卵母细胞来源、其培养系统、激素和生长因子等因素对卵母细胞体外成熟的影响。展开更多
文摘为了在体外细胞水平模拟多浪绵羊肌肉生长发育过程,本研究以多浪绵羊为试验动物,采用胶原酶和胰酶两步酶消化法分离多浪绵羊骨骼肌卫星细胞(satellite cells,SCs),并利用差速贴壁的方法纯化分离得到的SCs。利用免疫荧光技术检测SCs标记基因Desmin、Pax7和MyoD1的表达情况,鉴定分离得到的SCs。采用血清撤离的方法诱导SCs向成肌方向分化。通过显微镜观察和成肌分化标记基因肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)的免疫荧光,检测肌管的形成情况。通过对SCs标记基因Desmin、Pax7和MyoD1的免疫荧光鉴定,确认本研究成功分离得到多浪绵羊SCs。采用血清撤离的方法诱导SCs成肌分化,显微镜观察和MHC免疫荧光可以明显观察和检测到肌管的形成。本研究对多浪绵羊SCs成功地进行了分离和鉴定,并建立了体外培养条件下多浪绵羊SCs的成肌诱导分化。
文摘应用绵羊精子提取物体外激活绵羊体细胞核移植胚和山羊-绵羊异种核移植胚,比较了不同浓度的绵羊精子提取物对绵羊同种和异种重构胚的激活作用,并与传统的化学激活方法对重构胚的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数做了比较。结果表明,绵羊精子提取物可以有效地激活绵羊体细胞核移植胚和山羊-绵羊异种核移植胚,每一重构胚注射3 pL浓度为5 mg/mL的绵羊精子提取物,对同种和异种胚的发育效果均为最好,并显著高于其他试验组(P<0.05)。注射绵羊精子提取物对绵羊-山羊异种核移植胚的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数的影响,与离子霉素联合6-DAMP激活法差异不显著(P>0.05)。注射绵羊精子提取物对绵羊同种核移植胚的卵裂率和囊胚率的影响,与离子霉素联合6-DAMP激活法差异也不显著(P>0.05),但精子提取物注射法的绵羊核移植胚的囊胚细胞数显著(P<0.05)高于化学激活法的细胞数(72.4 vs 65.2)。
文摘卵母细胞是胚胎工程技术研究中最为重要的一种试验材料,卵母细胞的体外成熟(maturation in vitro,IVM)可以为用体细胞核移植的方法生产大型转基因动物的研究提供大量MⅡ期卵母细胞,同样也是动物体外受精技术的关键环节。作者就卵母细胞体外成熟的影响因素做了简要的论述,主要介绍了卵母细胞来源、其培养系统、激素和生长因子等因素对卵母细胞体外成熟的影响。
