响应面法优化里氏木霉Rut C-30产纤维素酶液体培养基 被引量：21

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作者 李勇昊 姜永生 +3 位作者 周长海 顾芮萌 孙文良 田朝光 《中国酿造》 CAS 2012年第4期29-32,共4页

该试验在单因素对里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut C-30产纤维素酶的液体培养基优化的基础上,以滤纸酶活为响应值,采用响应面法确定其最佳培养基。首先通过Plackett-Burman(PB)设计筛选出影响滤纸酶活的显著因素,结晶纤维素和麸皮;通... 该试验在单因素对里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut C-30产纤维素酶的液体培养基优化的基础上,以滤纸酶活为响应值,采用响应面法确定其最佳培养基。首先通过Plackett-Burman(PB)设计筛选出影响滤纸酶活的显著因素,结晶纤维素和麸皮;通过最陡爬坡试验逼近最大酶活力区域;最后通过Central Composite Design(CCD)设计及响应面分析确定产酶最佳培养基,其中影响酶活的显著性因素结晶纤维素41.8g,麸皮19.1g。经过优化,滤纸酶活力最高为8.21U/mL,比单因素优化结果7.03U/mL提高了16.78%,同时测得CMC酶活为63.64IU/mL,木聚糖酶活为27.4IU/mL,葡萄糖苷酶酶活0.96IU/mL。 展开更多

关键词 纤维素酶 里氏木霉RutC-30 液体发酵 响应面法 滤纸酶活

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基于新兴磁共振成像技术-VBM的认知障碍相关疾病患者脑结构变化研究进展

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作者 关莹 李勇昊 +7 位作者 唐祎周 辛贵乐 李季 王璐 樊宇婷 逄梦存 陈辉 于国强 《山东医药》 CAS 2024年第30期102-105,共4页

认知障碍是一种中枢神经退行性病变,常见的认知障碍相关疾病有:阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)、轻度认知障碍(mild cognitive impairment,MCI)、血管性痴呆(vascular dementia,VaD)、帕金森病性痴呆及2型糖尿病(type 2 diab... 认知障碍是一种中枢神经退行性病变,常见的认知障碍相关疾病有:阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)、轻度认知障碍(mild cognitive impairment,MCI)、血管性痴呆(vascular dementia,VaD)、帕金森病性痴呆及2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)相关认知障碍等。基于体素的形态测量学技术(voxel-based morphometry,VBM)是一种新兴的磁共振成像技术,可准确分析认知障碍患者脑结构变化情况。AD的VBM表现为内侧颞叶、海马及丘脑等部位脑灰质萎缩,MCI的VBM表现为内侧颞叶结构及颞叶和额叶灰质体积减少,VaD的VBM表现为右侧海马、双侧丘脑、中央后回等脑区灰质容积减小。帕金森病性痴呆的VBM表现为双侧楔前叶和后扣带回皮层的灰质减少,T2DM相关认知障碍的VBM表现为脑组织皮层下灰质核团未见明显萎缩。 展开更多

关键词 磁共振成像技术 基于体素的形态测量学技术 认知障碍 阿尔茨海默病 轻度认知障碍 血管性痴呆 帕金森病性痴呆 2型糖尿病相关认知障碍

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头穴丛刺联合取食训练对2型糖尿病认知障碍大鼠海马神经元损伤的治疗作用

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作者 关莹 逄梦存 +5 位作者 樊宇婷 辛贵乐 王璐 李勇昊 陈辉 李季 《山东医药》 CAS 2024年第32期6-10,共5页

目的观察头穴丛刺联合取食训练对2型糖尿病(T2DM)认知障碍大鼠海马神经元损伤的治疗作用。方法健康雄性SD大鼠72只,随机分为对照组、T2DM组、模型组、头穴丛刺组、取食训练组、联合组,每组12只。对照组常规饲养,T2DM组制备T2DM模型,模... 目的观察头穴丛刺联合取食训练对2型糖尿病(T2DM)认知障碍大鼠海马神经元损伤的治疗作用。方法健康雄性SD大鼠72只,随机分为对照组、T2DM组、模型组、头穴丛刺组、取食训练组、联合组,每组12只。对照组常规饲养,T2DM组制备T2DM模型,模型组、头穴丛刺组、取食训练组和联合组制作T2DM认知障碍模型。头穴丛刺组予头穴丛刺,取食训练组进行取食训练,联合组在头穴丛刺长留针期间进行取食训练;对照组、T2DM组、模型组不予任何干预。分别于造模14、28 d后,采用Morris水迷宫评价大鼠学习和记忆能力;处死大鼠取海马组织,透射电镜下观察海马组织超微结构,采用ELISA法检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA),采用Western blotting法检测脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白。结果与T2DM组相比,模型组逃避潜伏期延长,穿越平台次数和目标象限停留时间缩短,海马神经元髓鞘不完整,线粒体呈空泡化倾向、嵴溶解消失,海马组织SOD活性、BDNF蛋白表达降低,MDA含量增加(P均<0.05)。与模型组相比,头穴丛刺组、取食训练组、联合组逃避潜伏期缩短,穿越平台次数和目标象限停留时间延长,海马神经元超微结构改变减轻,海马组织SOD活性、BDNF蛋白表达增加,MDA含量减少(P均<0.05)。联合组各项优于头穴丛刺组和取食训练组,且造模28 d指标优于造模14 d(P均<0.05)。结论头穴丛刺联合取食训练治疗能够减轻氧化应激损伤,修复海马神经元超微结构,改善T2DM认知障碍大鼠学习记忆功能,且治疗时间越长,效果越显著。 展开更多

关键词 头针疗法 运动疗法 认知障碍 2型糖尿病 氧化应激 海马CA1区

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日本酱油种类及其酿造工艺特点 被引量：14

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作者 周长海 徐文斌 +2 位作者 贾友刚 李勇昊 齐淑艳 《中国酿造》 CAS 北大核心 2011年第3期13-16,共4页

日本酱油最初的酿造工艺是从古代中国传入,在日本发展出很多独特的工艺,酿造出最常见的浓味酱油、淡味酱油、溜酱油、二次酿造酱油和白酱油5种日本式酱油。在酿造过程中的制曲、装料、发酵管理、压榨、沉淀等工艺过程跟国内的多数酱油... 日本酱油最初的酿造工艺是从古代中国传入,在日本发展出很多独特的工艺,酿造出最常见的浓味酱油、淡味酱油、溜酱油、二次酿造酱油和白酱油5种日本式酱油。在酿造过程中的制曲、装料、发酵管理、压榨、沉淀等工艺过程跟国内的多数酱油酿造工艺相似。因原料和工艺的差别,酿造出如二次酿造酱油及白酱油等独特的产品。 展开更多

关键词 日本酱油 酱油历史 酱油种类 酿造工艺

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低鱼粉幼鲤饲料中添加DL-蛋氨酸及其羟基类似物的效果比较 被引量：1

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作者 周长海 贾友刚 +3 位作者 齐淑艳 李新帅 徐文斌 李勇昊 《科学养鱼》 北大核心 2011年第4期65-66,共2页

鱼类生长发育需要饲料的蛋白含量较高,鱼粉作为一种优质的蛋白质供体,在水产养殖中广泛应用,但由于鱼粉价格的上涨,鱼类养殖成本也随之升高,因此,在未来的水产养殖中鱼粉的使用量将会慢慢受到限制。用植物性蛋白来代替鱼类日粮中的鱼粉... 鱼类生长发育需要饲料的蛋白含量较高,鱼粉作为一种优质的蛋白质供体,在水产养殖中广泛应用,但由于鱼粉价格的上涨,鱼类养殖成本也随之升高,因此,在未来的水产养殖中鱼粉的使用量将会慢慢受到限制。用植物性蛋白来代替鱼类日粮中的鱼粉是目前的一个发展趋势,但植物性蛋白中往往缺乏一些必需氨基酸,不能满足鱼类生长的需要。蛋氨酸是鱼类的第一限制性氨基酸,也是植物性蛋白中所缺乏的氨基酸,向鱼类饲料中添加蛋氨酸来提高鱼类生产性能已有报道。 展开更多

关键词 DL-蛋氨酸 鱼类饲料 羟基类似物 鱼粉 植物性蛋白 鱼类生长 必需氨基酸 幼鲤

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纤维二糖磷酸化酶表达条件的优化及其酶学性质研究 被引量：1

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作者 彭念 陈婷婷 +5 位作者 王璐 樊俊萍 高玉杉 冉小琴 刘露露 李勇昊 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第16期125-131,共7页

纤维二糖磷酸化酶(cellobiose phosphorylase,CBP)磷酸化裂解纤维二糖为葡萄糖-1-磷酸,它是木质纤维素转化淀粉的关键酶。该研究将来源于Clostridium thermocellum YM4的cbp基因通过表达载体pET-28a(+)构建重组菌Rosetta(DE3)/pET-28a-... 纤维二糖磷酸化酶(cellobiose phosphorylase,CBP)磷酸化裂解纤维二糖为葡萄糖-1-磷酸,它是木质纤维素转化淀粉的关键酶。该研究将来源于Clostridium thermocellum YM4的cbp基因通过表达载体pET-28a(+)构建重组菌Rosetta(DE3)/pET-28a-CBP用于表达CBP。对其诱导表达条件进行优化,结果显示当诱导温度、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)浓度和诱导时间分别为15℃、0.2 mmol/L和12 h时CBP酶活力最高,为0.47 IU/mL。进一步利用Ni柱分离纯化出带有His标签的CBP,结果表明该重组酶分子质量为95 kDa,比酶活1.03 IU/mg;最适反应温度60℃,最适反应pH 6,半失活时间为60 min;金属离子Cu^(2+)显示出对该酶有强烈的抑制作用,然后依次是Zn^(2+)、Fe^(3+)、Ca^(2+)、Mn^(4+)(P<0.05);而K^(+)、Mg^(2+)和Na^(+)对该酶活力无显著性影响(P>0.05);最后对重组CBP的动力学参数进行了表征,K_(m)值为19.61μmol/mL,V_(max)值为1.19μmol/(mL·min)且K_(cat)值为21.38 s^(-1)。 展开更多

关键词 纤维二糖磷酸化酶 重组表达 大肠杆菌 酶学性质 生物催化

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大肠杆菌焦磷酸酶的表达及其酶学性质研究

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作者 王赞丞 王璐 +4 位作者 樊俊萍 陈雨点 陈婷婷 刘露露 李勇昊 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第9期65-71,共7页

该研究通过聚合酶链式反应(PCR)扩增克隆大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)的焦磷酸酶(PPase)基因,采用无缝克隆技术构建焦磷酸酶表达载体pET-28a-ppa,并转化至感受态E.coliRosetta(DE3),构建重组菌株E.coli PPa.采用单因素试验... 该研究通过聚合酶链式反应(PCR)扩增克隆大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)的焦磷酸酶(PPase)基因,采用无缝克隆技术构建焦磷酸酶表达载体pET-28a-ppa,并转化至感受态E.coliRosetta(DE3),构建重组菌株E.coli PPa.采用单因素试验对其诱导表达条件进行优化,并进一步采用镍离子磁珠纯化重组PPas,研究其酶学性质。结果表明,成功构建重组菌株E.coliPPa,当异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、诱导温度和诱导时间分别为0.4 mmolL、20℃和8h时,重组PPase活性达到最高,为129.05 IU/mL,是优化前的3.14倍。重组PPase的理论分子质量为19.7kDa;最适反应温度和pH分别为55℃和9,在温度10~30℃及pH 7.0~9.0范围内稳定;金属离子K^(+)、Mg^(2+)和Na^(+)可极显著性提高该酶活性(P<0.01),而Mn^(2+)和Zn^(2+)对该酶有极显著抑制作用(P<0.01);重组PPase的动力学参数米氏常数(K_(m)值)为3.58 μmol/mL、最大反应速率(V_(max)值)为314.66μmol/(mL·min),催化常数(K_(cat)值)为87300.56S^(-1),半失活时间为10 min。该研究为后续工业化生产PPase及对该酶的理性设计提供依据。 展开更多

关键词 焦磷酸酶 大肠杆菌 诱导表达 酶学性质

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基于MOOC的制药工程专业《专业英语》课程改革研究 被引量：2

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作者 姚波 张晓敏 李勇昊 《英语广场（学术研究）》 2019年第2期103-104,共2页

随着新学科的不断涌现,英语教学与特定学科相结合正逐渐成为学界关注的焦点。近年来相关实践探索的大量涌现也能够证明这一认知。基于此,本文简单分析了制药工程专业《专业英语》课程的重要性及其面临的挑战,并详细探讨了基于MOOC的课... 随着新学科的不断涌现,英语教学与特定学科相结合正逐渐成为学界关注的焦点。近年来相关实践探索的大量涌现也能够证明这一认知。基于此,本文简单分析了制药工程专业《专业英语》课程的重要性及其面临的挑战,并详细探讨了基于MOOC的课程改革路径,希望由此能够为相关教职人员带来一定启发。 展开更多

关键词 MOOC 专业英语 制药工程专业 VR技术

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农杆菌介导小球藻快速转化方法的建立与条件优化 被引量：3

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作者 郭娟娟 李江洪 +4 位作者 龙婷婷 莫易 于静泽 张鹏 李勇昊 《中国酿造》 CAS 北大核心 2021年第4期56-60,共5页

基于根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的方法实现异养蛋白核小球藻快速遗传转化,并优化转化条件。结果表明,小球藻异养生长条件的碳氮组合配比为葡萄糖20 g/L和酵母粉2 g/L时,生长速率为自养的3~5倍;根瘤农杆菌GV3101和LBA440... 基于根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的方法实现异养蛋白核小球藻快速遗传转化,并优化转化条件。结果表明,小球藻异养生长条件的碳氮组合配比为葡萄糖20 g/L和酵母粉2 g/L时,生长速率为自养的3~5倍;根瘤农杆菌GV3101和LBA4404均可成功实现对异养小球藻的遗传转化,且转化效率无显著性差异(P>0.05)。最优转化条件为根瘤农杆菌GV3101初始OD600 nm值=0.8,小球藻(Chlorella pyrenoidosa)浓度为107个/mL,各取100μL混合涂布在pH=5.4、乙酰丁香酮浓度为200μmol/L的CM平板上,24℃避光培养40 h后转到筛选平板,仅2 d转化子便清晰可见,数目达88个/106微藻。转化过程整体耗时仅5 d,普遍比自养微藻转化时间缩短3倍以上,为小球藻代谢工程改造提供技术手段,同时为其他可异养培养微藻的短时高效遗传转化提供科学依据。 展开更多

关键词 蛋白核小球藻 根瘤农杆菌 遗传转化

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过表达内源Trswo1基因提高里氏木霉纤维素酶对玉米秸秆水解效率的研究 被引量：2

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作者 莫易 冉小琴 +4 位作者 王赞丞 陈雨点 彭念 李江洪 李勇昊 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第14期60-66,共7页

利用β-葡萄糖苷酶的转糖苷活性制备廉价葡萄糖-槐糖混合物(mixture of glucose and sophorose, MGD)作为诱导物被成功用于诱导里氏木霉(Trichoderma reesei)高效合成纤维素酶,但蛋白质组学显示相比于纤维素作为诱导物,膨胀素基因(Trsw... 利用β-葡萄糖苷酶的转糖苷活性制备廉价葡萄糖-槐糖混合物(mixture of glucose and sophorose, MGD)作为诱导物被成功用于诱导里氏木霉(Trichoderma reesei)高效合成纤维素酶,但蛋白质组学显示相比于纤维素作为诱导物,膨胀素基因(Trswo1)显著性低表达导致纤维素酶水解效率低。因此利用组成型强启动子丙酮酸脱羧酶1(pyruvate decarboxylase1, PDC1)在T.reesei Rut C30中过表达内源Trswo1基因,2个T.reesei阳性转化子OEswo1-1和OEswo1-2的Trswo1基因转录水平分别提高了4.65倍和3.91倍,虽然T.reesei OEswo1-1和OEswo1-2在MGD诱导下合成的纤维素酶活性、内切纤维素酶活性和外切纤维素酶活性与野生菌酶活性均无显著性差异,但所产纤维素酶对玉米秸秆的水解效率分别提高了6.98%和13.93%。进一步通过X射线衍射(X-ray diffraction, XRD)和扫描电镜(scanning electron microscope, SEM)显示水解效率提高主要是由于木质纤维素结晶度的降低,同时纤维结构有不同程度的疏松和崩解。该研究成果对T.reesei利用可溶性诱导物合成纤维素酶系中纤维素降解辅助蛋白含量低的问题具有一定意义。 展开更多

关键词 生物炼制 里氏木霉 纤维素酶 膨胀素 玉米秸秆 水解

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蛋白核小球藻的絮凝与对重金属Cd^(2+)的吸附性能研究

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作者 李江洪 李勇昊 +3 位作者 刘文书 彭念 李倩 陈雨点 《重庆科技学院学报（自然科学版）》 CAS 2022年第1期63-67,共5页

利用光合效率高、生物吸附力强且可以大规模低成本开放培养的蛋白核小球藻吸附重金属Cd^(2+)是一种极具前景的水处理手段。藻细胞密度低,藻液处理量特别大,采收成本高成为限制其应用的重要瓶颈之一。结果表明,在蛋白核小球藻溶液中加入0... 利用光合效率高、生物吸附力强且可以大规模低成本开放培养的蛋白核小球藻吸附重金属Cd^(2+)是一种极具前景的水处理手段。藻细胞密度低,藻液处理量特别大,采收成本高成为限制其应用的重要瓶颈之一。结果表明,在蛋白核小球藻溶液中加入0.021%壳聚糖且pH为7时,蛋白核小球藻达到最佳絮凝状态,在此条件下,蛋白核小球藻对重金属Cd^(2+)的吸附率可以达到98.00%,吸附量为4.06 mg/g。实验证明,壳聚糖作为絮凝剂可实现低成本采收蛋白核小球藻且不影响其对重金属Cd^(2+)的吸附效果。 展开更多

关键词 壳聚糖 蛋白核小球藻 絮凝采收 重金属吸附 水处理

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过表达Trxyr1基因对里氏木霉合成纤维素酶的影响

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作者 刘文书 王赞丞 +4 位作者 高玉杉 莫易 彭念 冉小琴 李勇昊 《中国酿造》 CAS 北大核心 2023年第8期58-64,共7页

以里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut C30为出发菌株,利用组成型启动子(PDC1)过表达同源Trxyr1基因,探究阳性转化子T.reesei OExyr1在不同诱导物及非诱导条件下合成纤维素酶的情况,最后粗酶液被用于水解碱预处理的玉米秸秆以分析其催化... 以里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut C30为出发菌株,利用组成型启动子(PDC1)过表达同源Trxyr1基因,探究阳性转化子T.reesei OExyr1在不同诱导物及非诱导条件下合成纤维素酶的情况,最后粗酶液被用于水解碱预处理的玉米秸秆以分析其催化性能。结果表明,T.reesei OExyr1在葡萄糖-β二糖混合物诱导下纤维素酶活是野生型菌株的1.22倍;而以纤维素为诱导物,纤维素酶活可提高2.95倍;此外在非诱导条件下T.reesei OExyr1可合成纤维素酶;但T.reesei OExyr1所产纤维素酶对玉米秸秆的水解效率与野生型无显著性差异。以上结果说明不同诱导物下Trxyr1基因高表达均可提升纤维素酶产量,尤其对于固体纤维素诱导物,但Trxyr1基因表达量的提高对纤维素酶系影响不大。研究成果对阐明T.reesei合成纤维素酶的分子机制及构建高产纤维素酶菌株提供参考。 展开更多

关键词 里氏木霉 纤维素酶 诱导物 Trxyr1基因 转录因子 玉米秸秆

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