目的建立并评价基于光激化学发光分析(LICA)平台的牛奶过敏单组分(Bos d 5)特异性IgG_4抗体(sIgG_4)定量检测方法(sIgG_4-LICA)。方法以生物素标记的Bos d 5抗原、待检血清、抗人IgG_4抗体包被的发光微球和链霉亲合素包被的感光微球组...目的建立并评价基于光激化学发光分析(LICA)平台的牛奶过敏单组分(Bos d 5)特异性IgG_4抗体(sIgG_4)定量检测方法(sIgG_4-LICA)。方法以生物素标记的Bos d 5抗原、待检血清、抗人IgG_4抗体包被的发光微球和链霉亲合素包被的感光微球组成分析体系,基于LICA平台,采用间接法模式,建立Bos d 5 sIgG_4抗体定量检测方法(sIgG_4-LICA),并对其进行条件优化和性能评价。结果 sIgG_4-LICA方法的批内精密度、日间精密度和批间精密度分别为1.78%～3.13%、6.65%～8.41%和7.94%～12.30%,功能灵敏度为4.71 ng/mL,线性范围为28.13～1 800 ng/mL,线性回归方程为Y=0.98X-1.31(r^2=0.997),最大稀释度为1∶64,血红蛋白、三酰甘油、总胆红素、抗坏血酸及生物素的干扰率为-6.38%～8.60%。结论本研究建立的Bos d 5 sIgG_4抗体定量检测方法性能良好,可满足临床监测sIgG_4抗体的需要。展开更多
目的:建立表达蛋黄Gal d 6重组蛋白工程菌,并鉴定重组Gal d6蛋白免疫活性。方法:直接合成Gal d 6 DNA,与pET-28a构建重组质粒,转化E.coli BL21经IPTG诱导表达;优化表达条件制备重组Gal d 6蛋白,经镍离子亲和层析柱纯化得到纯品蛋白;纯化...目的:建立表达蛋黄Gal d 6重组蛋白工程菌,并鉴定重组Gal d6蛋白免疫活性。方法:直接合成Gal d 6 DNA,与pET-28a构建重组质粒,转化E.coli BL21经IPTG诱导表达;优化表达条件制备重组Gal d 6蛋白,经镍离子亲和层析柱纯化得到纯品蛋白;纯化Gal d6蛋白经间接ELISA及western blot鉴定Gal d 6蛋白免疫活性。结果:经DNA测序、SDS-PAGE、禽蛋过敏血清鉴定表达Gal d 6蛋白具有免疫活性,经镍柱亲和层析获得单一条带。该工程菌最佳表达条件为37℃,0.5 mmol/L IPTG,2 h,收获量每升菌液可收获重组蛋白约9.1 mg。重组蛋白与禽蛋过敏血清具有良好反应性。结论:建立稳定表达具有免疫活性的Gal d 6蛋白的工程菌株。展开更多
文摘目的建立并评价基于光激化学发光分析(LICA)平台的牛奶过敏单组分(Bos d 5)特异性IgG_4抗体(sIgG_4)定量检测方法(sIgG_4-LICA)。方法以生物素标记的Bos d 5抗原、待检血清、抗人IgG_4抗体包被的发光微球和链霉亲合素包被的感光微球组成分析体系,基于LICA平台,采用间接法模式,建立Bos d 5 sIgG_4抗体定量检测方法(sIgG_4-LICA),并对其进行条件优化和性能评价。结果 sIgG_4-LICA方法的批内精密度、日间精密度和批间精密度分别为1.78%～3.13%、6.65%～8.41%和7.94%～12.30%,功能灵敏度为4.71 ng/mL,线性范围为28.13～1 800 ng/mL,线性回归方程为Y=0.98X-1.31(r^2=0.997),最大稀释度为1∶64,血红蛋白、三酰甘油、总胆红素、抗坏血酸及生物素的干扰率为-6.38%～8.60%。结论本研究建立的Bos d 5 sIgG_4抗体定量检测方法性能良好,可满足临床监测sIgG_4抗体的需要。
文摘目的:建立表达蛋黄Gal d 6重组蛋白工程菌,并鉴定重组Gal d6蛋白免疫活性。方法:直接合成Gal d 6 DNA,与pET-28a构建重组质粒,转化E.coli BL21经IPTG诱导表达;优化表达条件制备重组Gal d 6蛋白,经镍离子亲和层析柱纯化得到纯品蛋白;纯化Gal d6蛋白经间接ELISA及western blot鉴定Gal d 6蛋白免疫活性。结果:经DNA测序、SDS-PAGE、禽蛋过敏血清鉴定表达Gal d 6蛋白具有免疫活性,经镍柱亲和层析获得单一条带。该工程菌最佳表达条件为37℃,0.5 mmol/L IPTG,2 h,收获量每升菌液可收获重组蛋白约9.1 mg。重组蛋白与禽蛋过敏血清具有良好反应性。结论:建立稳定表达具有免疫活性的Gal d 6蛋白的工程菌株。
