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参芪扶正注射液联合IFN-α对肝癌细胞STAT1基因表达的影响 被引量:3
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作者 陈晓珩 何蓓 +6 位作者 李会龙 户蕊 李璐 王鑫 汪唐顺 李乃卿 丁治国 《中国现代普通外科进展》 CAS 2017年第6期421-425,共5页
目的:研究参芪扶正注射液与干扰素α(IFN-α)联用时对肝癌细胞STAT1基因表达的影响,探讨其对IFN-α协同增效的作用机制。方法:运用MTT法检测IFN-α注射液单独或与参芪扶正注射液联合对MHCC97-L细胞增殖的影响;运用Real-time PCR和Wester... 目的:研究参芪扶正注射液与干扰素α(IFN-α)联用时对肝癌细胞STAT1基因表达的影响,探讨其对IFN-α协同增效的作用机制。方法:运用MTT法检测IFN-α注射液单独或与参芪扶正注射液联合对MHCC97-L细胞增殖的影响;运用Real-time PCR和Western-blot分别检测IFN-α单独或与参芪扶正注射液联用对STAT1 RNA和蛋白质表达的影响;构建STAT1干扰慢病毒载体并实现其在MHCC97-L中表达,通过RT-PCR、We s te rn-Blot验证其干扰STAT1表达的有效性;MTT法检测IFN-α单独或联合参芪扶正注射液对STAT1基因"沉默"细胞株增殖的影响。结果 :与单独使用IFN-α相比,参芪扶正注射液与IFN-α联用可以增强IFN-α对人肝癌MHCC97-L的抑制作用(P<0.01),并上调STAT1 mRNA(P<0.05)和蛋白质的表达(P<0.05);成功构建STAT1基因"沉默"的MHCC97-L细胞株;参芪扶正注射液协同IFN-α对STAT1基因"沉默"MHCC97-L的抑制率与单独使用IFN-α差异无统计学意义(P>0.05)。结论:参芪扶正注射液可上调人肝癌细胞MHCC97-L中STAT1的表达,从而提高IFN-α的疗效。 展开更多
关键词 肝癌 MHCC97- L STAT1 干扰素 α 参芪扶正注射液
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STAT1过表达慢病毒载体的构建及其在MHCC97L细胞中的表达 被引量:4
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作者 丁治国 何蓓 +3 位作者 陈晓珩 汪唐顺 高翔 李乃卿 《中国现代普通外科进展》 CAS 2013年第12期931-934,共4页
目的:构建STAT1基因过表达慢病毒载体并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中的表达。方法:根据人STAT1基因mRNA序列,全基因合成STAT1基因,构建至过表达载体并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒... 目的:构建STAT1基因过表达慢病毒载体并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中的表达。方法:根据人STAT1基因mRNA序列,全基因合成STAT1基因,构建至过表达载体并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L,用荧光定量PCR和Western blot检测原始细胞株(MHCC97L),稳转细胞株(MHCC97-stat1)中STAT1的表达情况,确定STAT1过表达的有效性。结果:测序证实STAT1基因过表达载体构建成功。过表达慢病毒包装成功。慢病毒转染人肝癌细胞MHCC97L 48 h后,STAT1基因在mRNA水平和蛋白质水平上表达显著增加。结论:STAT1基因过表达慢病毒载体构建成功,并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中的表达。 展开更多
关键词 肝肿瘤 MHCC97L细胞 STAT1基因 慢病毒载体
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人VEGF基因慢病毒介导RNA干扰有效靶点的设计及筛选 被引量:4
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作者 丁治国 何蓓 +3 位作者 陈晓珩 汪唐顺 高翔 李乃卿 《中国现代普通外科进展》 CAS 2013年第2期85-88,共4页
目的:设计并筛选人血管内皮生长因子(VEGF)有效RNA干扰片段,构建VEGF慢病毒表达载体。方法:对人VEGF基因编码区分析,筛选序列3条,阴性对照序列l条,通过连接线性化的plenti6.3-MIR载体,构建miRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α... 目的:设计并筛选人血管内皮生长因子(VEGF)有效RNA干扰片段,构建VEGF慢病毒表达载体。方法:对人VEGF基因编码区分析,筛选序列3条,阴性对照序列l条,通过连接线性化的plenti6.3-MIR载体,构建miRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒,测定其滴度。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L,用Real-time PCR检测干扰效果。结果:测序证实3个VEGF基因RNAi慢病毒载体质粒构建成功。慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒的滴度分别为3.23×109、3.30×109、3.73×109TU/mL。3个慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L后,VEGF基因在mRNA水平受到抑制,其中miR-200序列效果最佳,对VEGF基因表达的干扰效率可达72%。结论:成功构建并筛选了人VEGF基因RNAi慢病毒载体及有效靶点,为进一步深入研究VEGF基因与抗肿瘤药物药效关系提供实验基础。 展开更多
关键词 慢病毒载体 血管内皮生长因子基因 RNA干扰 MHCC97L细胞
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基于RNAi技术研究参芪扶正注射液联合IFN-α对肝癌细胞增殖能力的影响 被引量:4
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作者 陈晓珩 何蓓 +8 位作者 李会龙 李哲 王鑫 李璐 户蕊 黄盛 付金香 李乃卿 丁治国 《中国现代普通外科进展》 CAS 2018年第5期337-341,共5页
目的:研究参芪扶正注射液与干扰素α(IFN-α)联用时对肝癌细胞增殖能力的影响,并通过RNA干扰技术明确其对IFN-α协同增效的作用机制。方法:运用细胞增殖实验(MTT)技术检测IFN-α注射液(6000 IU)单独或与参芪扶正注射液(0.5 g/L)联合时对... 目的:研究参芪扶正注射液与干扰素α(IFN-α)联用时对肝癌细胞增殖能力的影响,并通过RNA干扰技术明确其对IFN-α协同增效的作用机制。方法:运用细胞增殖实验(MTT)技术检测IFN-α注射液(6000 IU)单独或与参芪扶正注射液(0.5 g/L)联合时对SMMC-7721细胞增殖能力的影响;用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术和蛋白质印迹法(Western-blot)分别检测IFN-α单独或与参芪扶正注射液联用时,实验组、阴性对照组(NaCl)和空白对照组中STAT1的RNA转录和蛋白质表达情况,确定参芪扶正注射液对STAT1转录和表达的影响;运用Western blot检验STAT1基因经RNA干扰后SMMC-7721的STAT1蛋白质表达,确定干扰效果;MTT实验检测IFN-α单独或联合参芪扶正注射液作用于STAT1基因"敲低"细胞株时,对细胞增殖能力的影响。结果:与单独使用IFN-α及参芪扶正注射液相比,小剂量参芪扶正注射液与IFN-α联用可以增强IFN-α对人肝癌细胞SMMC-7721增殖能力的抑制作用,并上调STAT1 mRNA和蛋白质的表达;SMMC-7721的STAT1基因"敲低"细胞株中STAT1蛋白表达明显降低;针对SMMC-7721的STAT1基因"敲低"细胞株,参芪扶正注射液协同IFN-α与单独IFN-α及阴性对照组相比,对细胞增殖能力的影响无显著性差异。结论:参芪扶正注射液通过上调人肝癌细胞SMMC-7721中STAT1的表达,是提升干扰素α对肝癌细胞增殖能力抑制作用的主要机制之一。 展开更多
关键词 参芪扶正注射液 IFN-Α SMMC-7721 RNAI
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VEGF干扰慢病毒载体的构建及其在MHCC97L细胞中的表达 被引量:2
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作者 丁治国 何蓓 +3 位作者 陈晓珩 汪唐顺 高翔 李乃卿 《中国医药导报》 CAS 2012年第35期11-13,共3页
目的构建VEGF基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中表达。方法根据人VEGF基因序列,设计并合成包含靶序列的互补DNA链,连接线性化的plenti6.3-MIR载体,构建miRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序... 目的构建VEGF基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中表达。方法根据人VEGF基因序列,设计并合成包含靶序列的互补DNA链,连接线性化的plenti6.3-MIR载体,构建miRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒,测定其滴度。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L,用Real-time PCR检测RNAi组(MHCC97-200)、阴性对照组(MHCC97-NEGA)和空白对照组(MHCC97-空白)中VEGF的表达情况,确定其干扰VEGF表达的有效性。结果测序证实慢VEGF基因RNAi病毒载体质粒构建成功。慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒的滴度为3.23×109TU/mL。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L 48 h后,VEGF基因在mRNA水平抑制了72.2%。结论 VEGF基因RNAi慢病毒载体构建成功,并实现在人肝癌细胞MHCC97L中的表达。 展开更多
关键词 VEGF基因 慢病毒载体 RNA干扰 MHCC97L细胞
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STAT1干扰慢病毒载体的构建及其基因沉默效应测定 被引量:2
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作者 丁治国 何蓓 +5 位作者 陈晓珩 李会龙 高翔 张韬 王鑫 李乃卿 《中国现代普通外科进展》 CAS 2015年第11期841-844,共4页
目的 :构建STAT1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并测定其基因沉默效应。方法 :根据人STAT1基因序列,设计干扰序列,将Oligo退火成双链并连接穿梭载体p LKO-1-EGFP-puro-sh RNA,构建sh RNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序... 目的 :构建STAT1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并测定其基因沉默效应。方法 :根据人STAT1基因序列,设计干扰序列,将Oligo退火成双链并连接穿梭载体p LKO-1-EGFP-puro-sh RNA,构建sh RNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L的STAT1过表达瘤株(MHCC97L-stat1),用Real-time PCR和Western Blot检测RNAi组(MHCC97L-stat1-sh RNA-1)和对照组(MHCC97L-stat1)中STAT1基因的表达情况,确定其干扰STAT1表达的有效性。结果:测序证实慢STAT1基因RNAi病毒载体质粒构建成功;慢病毒载体经293T细胞包装成功;慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株48 h后,STAT1基因在m RNA水平和蛋白质水平上表达明显降低。结论:STAT1基因RNAi慢病毒载体构建成功,能够在人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株中表达,并具有显著的基因沉默效果。 展开更多
关键词 STAT1基因 慢病毒载体 RNA干扰 MHCC97L细胞
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RNA干扰技术探讨参芪扶正注射液对MHCC97L细胞侵袭力的影响 被引量:2
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作者 陈晓珩 何蓓 +6 位作者 李会龙 户蕊 李璐 王鑫 汪唐顺 李乃卿 丁治国 《中国现代普通外科进展》 CAS 2017年第7期505-510,共6页
目的:通过检测参芪扶正注射液对肝癌MHCC97L细胞侵袭力及其VEGF基因表达的影响,明确其降低肝癌瘤株侵袭力的作用,并通过RNA干扰技术加以验证。方法:在MHCC97L体外培养系中加入参芪扶正注射液(0.5 g/L)作用24 h后,Transwell检测参芪扶正... 目的:通过检测参芪扶正注射液对肝癌MHCC97L细胞侵袭力及其VEGF基因表达的影响,明确其降低肝癌瘤株侵袭力的作用,并通过RNA干扰技术加以验证。方法:在MHCC97L体外培养系中加入参芪扶正注射液(0.5 g/L)作用24 h后,Transwell检测参芪扶正注射液对MHCC97L细胞侵袭性的影响;同时使用Real-time PCR和Western-blot分别检测药物组、阴性对照组和空白对照组中VEGF基因的转录与表达情况,确定参芪扶正注射液对VEGF基因转录与表达的影响;构建VEGF干扰慢病毒载体并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中表达,并通过RT-PCR、Western-Blot进行验证,确定其干扰VEGF基因表达的有效性;Transw ell检测参芪扶正注射液对VEGF"沉默"瘤株侵袭力的影响并与正常瘤株进行比较。结果:参芪扶正注射液能够降低MHCC97L细胞中VEGF基因的转录与表达(P<0.05),并能够降低肿瘤侵袭力(P<0.05);VEGF基因"沉默"瘤株构建成功;VEGF基因"沉默"后,参芪扶正注射液对MHCC97L瘤株侵袭力的影响不显著(P>0.05)。结论:参芪扶正注射液可以通过抑制MHCC97L细胞VEGF基因的表达以降低其侵袭力。 展开更多
关键词 肝肿瘤 参芪扶正注射液 VEGF 侵袭力
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针对人STAT1基因的RNA干扰有效靶点的设计与筛选 被引量:1
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作者 丁治国 何蓓 +5 位作者 陈晓珩 李会龙 高翔 张韬 王鑫 李乃卿 《中国现代普通外科进展》 CAS 2015年第12期925-928,共4页
目的:设计并筛选针对人STAT1基因有效的RNA干扰靶点。方法:根据人STAT1基因序列,设计3个干扰序列,将oligo退火成双链并连接穿梭载体pLKO-1-EGFP-puro-shRNA,构建shRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5a,进行测序验证。在脂质体介... 目的:设计并筛选针对人STAT1基因有效的RNA干扰靶点。方法:根据人STAT1基因序列,设计3个干扰序列,将oligo退火成双链并连接穿梭载体pLKO-1-EGFP-puro-shRNA,构建shRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5a,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L的STAT1过表达瘤株(MHCC97L-stat1),用Real-timePCR检测干扰效果。结果:测序证实3个STAT1基因RNAi病毒载体质粒构建成功;慢病毒载体经293T细胞包装成功;3个慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L-stat1瘤株48h后,STAT1基因在mRNA水平表达均受到抑制,其中MHCC9-L-stat1-shRNA-1序列效果最佳,对STAT1基因表达的干扰效率可达81.4%。结论:成功构建并筛选了人STAT1基因RNAi慢病毒载体及有效靶点,为进一步深入研究STAT1基因与抗肿瘤药物药效关系奠定基础。 展开更多
关键词 STAT1基因 慢病毒载体 RNA干扰 MHCC97L细胞
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高职院校影视后期制作课程的教学改革探讨 被引量:2
9
作者 李乃卿 《传媒论坛》 2019年第23期92-92,94,共2页
高职院校影视后期制作课程是影视专业中的核心课程,在当前的教学中,应重视发展学生的实践能力,因此需要对教学进行改革,有效地开展教学,使教学的质量提高。本文对高职院校影视后期制作课程的教学改革进行了阐述。
关键词 高职院校 影视后期制作 教学改革
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分析虚拟演播室技术在高职院校中的应用 被引量:1
10
作者 李乃卿 《传媒论坛》 2019年第22期132-132,135,共2页
随着我国教育水平不断发展完善,高职学校作为我国教育中的重点内容,一直以来都有着特殊的教育地位,为我们社会的发展不断地培养新型人才.近年来教育主题逐渐倾向于学生,社会需要创新性的人才,因此高职学校应当打破传统的教育模式,使用... 随着我国教育水平不断发展完善,高职学校作为我国教育中的重点内容,一直以来都有着特殊的教育地位,为我们社会的发展不断地培养新型人才.近年来教育主题逐渐倾向于学生,社会需要创新性的人才,因此高职学校应当打破传统的教育模式,使用新型的教育模式,带动学生学习的积极性.在这个背景下,虚拟演播室技术作为当前主要的多媒体技术之一,被充分地引入高职院校的课堂,应当根据高职院校的实际情况,不断地进行虚拟演播室技术的完善,带动学生学习水平的提高. 展开更多
关键词 虚拟演播室技术 高职院校 实际应用
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虚拟演播技术在影视传媒类专业教学中的应用
11
作者 李乃卿 《传媒论坛》 2018年第19期49-50,共2页
虚拟演播技术是影视制作中一个非常常见的演播手段,在各种娱乐、访谈类等节目中及一些影视作品中应用广泛,是一种将演播主体和虚拟场景相融合的新型演播系统,虚拟演播室不仅节省了节目制作费用,还使节目的创作和制作水平得到了提高。本... 虚拟演播技术是影视制作中一个非常常见的演播手段,在各种娱乐、访谈类等节目中及一些影视作品中应用广泛,是一种将演播主体和虚拟场景相融合的新型演播系统,虚拟演播室不仅节省了节目制作费用,还使节目的创作和制作水平得到了提高。本文针对虚拟演播的关键技术和对专业人才的要求进行了研究,并与影视传媒类专业的教学特点相结合,深入分析虚拟演播技术在播音主持、影视制作等传媒类专业教学模式的应用。 展开更多
关键词 传媒类 影视制作 虚拟演播技术 播音主持 专业教学
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在甘肃省高校推行TEQVOLY(乒乓排球)的可行性分析
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作者 李乃卿 《文体用品与科技》 2021年第11期140-141,共2页
Teqvoly是一种在传统排球基础上发展起来的新型排球运动。它可以提高运动员传球、防守的能力,并对来球迅速判断做出判断和思考下一步的动作。Teqvoly不是传统排球项目的竞争对手,而是对它的补充。Teqvoly受到欧洲排球俱乐部、学生及体... Teqvoly是一种在传统排球基础上发展起来的新型排球运动。它可以提高运动员传球、防守的能力,并对来球迅速判断做出判断和思考下一步的动作。Teqvoly不是传统排球项目的竞争对手,而是对它的补充。Teqvoly受到欧洲排球俱乐部、学生及体育爱好者喜欢,具有趣味性、竞技性、观赏性、放松性、高效性和安全性等特点。本文从甘肃省高校开展Teqvoly运动的现状及影响因素入手,对甘肃省高校开展Teqvoly运动的可行性进行分析,并对培养学生对排球的兴趣,乒乓排球运动引入甘肃省高校的教学环境、师资力量以及器材设施和教师学生对足球乒乓运动的认知和其他方面的调查分析综合分析了大连高中推广Teqvoly的可行性。 展开更多
关键词 乒乓排球 排球 高校体育
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