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牛源多杀性巴氏杆菌PlpE蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
被引量：
1
1
作者
张智
刘泽
+5 位作者
乌吉斯古楞
刘重阳
权璞宏
任旭荣
宋庆庆
关平原
《中国动物检疫》
CAS
2021年第1期94-99,共6页
为体外表达牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)PlpE基因及制备抗PlpE蛋白多克隆抗体,根据PlpE基因核酸序列设计了1对特异性引物,通过PCR扩增PlpE基因,构建重组质粒pET-32a-PlpE;摇菌提取质粒,进行双酶切鉴定,鉴定正确后将重组质...
为体外表达牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)PlpE基因及制备抗PlpE蛋白多克隆抗体,根据PlpE基因核酸序列设计了1对特异性引物,通过PCR扩增PlpE基因,构建重组质粒pET-32a-PlpE;摇菌提取质粒,进行双酶切鉴定,鉴定正确后将重组质粒pET-32a-PlpE转化至BL21(DE3)感受态细胞,加入IPTG进行诱导,对诱导蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定;使用纯化蛋白PlpE免疫北京大耳白兔,制备多克隆抗体,并进行间接ELISA和Western Blot分析。结果显示,扩增的PlpE基因大小为1050 bp,在原核细胞中诱导表达的PlpE蛋白约56 kDa。间接ELISA结果显示,所制备多克隆抗体效价可达1:512000;Western Blot结果显示,所制备多克隆抗体反应性良好。PlpE蛋白的成功表达和多克隆抗体的成功制备,为下一步多杀性巴氏杆菌诊断方法的建立和疫苗研发奠定了基础。
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关键词
多杀性巴氏杆菌
原核表达
PlpE基因
多克隆抗体
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题名
牛源多杀性巴氏杆菌PlpE蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
被引量：
1
1
作者
张智
刘泽
乌吉斯古楞
刘重阳
权璞宏
任旭荣
宋庆庆
关平原
机构
内蒙古农业大学兽医学院
金宇保灵生物药品有限公司
出处
《中国动物检疫》
CAS
2021年第1期94-99,共6页
文摘
为体外表达牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)PlpE基因及制备抗PlpE蛋白多克隆抗体,根据PlpE基因核酸序列设计了1对特异性引物,通过PCR扩增PlpE基因,构建重组质粒pET-32a-PlpE;摇菌提取质粒,进行双酶切鉴定,鉴定正确后将重组质粒pET-32a-PlpE转化至BL21(DE3)感受态细胞,加入IPTG进行诱导,对诱导蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定;使用纯化蛋白PlpE免疫北京大耳白兔,制备多克隆抗体,并进行间接ELISA和Western Blot分析。结果显示,扩增的PlpE基因大小为1050 bp,在原核细胞中诱导表达的PlpE蛋白约56 kDa。间接ELISA结果显示,所制备多克隆抗体效价可达1:512000;Western Blot结果显示,所制备多克隆抗体反应性良好。PlpE蛋白的成功表达和多克隆抗体的成功制备,为下一步多杀性巴氏杆菌诊断方法的建立和疫苗研发奠定了基础。
关键词
多杀性巴氏杆菌
原核表达
PlpE基因
多克隆抗体
Keywords
Pasteurella multocida
prokaryotic expression
PlpE gene
polyclonal antibody
分类号
S855.1 [农业科学—临床兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛源多杀性巴氏杆菌PlpE蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
张智
刘泽
乌吉斯古楞
刘重阳
权璞宏
任旭荣
宋庆庆
关平原
《中国动物检疫》
CAS
2021
1
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