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鸭坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及应用
被引量：
6
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作者
王巧萍
严红亚
+5 位作者
李珂
朱鹤然
元正菊
常志顺
张以芳
信爱国
《中国动物检疫》
CAS
2021年第11期124-130,共7页
为建立鸭坦布苏病毒(duck tembusuvims,DTMUV)荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)检测方法,对DTMUV的NS5基因设计特异性引物和MGB探针,使用RT-PCR扩增NS5基因并将其连接到pEASY-T1载体上构建重组质粒,提取阳性重组质粒作为qRT-PCR阳性模板绘制标...
为建立鸭坦布苏病毒(duck tembusuvims,DTMUV)荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)检测方法,对DTMUV的NS5基因设计特异性引物和MGB探针,使用RT-PCR扩增NS5基因并将其连接到pEASY-T1载体上构建重组质粒,提取阳性重组质粒作为qRT-PCR阳性模板绘制标准曲线,用SYBRGreenI法检测MGB探针法qRT-PCR的引物是否有非特异性扩增,并进行特异性、敏感性、重复性试验和临床样品检测。结果显示:MGB探针法qRT-PCR标准曲线的相关系数为0.999 3,其引物没有非特异性扩增;对于其他阳性样本,如鸭肝炎病毒(DHV)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)等抗原无扩增曲线,只能检出DTMUV;qRT-PCR敏感性可达3×10^(2) copies/μL,是普通RT-PCR的10 000倍;批内和批间重复性试验变异系数(CV)为0.08%~0.49%,均小于0.5%。从云南省不同地区采集20份临床出现产蛋下降症状的病鸭组织,应用试验建立的qRT-PCR方法检出12份阳性样品,而普通RT-PCR检出10份,两者的阳性率分别为60% (12/20)和50% (10/20)。结果表明,本试验成功建立了基于DTMUV NS5基因的MGB探针qRT-PCR检测方法,其标准曲线线性关系显著,特异性强,与其他禽源性病原无交叉反应性,敏感性和重复性良好,敏感性和阳性检出率较普通RT-PCR高,更适合于DTMUV感染的临床诊断和流行病学调查。
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关键词
鸭坦布苏病毒
NS5基因
荧光定量RT-PCR
MGB探针
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题名
鸭坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及应用
被引量：
6
1
作者
王巧萍
严红亚
李珂
朱鹤然
元正菊
常志顺
张以芳
信爱国
机构
云南农业大学动物医学院
云南省畜牧兽医科学院养禽与禽病研究所
出处
《中国动物检疫》
CAS
2021年第11期124-130,共7页
基金
国家现代农业产业技术(水禽)体系资助项目(CARS-42)
云南省廖明专家工作站(202105AF150077)
云南省重大科技专项(202102AE090029)。
文摘
为建立鸭坦布苏病毒(duck tembusuvims,DTMUV)荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)检测方法,对DTMUV的NS5基因设计特异性引物和MGB探针,使用RT-PCR扩增NS5基因并将其连接到pEASY-T1载体上构建重组质粒,提取阳性重组质粒作为qRT-PCR阳性模板绘制标准曲线,用SYBRGreenI法检测MGB探针法qRT-PCR的引物是否有非特异性扩增,并进行特异性、敏感性、重复性试验和临床样品检测。结果显示:MGB探针法qRT-PCR标准曲线的相关系数为0.999 3,其引物没有非特异性扩增;对于其他阳性样本,如鸭肝炎病毒(DHV)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)等抗原无扩增曲线,只能检出DTMUV;qRT-PCR敏感性可达3×10^(2) copies/μL,是普通RT-PCR的10 000倍;批内和批间重复性试验变异系数(CV)为0.08%~0.49%,均小于0.5%。从云南省不同地区采集20份临床出现产蛋下降症状的病鸭组织,应用试验建立的qRT-PCR方法检出12份阳性样品,而普通RT-PCR检出10份,两者的阳性率分别为60% (12/20)和50% (10/20)。结果表明,本试验成功建立了基于DTMUV NS5基因的MGB探针qRT-PCR检测方法,其标准曲线线性关系显著,特异性强,与其他禽源性病原无交叉反应性,敏感性和重复性良好,敏感性和阳性检出率较普通RT-PCR高,更适合于DTMUV感染的临床诊断和流行病学调查。
关键词
鸭坦布苏病毒
NS5基因
荧光定量RT-PCR
MGB探针
Keywords
DTMUV
NS5 gene
qRT-PCR
MGB probe
分类号
S851 [农业科学—预防兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
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1
鸭坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立及应用
王巧萍
严红亚
李珂
朱鹤然
元正菊
常志顺
张以芳
信爱国
《中国动物检疫》
CAS
2021
6
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