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过表达microRNA-7通过下调CGG结合蛋白1的表达抑制人肺癌细胞生长 被引量:16
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作者 胡燕 廖珍媛 +7 位作者 陈超 秦娜琳 郑静 田丹 李永菊 朱顺飞 罗军敏 徐林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期125-130,共6页
目的探讨过表达microRNA-7(miR-7)对人肺癌细胞体内外生长的作用和可能机制。方法利用真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(p-miR-7),体外瞬时转染95D人肺癌细胞,MTT法和克隆形成实验检测95D细胞的增殖变化;免疫荧光技术检测95D细胞Ki-67... 目的探讨过表达microRNA-7(miR-7)对人肺癌细胞体内外生长的作用和可能机制。方法利用真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(p-miR-7),体外瞬时转染95D人肺癌细胞,MTT法和克隆形成实验检测95D细胞的增殖变化;免疫荧光技术检测95D细胞Ki-67和CGG结合蛋白(CGGBP1)的表达;建立人肺癌裸鼠肿瘤模型,肿瘤局部注射p-miR-7真核表达载体,测量肿瘤大小并观察小鼠生存时间;实时PCR检测肿瘤组织中miR-7表达水平;免疫组织化学技术检测组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达。结果过表达miR-7可明显抑制肺癌细胞的体外增殖(P<0.05),Ki-67和CGGBP1的表达显著减少(P<0.05);体内实验结果显示,局部注射p-miR-7组中miR-7表达水平明显增加,同时荷瘤裸鼠的肿瘤生长缓慢,生存时间明显延长(P<0.05)。肿瘤组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达量均显著减少(P<0.05)。结论过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体内外生长,可能与其下调肿瘤生长相关蛋白CGGBP1的表达有关。 展开更多
关键词 肺癌 miR-7 人肺癌95D细胞 细胞生长 CGG结合蛋白1
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miRNA-126基因敲减小鼠肠系膜淋巴结T淋巴细胞比例的变化 被引量:8
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作者 张忆雄 胡燕 +6 位作者 郭萌萌 朱顺飞 陶弋婧 赵娟娟 周涯 郑静 徐林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1157-1160,共4页
目的:研究miRNA-126基因敲减小鼠肠系膜淋巴结T及B淋巴细胞数量的变化。方法:检测miRNA-126基因敲减(KD)小鼠肠系膜淋巴结的体积、重量和淋巴结细胞总数;HE染色检测小鼠肠系膜淋巴结的病理形态学变化;流式细胞术(FACS)检测淋巴结中T及B... 目的:研究miRNA-126基因敲减小鼠肠系膜淋巴结T及B淋巴细胞数量的变化。方法:检测miRNA-126基因敲减(KD)小鼠肠系膜淋巴结的体积、重量和淋巴结细胞总数;HE染色检测小鼠肠系膜淋巴结的病理形态学变化;流式细胞术(FACS)检测淋巴结中T及B淋巴细胞数量的变化。结果:与野生型(WT)小鼠相比,miR-126KD小鼠肠系膜淋巴结体积、重量和淋巴结细胞总数均显著增加(P<0.05),且病理形态学发生异常;肠系膜淋巴结中B淋巴细胞比例和数量无变化(P>0.05),CD4+T细胞数量无变化,而CD4+T细胞百分数明显减少(P<0.05),CD8+T细胞百分数和绝对数量均显著增加(P<0.05)。结论:miRNA-126敲减后可显著影响肠系膜淋巴结中T淋巴细胞的数量,提示miRNA-126可能影响肠系膜淋巴结的免疫功能。 展开更多
关键词 miRNA-126基因敲减 肠系膜淋巴结 B细胞 T细胞
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microRNA-126基因敲减小鼠的鉴定及其血糖水平变化 被引量:7
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作者 胡燕 李永菊 +6 位作者 陈超 朱顺飞 郭萌萌 刘思静 郑静 秦娜琳 徐林 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期12-17,共6页
目的:检测micro RNA-126(mi R-126)基因敲减(knock down,KD)小鼠各组织器官中mi R-126的表达,并观察小鼠血糖的变化,初步探讨其意义。方法:分别提取野生型(wild type,WT)和mi R-126 KD模型小鼠中12种组织器官的总RNA,荧光定量PCR探针法... 目的:检测micro RNA-126(mi R-126)基因敲减(knock down,KD)小鼠各组织器官中mi R-126的表达,并观察小鼠血糖的变化,初步探讨其意义。方法:分别提取野生型(wild type,WT)和mi R-126 KD模型小鼠中12种组织器官的总RNA,荧光定量PCR探针法检测mi R-126在12种组织器官的表达水平;检测小鼠血糖的变化,并观察小鼠体质量的变化;HE染色观察肝脏和胰腺的病理改变。结果:与正常小鼠相比,mi R-126 KD模型小鼠的脾、胰腺、肝、肌肉和肺等器官组织中mi R-126的表达显著下调(P<0.05);出生第7周和第16周模型小鼠血糖水平均明显增高(P<0.05),HE染色显示模型小鼠胰腺和肝组织呈明显病理异常;出生第13周后,模型小鼠体质量逐渐增加(P<0.05)。结论:mi R-126KD小鼠血糖水平明显增加,可能与胰腺和肝的病理改变有关,提示mi R-126在血糖代谢中具有重要作用,可能与2型糖尿病的发生发展密切相关。 展开更多
关键词 MIR-126 海绵体 基因KD 血糖
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真核表达载体pEGFP-C2-miR-126-sponge的构建及其表达活性研究 被引量:6
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作者 胡燕 廖珍媛 +4 位作者 李永菊 陈超 朱顺飞 熊思东 徐林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期33-37,共5页
目的构建靶向miR-126的真核表达载体pEGFP-C2-miR-126-海绵体(sponge),并探讨其下调miR-126的表达对肝癌HepG2细胞体外生长的影响,为后续深入研究miR-126在肝癌发生中的作用提供前期实验基础。方法合成miR-126-sponge,构建pEGFP-C2-miR-... 目的构建靶向miR-126的真核表达载体pEGFP-C2-miR-126-海绵体(sponge),并探讨其下调miR-126的表达对肝癌HepG2细胞体外生长的影响,为后续深入研究miR-126在肝癌发生中的作用提供前期实验基础。方法合成miR-126-sponge,构建pEGFP-C2-miR-126-sponge真核表达载体,体外瞬时转染肝癌细胞HepG2,荧光显微镜下观察EGFP的表达情况;Real-time PCR检测细胞中miR-126的表达水平;MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖变化;划痕实验观察细胞的体外迁移能力改变。结果成功构建pEGFP-C2-miR-126-sponge真核表达载体(命名为p-miR-126-sp);Real-time PCR结果显示,与对照组(p-Cont)相比,p-miR-126-sp组中miR-126表达水平显著降低(P<0.05);MTT检测发现,p-miR-126-sp组中细胞增殖数目明显减少(P<0.05);此外,p-miR-126-sp组的克隆形成数和细胞迁移数均明显减少(P<0.05)。结论 miR-126-sponge可显著下调miR-126的表达水平进而抑制肝癌细胞HepG2的体外增殖及迁移能力。 展开更多
关键词 miR-126-sponge 肝癌 HEPG2细胞 细胞增殖
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microRNA-7对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞组成的影响 被引量:6
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作者 赵娟娟 朱顺飞 +7 位作者 徐华林 胡燕 郭萌萌 陶弋婧 周涯 秦娜琳 郑静 徐林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1163-1168,共6页
目的:研究miR-7(MicroRNA-7,miRNA-7)对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞比例的影响并初步探讨其意义。方法:利用miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠模型,观察其肠系膜淋巴结大小、重量和淋巴结细胞总数,以及HE染色的病理学变化;流式细胞术(... 目的:研究miR-7(MicroRNA-7,miRNA-7)对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞比例的影响并初步探讨其意义。方法:利用miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠模型,观察其肠系膜淋巴结大小、重量和淋巴结细胞总数,以及HE染色的病理学变化;流式细胞术(FACS)检测淋巴结中αβT淋巴细胞亚群(CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞)以及CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化相关分子CD69、CD62L和功能相关因子IFN-γ表达的情况。结果:与野生型(Wild type,WT)小鼠相比,miR-7KD小鼠肠系膜淋巴结大小、重量指数和淋巴结细胞总数均显著增高(P<0.05),且HE染色显示MLNs有病理性改变;肠系膜淋巴结中αβCD3+T细胞比例增加显著,其中以CD4+T细胞比例变化最为明显(P<0.05),而CD19+B淋巴细胞比例明显下调(P<0.05),但各亚群细胞总数均明显增加(P<0.05);最后,CD4+T细胞和CD8+T细胞中的CD62L+细胞的比例均显著下调(P<0.05),而CD69+细胞和IFN-γ+细胞比例均显著上调(P<0.05)。结论:miR-7敲减后可显著影响肠系膜淋巴结中αβT淋巴细胞的组成比例,提示其对肠系膜淋巴结中淋巴细胞的组成和功能具有重要的调控作用。 展开更多
关键词 miR-7基因敲减 肠系膜淋巴结 ΑΒT细胞
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microRNA-7基因敲减对小鼠CD4^+SP细胞胸腺发育的影响 被引量:6
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作者 陶弋婧 朱顺飞 +5 位作者 陈超 赵娟娟 郭萌萌 张忆雄 秦娜林 徐林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1173-1177,共5页
目的:研究microRNA-7(miRNA-7,miR-7)基因敲减对小鼠CD4+SP细胞胸腺发育的影响。方法:检测miR-7基因敲减(miR-7 knock down,miR-7KD)和野生型(Wild-type,WT)小鼠胸腺重量及细胞总数变化;HE染色观察miR-7KD小鼠胸腺的形态学结构改变;FAC... 目的:研究microRNA-7(miRNA-7,miR-7)基因敲减对小鼠CD4+SP细胞胸腺发育的影响。方法:检测miR-7基因敲减(miR-7 knock down,miR-7KD)和野生型(Wild-type,WT)小鼠胸腺重量及细胞总数变化;HE染色观察miR-7KD小鼠胸腺的形态学结构改变;FACS检测胸腺CD4+单阳性(Single positive,SP)细胞的比例并计算细胞总数,同时检测CD4+SP细胞CD44及CD62L表达变化;核抗原Ki-67染色法检测CD4+SP细胞的增殖情况;FACS检测CD4+SP细胞的凋亡变化;Western blot技术检测胸腺中总ERK1/2和磷酸化ERK1/2表达水平变化。结果:与WT小鼠相比,miR-7KD小鼠胸腺体积、重量以及细胞总数均显著减少,且形态学结构发生改变(P<0.05);FACS结果显示,miR-7KD小鼠胸腺CD4+SP细胞比例明显降低,且细胞总数减少(P<0.05)。此外,CD4+SP细胞的CD44表达水平显著增加,而CD62L表达水平明显减少(P<0.05);同时,CD4+SP细胞增殖及凋亡比例均显著增加(P<0.01);最后,miR-7KD小鼠胸腺中ERK1/2以及磷酸化ERK1/2的表达均明显下调(P<0.05)。结论:miR-7基因敲减后可显著影响CD4+SP细胞的胸腺发育,这可能与细胞活化水平及ERK1/2信号通路改变有关。 展开更多
关键词 微小RNA-7 基因敲减 胸腺 CD4^+SP细胞
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