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粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)的克隆表达、纯化及免疫学特性 被引量:21
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作者 朱健琦 刘志刚 +2 位作者 高波 吉坤美 邢苗 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期213-218,共6页
粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)是粉尘螨Dermatophagoidesfarinae主要变应原,可引发Ⅰ型变态反应。挑取纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR方法有效地扩增出DerfⅠ片段,产物连接入T载体(pMD18)。经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片... 粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)是粉尘螨Dermatophagoidesfarinae主要变应原,可引发Ⅰ型变态反应。挑取纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR方法有效地扩增出DerfⅠ片段,产物连接入T载体(pMD18)。经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET24a表达载体上,得到重组质粒pET24a-DerfⅠ,工程菌经IPTG诱导培养,高效表达出DerfⅠ蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在。表达产物经亲和层析纯化,用Westernblot及ELISA方法检测免疫学活性,结果表明目的蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 粉尘螨 变应原 表达 纯化 特性鉴定
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德国小蠊变应原Bla g 2蛋白变复性的荧光光谱研究 被引量:2
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作者 朱健琦 刘志刚 +2 位作者 黄海珍 朱永烽 徐宏 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第12期2254-2257,共4页
包涵体中的重组蛋白经抽提后可以在变性状态下纯化,而纯化后的复性过程是基因工程下游处理的重要环节。通过对变应原Bla g 2蛋白复性前后荧光光谱的比较和分析、变性剂(尿素和SDS)对复性后Blag 2蛋白的荧光滴定实验、以及复性后Bla g 2... 包涵体中的重组蛋白经抽提后可以在变性状态下纯化,而纯化后的复性过程是基因工程下游处理的重要环节。通过对变应原Bla g 2蛋白复性前后荧光光谱的比较和分析、变性剂(尿素和SDS)对复性后Blag 2蛋白的荧光滴定实验、以及复性后Bla g 2在不同pH下的荧光光谱分析,推断出Bla g 2蛋白分子在不同环境下构象的变化及其光谱学特征,初步建立了一种新的检测重组变应原蛋白变复性的光谱实验方法。 展开更多
关键词 德国小蠊 变应原 BLA g 2 变性 复性 荧光光谱
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多响应性聚肽共混胶束的药物控释性能 被引量:3
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作者 朱健琦 陈涛 +3 位作者 林嘉平 林绍梁 蔡春华 张良顺 《功能高分子学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期348-352,共5页
合成了聚(L-谷氨酸)-b-聚氧化丙烯-b-聚(L-谷氨酸)(PLGA-b-PPO-b-PLGA)三嵌段聚肽共聚物。通过透射电镜、激光光散射与核磁共振等方法研究了其与聚乙二醇-b-聚氧化丙烯(PEG-b-PPO)两嵌段共聚物共混体系的自组装行为,使用紫外分光光度计... 合成了聚(L-谷氨酸)-b-聚氧化丙烯-b-聚(L-谷氨酸)(PLGA-b-PPO-b-PLGA)三嵌段聚肽共聚物。通过透射电镜、激光光散射与核磁共振等方法研究了其与聚乙二醇-b-聚氧化丙烯(PEG-b-PPO)两嵌段共聚物共混体系的自组装行为,使用紫外分光光度计探讨了负载阿霉素的共混聚集体在不同环境下的释药行为。结果表明:该体系形成了以PPO为内核,PLGA和PEG为壳的共混胶束,该共混胶束的释药行为不仅具有pH和温度的响应性,并且对共混胶束的组分具有依赖性。 展开更多
关键词 共混胶束 释药 多响应性 聚肽共聚物
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真核表达与原核表达的德国小蠊变应原Bla g 2蛋白结构的光谱学研究 被引量:12
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作者 刘志刚 朱健琦 +1 位作者 黄海珍 徐宏 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第5期879-883,共5页
在基因工程技术中,采用原核表达系统获得的重组蛋白是以包涵体的形式存在,在细胞内聚集成无生物活性的不溶性颗粒,而采用真核表达系统收获的蛋白已经是经过正确的体内折叠的活性蛋白。文章分别用真核与原核表达系统表达重组变应原,通过... 在基因工程技术中,采用原核表达系统获得的重组蛋白是以包涵体的形式存在,在细胞内聚集成无生物活性的不溶性颗粒,而采用真核表达系统收获的蛋白已经是经过正确的体内折叠的活性蛋白。文章分别用真核与原核表达系统表达重组变应原,通过对不同来源目的蛋白的荧光光谱和CD谱的比较和分析,对真核系统与原核系统表达出的Bla g2蛋白的高级构象进行研究,阐明了Bla g2在溶液中的二级结构,并推断出其三级结构组成类型。 展开更多
关键词 德国小蠊 变应原 BLA g 2 真核表达 原核表达 荧光光谱 CD谱
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