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重组人分泌型血管内皮抑素对鼠移植性肝癌抑制作用的实验研究 被引量：1
1
作者 王晓燕 孙汶生 +4 位作者 马春红 张利宁 李欣 刘素侠 曹英林 《中国现代普通外科进展》 CAS 2002年第3期145-148,共4页
目的 :在毕赤酵母菌 (GS115 )中表达有活性的重组人分泌型血管内皮抑素蛋白 ,探讨其对鼠移植性肝癌的抑制作用。方法 :成功构建的分泌型酵母表达载体 ,经电转化法转入酵母菌中 ,SDS PAGE电泳筛选阳性重组子 ,经Heparin亲和层析柱进行初... 目的 :在毕赤酵母菌 (GS115 )中表达有活性的重组人分泌型血管内皮抑素蛋白 ,探讨其对鼠移植性肝癌的抑制作用。方法 :成功构建的分泌型酵母表达载体 ,经电转化法转入酵母菌中 ,SDS PAGE电泳筛选阳性重组子 ,经Heparin亲和层析柱进行初步纯化。MTT法测定重组人血管内皮抑素对脐静脉血管内皮细胞 (ECV 30 4 )增殖的抑制作用 ;HepG2 .2 .15细胞注射裸鼠成瘤后 ,体内验证重组蛋白的抑瘤活性。结果 :构建的酵母表达载体经PCR、测序鉴定完全正确。SDS PAGE电泳证实重组菌较空白菌多一明显条带 ,Heparin亲和层析后 ,1MNaCl洗脱的蛋白峰在体外可特异性抑制血管内皮细胞的增殖 ,体内可明显抑制鼠移植性肝癌的生长 ,并诱导肿瘤细胞凋亡。结论 :在毕赤酵母菌中成功表达了有活性的重组血管内皮抑素蛋白 ,对肿瘤治疗具有很好的开发前景。 展开更多
关键词 重组人分泌型血管内皮抑素 移植性肝癌 抑制作用 实验研究 基因表达
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高生物安全性人内皮抑素载体抑瘤作用的研究 被引量：1
2
作者 张艳 马春红 +7 位作者 孙汶生 王晓燕 高立芬 刘素侠 刘华 曹英林 张利宁 郭春 《中国现代普通外科进展》 CAS 2004年第6期350-352,355,共4页
目的 :探索利用内皮抑素 (Endostatin)进行肿瘤抗血管基因治疗的效果与安全性。方法 :以pVAX1为载体 ,构建含IgGγ链信号肽序列和Endostatin基因的重组载体pVAX sEN。重组子经KpnI、EcoRI双酶切及测序鉴定。建立小鼠肝癌细胞H2 2动物模... 目的 :探索利用内皮抑素 (Endostatin)进行肿瘤抗血管基因治疗的效果与安全性。方法 :以pVAX1为载体 ,构建含IgGγ链信号肽序列和Endostatin基因的重组载体pVAX sEN。重组子经KpnI、EcoRI双酶切及测序鉴定。建立小鼠肝癌细胞H2 2动物模型 ,分别瘤内注射重组载体pVAX sEN、空载体、生理盐水(NS) ,每周 2次 ,测量肿瘤体积 ,ELISA检测肿瘤局部Endosatin的表达量 ,流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡。同时 ,10 0 μg高剂量pVAX sEN裸DNA注射实验动物 ,观察动物的一般状况 ,2 0d后处死动物取其内脏病理切片H E染色。结果 :测序结果表明正确构建了含有信号肽及Endostatin的真核表达载体。瘤内注射pVAX sEN后 ,ELISA检测到实验组肿瘤局部Endostatin表达量为 (2 0 1± 3 1)ng/ml,而空载体及NS对照组瘤内未见Endostatin特异性表达 ;瘤体测量证明pVAX sEN可以抑制肿瘤的生长 ,重组载体组肿瘤的平均体积为 (0 4± 0 3)cm3 ,显著低于对照组 [空载体和NS对照组分别为 (1 6± 0 4 )cm3 、(1 9± 0 6 )cm3 ,P <0 0 5 ]。pVAX sEN可以增加肿瘤细胞的凋亡 ,实验组、空载体和NS对照组肿瘤细胞的凋亡率分别为 (5 1 9± 3 16 ) %、(2 4 6± 4 4 3) %、(18 8± 1 2 ) % ,实验组与两组差异均有统计学意义 (P <0 .0 1)。 展开更多
关键词 血管内皮抑素 癌 肝细胞 基因疗法
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鲑鱼降钙素对人乳腺癌细胞生长作用的实验研究
3
作者 赵丽 曹英林 孙汶生 《中国现代普通外科进展》 CAS 2003年第1期33-35,共3页
目的 :观察鲑鱼降钙素 (sCT)在体外对人乳腺癌细胞生长的影响。方法 :体外培养人乳腺癌细胞系MCF 7,细胞计数法观察sCT对细胞生长的影响 ,透射电镜和DNA电泳法观察凋亡 ,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果 :sCT实验组乳腺癌细胞的... 目的 :观察鲑鱼降钙素 (sCT)在体外对人乳腺癌细胞生长的影响。方法 :体外培养人乳腺癌细胞系MCF 7,细胞计数法观察sCT对细胞生长的影响 ,透射电镜和DNA电泳法观察凋亡 ,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果 :sCT实验组乳腺癌细胞的数量较对照组减少 (P <0 .0 5 ) ,透射电镜观察到凋亡小体 ,DNA电泳出现梯状条带 ,细胞凋亡率由 3 .72 %升高至 2 3 .3 7% ,G2 期细胞比例由0 .88%升高至 4.13 %。结论 :sCT体外能抑制人乳腺癌细胞生长 。 展开更多
关键词 降钙素 乳腺肿瘤 凋亡 细胞周期 实验研究
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