非洲猪瘟病毒p54基因的原核表达及其抗体的间接ELISA检测方法的建立 被引量：22

1

作者 曹琛福 梁云浩 +6 位作者 陶虹 花群义 曾少灵 杨俊兴 陈兵 张桂红 吕建强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第2期6-10,共5页

将非洲猪瘟病毒P54基因克隆到原核表达载体pET-52b(+)3C/LIC中,转入BL21(DE3)菌中诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析的结果表明,表达蛋p54的分子质量约为28ku,具有很好的抗原性。纯化p54蛋白后,采用2.5μg/mL浓度作包... 将非洲猪瘟病毒P54基因克隆到原核表达载体pET-52b(+)3C/LIC中,转入BL21(DE3)菌中诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析的结果表明,表达蛋p54的分子质量约为28ku,具有很好的抗原性。纯化p54蛋白后,采用2.5μg/mL浓度作包被抗原,建立了检测非洲猪瘟p54抗体的间接ELISA方法,结果表明建立的间接ELISA方法特异性、敏感性都较好。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 p54基因 原核表达 间接ELISA

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非洲马瘟间接ELISA方法的建立及初步应用 被引量：10

2

作者 曹琛福 叶奕优 +4 位作者 宗卉 张彩虹 吕建强 杨俊兴 花群义 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第3期6-9,共4页

为建立检测非洲马瘟间接酶联免疫吸附试验方法,利用重组杆状病毒感染昆虫细胞表达出具有良好抗原性的VP7蛋白,将感染VP7重组杆状病毒的昆虫细胞裂解液作为包被抗原,通过优化包被抗原浓度、二抗稀释度等,建立了检测非洲马瘟的间接ELISA方... 为建立检测非洲马瘟间接酶联免疫吸附试验方法,利用重组杆状病毒感染昆虫细胞表达出具有良好抗原性的VP7蛋白,将感染VP7重组杆状病毒的昆虫细胞裂解液作为包被抗原,通过优化包被抗原浓度、二抗稀释度等,建立了检测非洲马瘟的间接ELISA方法,并进行了初步运用。结果表明,直接利用真核细胞表达VP7蛋白的昆虫细胞裂解液作为包被液可成功建立检测非洲马瘟的间接ELISA方法。 展开更多

关键词 非洲马瘟 间接酶联免疫吸附试验 VP7蛋白 真核表达

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应用SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线同时检测两种致病菌 被引量：2

3

作者 曹琛福 花群义 +5 位作者 秦智锋 吕建强 曾少灵 陶虹 张彩虹 宗卉 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第2期12-15,共4页

SYBR GreenⅠ是一种特异结合双链DNA的染料,已被证明能灵敏地检测核酸。采用SYBRGreenⅠ荧光PCR熔解曲线,通过摸索、优化PCR反应条件及反应体系,扩增出两条不同大小、Tm值不同的目的核酸片段,表现在熔解曲线上出现两个独立的波峰,建立了... SYBR GreenⅠ是一种特异结合双链DNA的染料,已被证明能灵敏地检测核酸。采用SYBRGreenⅠ荧光PCR熔解曲线,通过摸索、优化PCR反应条件及反应体系,扩增出两条不同大小、Tm值不同的目的核酸片段,表现在熔解曲线上出现两个独立的波峰,建立了用SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线来检测多个基因的方法,从而实现不用核酸探针,简单、经济、快速的多重荧光PCR方法检测沙门菌和产单核细胞李斯特菌。 展开更多

关键词 SYBR Green Ⅰ荧光PCR 沙门菌 产单核细胞李斯特菌

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实时荧光定量PCR检测布鲁菌方法的建立 被引量：2

4

作者 曹琛福 刘学武 +5 位作者 花群义 吕建强 秦智锋 陈兵 曾少灵 孙洁 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第7期6-9,共4页

旨在建立实时荧光定量PCR检测布鲁菌的方法。经选取高度保守的具布鲁菌属特异性的BSP31基因设计了一对引物及探针,并采用矩阵法优化反应体系,筛选出引物、探针、dNTP和Mg2+最优浓度配比,同时进行了特异性和灵敏性试验,建立了实时荧光定... 旨在建立实时荧光定量PCR检测布鲁菌的方法。经选取高度保守的具布鲁菌属特异性的BSP31基因设计了一对引物及探针,并采用矩阵法优化反应体系,筛选出引物、探针、dNTP和Mg2+最优浓度配比,同时进行了特异性和灵敏性试验,建立了实时荧光定量PCR检测布鲁菌的方法。该方法可用于对布鲁菌病普查监测及进出境动物及其产品的检验检疫。 展开更多

关键词 布鲁菌 实时荧光定量PCR 检测

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家蚕微孢子虫诊断方法研究进展 被引量：2

5

作者 曹琛福 林彦星 +1 位作者 吕建强 花群义 《安徽农业科学》 CAS 2016年第2期1-3,15,共4页

自家蚕微粒子病被发现近200a来,它给世界各养蚕国家造成巨大的经济损失,已被列为蚕种生产的唯一检疫对象。为了更好地了解并总结家蚕微孢子虫现有的诊断方法及其研究进展,该研究主要对近些年来在光学显微镜检测、电镜观察检测、免疫学... 自家蚕微粒子病被发现近200a来,它给世界各养蚕国家造成巨大的经济损失,已被列为蚕种生产的唯一检疫对象。为了更好地了解并总结家蚕微孢子虫现有的诊断方法及其研究进展,该研究主要对近些年来在光学显微镜检测、电镜观察检测、免疫学检测和分子生物学检测方面的研究进行了综述,并且展望未来发展趋势,以期对家蚕微粒子病进行更快速、准确的诊断与防治。 展开更多

关键词 家蚕微孢子虫 诊断 方法

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母犬的假孕 被引量：5

6

作者 曹琛福 黄群山 《广西畜牧兽医》 2005年第1期25-27,共3页

关键词 发情周期 母犬 繁殖季节 假孕 乏情 公犬 发情期 怀孕 后期 黄体功能

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非洲猪瘟病毒PCR检测方法的建立 被引量：20

7

作者 曾少灵 花群义 +10 位作者 张彩虹 曹琛福 秦智锋 阮周曦 杨俊兴 卢体康 吕建强 孙洁 陈兵 林庆燕 杨云庆 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第10期6-10,共5页

根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因vp73的序列,设计一对特异性检测引物,扩增片段251 bp,建立了检测ASFV的PCR方法。与OIE推荐使用的2组PCR引物进行比对试验,结果表明,3组引物的检测特异性相当,但本研究设计的引物灵敏度... 根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因vp73的序列,设计一对特异性检测引物,扩增片段251 bp,建立了检测ASFV的PCR方法。与OIE推荐使用的2组PCR引物进行比对试验,结果表明,3组引物的检测特异性相当,但本研究设计的引物灵敏度至少高出100倍。表明所建立的PCR方法能敏感、快速地检测非洲猪瘟病毒。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 聚合酶链反应 检测

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非洲猪瘟病毒VP73蛋白在昆虫细胞中的表达与间接ELISA方法的建立 被引量：17

8

作者 曾少灵 廖立珊 +11 位作者 唐金明 杨俊兴 阮周曦 张彩虹 曹琛福 吕建强 秦智锋 林庆燕 孙洁 叶弈优 谢晓露 花群义 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第1期1-6,共6页

为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(iELISA),利用杆状病毒表达载体pFastBac HTA在昆虫细胞Sf9中表达非洲猪瘟病毒的VP73蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测显示重组蛋白大小约65ku,能与ASFV标准阳性血清发生特异性结合... 为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(iELISA),利用杆状病毒表达载体pFastBac HTA在昆虫细胞Sf9中表达非洲猪瘟病毒的VP73蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测显示重组蛋白大小约65ku,能与ASFV标准阳性血清发生特异性结合。以此重组蛋白作为检测抗原包被酶标板,初步建立了检测ASFV血清抗体的iELISA方法。表达的重组蛋白具有良好的特异性,为制备ASFV免疫血清学诊断检测试剂和疫苗提供了材料。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 VP73蛋白 间接ELISA

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美洲型猪蓝耳病病毒高致病性变异株RT-LAMP检测方法的建立 被引量：12

9

作者 曾少灵 孙洁 +9 位作者 秦智锋 阮周曦 林庆燕 花群义 曹琛福 杨俊兴 吕建强 张彩虹 陈兵 陈书琨 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第12期22-27,共6页

设计两套反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立了检测美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株的RT-LAMP方法。采用RT-LAMP方法与实时荧光RT-PCR方法检测58份病料,结果一致,但RT-LAMP方法的灵敏度大约高出10倍。RT-LAMP方法特异性良好... 设计两套反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立了检测美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株的RT-LAMP方法。采用RT-LAMP方法与实时荧光RT-PCR方法检测58份病料,结果一致,但RT-LAMP方法的灵敏度大约高出10倍。RT-LAMP方法特异性良好,检测猪瘟、伪狂犬病和细小病毒等均未出现交叉反应。结果表明,建立的美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株RT-LAMP检测方法具有特异、灵敏、高效和简便的特点,在我国猪蓝耳病快速检测领域将有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 RT-LAMP 猪蓝耳病 猪蓝耳病病毒高致病性变异株

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实时荧光定量PCR检测畜禽肉制品中鸭源性成分 被引量：13

10

作者 林彦星 张彩虹 +8 位作者 阮周曦 刘建利 宗卉 廖立珊 孙洁 杨俊兴 吕建强 花群义 曹琛福 《动物医学进展》 北大核心 2016年第11期48-53,共6页

根据鸭mtDNA COX基因上的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR用于检测畜禽肉制品中的鸭源性成分。结果表明,建立的方法特异性强,与鹅、鸡、羊、牛等15种动物DNA无非特异性扩增;灵敏度高,可检测1.0pg/μL鸭源DNA的... 根据鸭mtDNA COX基因上的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR用于检测畜禽肉制品中的鸭源性成分。结果表明,建立的方法特异性强,与鹅、鸡、羊、牛等15种动物DNA无非特异性扩增;灵敏度高,可检测1.0pg/μL鸭源DNA的存在;重复性好,同DNA浓度所测得Ct值的变异系数均小于3%;应用该法对模拟混合样品进行检测,结果与预期相符,且常见肉类DNA的存在并不影响该法对鸭源性成分检测的灵敏度。说明本试验建立的鸭源性成分实时荧光定量PCR法特异、敏感、稳定,可快速准确检测畜禽肉制品中含有的鸭源性成分。 展开更多

关键词 实时荧光定量PCR 检测 鸭源性成分

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引起猪腹泻的病毒分离鉴定 被引量：8

11

作者 林庆燕 陈书琨 +14 位作者 孙洁 唐金明 陈兵 卢体康 刘建利 廖立珊 曾少灵 祁振强 阮周曦 吕建强 杨俊兴 曹琛福 张彩虹 花群义 秦智锋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第10期75-79,共5页

为了对近年来引起仔猪腹泻的主要病毒进行分离鉴定,进而为疫苗的研发奠定基础,自2011年开始,从华南地区猪场连续3年检测出多个引起猪腹泻症状的病毒。其中2011年采用MA-104细胞系从临床样品小肠内容物中分离到猪流行性腹泻病毒(PEDV)和... 为了对近年来引起仔猪腹泻的主要病毒进行分离鉴定,进而为疫苗的研发奠定基础,自2011年开始,从华南地区猪场连续3年检测出多个引起猪腹泻症状的病毒。其中2011年采用MA-104细胞系从临床样品小肠内容物中分离到猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒A(PRoVA),临床样品为2种病毒的混合感染。2012年分离到PEDV、PRoVA和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)3种病毒,临床样品为3种病毒混合感染。2013年从临床样品中只分离到PEDV 1种病毒。通过在Vero-76传代细胞系中前3代加入胰酶和猪胰酶,自第4代仅加入胰酶的方法,成功克服了PEDV的细胞毒性,实现了连续传代,并在第8代出现了细胞病变(CPE)。通过采用IgY抗体对PEDV和PRoVA混合感染的MA-104细胞培养液连续中和和传代,成功分离纯化到猪轮状病毒A。对9个猪场的3年猪腹泻病毒性疾病流行病学调查表明,2011年—2013年主要是以PED流行为主。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 分离纯化 流行病学调查

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H7亚型禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：6

12

作者 卢体康 秦智锋 +8 位作者 陈兵 阮周曦 陶虹 吕建强 花群义 孙洁 曾少灵 曹琛福 张彩虹 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第3期9-13,共5页

H7亚型禽流感病毒致病性强、危害性大,是进出口家禽及禽类产品的主要检疫对象。为了加强对H7亚型禽流感病毒的检测,建立新的快速检测方法。通过对GenBank已报道的H7亚型禽流感病毒的HA基因进行序列分析比较,设计了两套分别针对H7N2亚型... H7亚型禽流感病毒致病性强、危害性大,是进出口家禽及禽类产品的主要检疫对象。为了加强对H7亚型禽流感病毒的检测,建立新的快速检测方法。通过对GenBank已报道的H7亚型禽流感病毒的HA基因进行序列分析比较,设计了两套分别针对H7N2亚型和H7Nx亚型的特异性引物和用FAM标记的Taq Man MGB核酸探针,建立了H7亚型禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR方法(Real-time RT-PCR)。该方法特异性好,不存在假阴性和假阳性的现象;敏感性高,对禽流感病毒H7亚型标准HI抗原检测的敏感性达到10-5,能够满足口岸禽流感病毒快速、准确、有效的检疫需求。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H7亚型 实时荧光定量RT-PCR 检测

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4种动物虫媒病病毒多重RT-PCR检测方法的建立 被引量：5

13

作者 阮周曦 花群义 +6 位作者 杨俊兴 曾少灵 曹琛福 秦智锋 吕建强 林庆燕 周晓黎 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第2期25-31,共7页

分别设计和合成4对特异性引物,通过对反应条件的优化,初步建立了鉴别蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血病病毒(EHDV)、水疱性口炎病毒(VSV)和赤羽病病毒(AKV)的多重RT-PCR检测方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的4对... 分别设计和合成4对特异性引物,通过对反应条件的优化,初步建立了鉴别蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血病病毒(EHDV)、水疱性口炎病毒(VSV)和赤羽病病毒(AKV)的多重RT-PCR检测方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的4对引物可对同一样品中的VSV、BTV、EHDV和AKV进行特异性扩增,所扩增的目的片段的长度分别为301、351、537、250bp。建立的四重RT-PCR检测方法能够检测出10-7稀释的细胞培养病毒液,4种病毒之间没有发生交叉反应,说明该检测方法特异性强,敏感性较高。所建立的多重RT-PCR方法可用于上述4种动物虫媒病病毒的快速鉴别诊断,在动物检疫、临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。 展开更多

关键词 蓝舌病病毒 鹿流行性出血病病毒 水疱性口炎病毒 赤羽病病毒 多重RT-PCR

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鹿流行性出血病病毒VP7基因的克隆及原核表达 被引量：5

14

作者 杨俊兴 花群义 +5 位作者 陈焕春 陈兵 吕建强 曹琛福 阮周曦 张彩红 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第8期5-8,共4页

根据已经扩增的鹿流行性出血病病毒(EHDV)VP7基因序列,设计一对扩增VP7基因特异性引物,用RT-PCR从血清I型EHDV(EHDV-1)总RNA中扩增VP7基因,并将其克隆到原核表达载体pBAD/Thio中,构建了重组原核表达质粒pBAD/Thio-EHDV VP7。将表达载体... 根据已经扩增的鹿流行性出血病病毒(EHDV)VP7基因序列,设计一对扩增VP7基因特异性引物,用RT-PCR从血清I型EHDV(EHDV-1)总RNA中扩增VP7基因,并将其克隆到原核表达载体pBAD/Thio中,构建了重组原核表达质粒pBAD/Thio-EHDV VP7。将表达载体转入大肠埃希菌(E.coliLMG194),用L-阿拉伯糖诱导表达。SDS-PAGE和Western blot试验结果表明,EHDV VP7基因在LMG194中得到了表达,其表达产物可以与EHDV阳性血清特异性反应,说明该融和蛋白具有免疫学活性。 展开更多

关键词 鹿流行性出血病病毒(EHDV) VP7基因 基因克隆 表达

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鸡传染性法氏囊病病毒RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：5

15

作者 孙洁 卢体康 +13 位作者 曾少灵 杨俊兴 詹爱军 林庆燕 曹琛福 陈兵 廖立珊 阮周曦 陶虹 张彩虹 刘建利 花群义 吕建强 秦智锋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第12期6-10,共5页

鸡传染性法氏囊病(IBD)是危害我国养禽业的主要疫病之一,呈世界性分布,对养鸡业造成重大危害。在国际种禽贸易中,对IBDV检测是口岸检疫的主要对象之一。为了建立标准的鸡传染性法氏囊病病毒分子检测方法,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐... 鸡传染性法氏囊病(IBD)是危害我国养禽业的主要疫病之一,呈世界性分布,对养鸡业造成重大危害。在国际种禽贸易中,对IBDV检测是口岸检疫的主要对象之一。为了建立标准的鸡传染性法氏囊病病毒分子检测方法,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的带有通用引物和酶切位点的特异性引物,通过对6株不同毒株的反复试验,优化了针对A片段VP2基因的常规反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法 (IBDV-VP2(604)-RT-PCR)和针对B片段VP1基因的RT-PCR检测方法(IBDV-VP1(642)-RT-PCR);针对A片段VP2基因设计特异性引物和探针,建立了优化IBDV特异性实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法(IBDV-VP2-rRT-PCR)。将传染性法氏囊病疫苗-法倍灵(IBDV-BLEN)疫苗株进行系列稀释,两种RT-PCR检测方法的灵敏度均为10-3,而IBDV-VP2-rRT-PCR检测方法灵敏度为10-4。所建立的三种分子生物学检测方法特异,与其他家禽病毒无任何交叉反应。通过对自2007年以来18批221份田间样品检测表明,所建立的方法准确可靠,适合对鸡传染性法氏囊病病毒进行快速灵敏检测和监测。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病 常规RT-PCR 实时荧光定量RT-PCR 快速检测

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口蹄疫病毒抗原胶体金试纸条的研究 被引量：6

16

作者 吕建强 杨俊兴 +5 位作者 花群义 曹琛福 张彩虹 陶虹 刘建利 阮周曦 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第3期14-18,共5页

利用单克隆抗体技术制备抗口蹄疫病毒的单克隆抗体,特异性试验表明其只与O、A、Asia 1型3种血清型FMDV抗原结合。进而采用胶体金标记技术,以胶体金标记的抗口蹄疫病毒单克隆抗体、多克隆血清抗体和葡萄球菌A蛋白为主要材料,研制口蹄疫... 利用单克隆抗体技术制备抗口蹄疫病毒的单克隆抗体,特异性试验表明其只与O、A、Asia 1型3种血清型FMDV抗原结合。进而采用胶体金标记技术,以胶体金标记的抗口蹄疫病毒单克隆抗体、多克隆血清抗体和葡萄球菌A蛋白为主要材料,研制口蹄疫快速检测试纸条。该试纸条检测O、A、Asia 1型3种血清型灭活口蹄疫病毒均为阳性,检测水疱性口炎病毒、猪水疱病病毒、蓝舌病病毒、猪蓝耳病病毒4种灭活抗原及小反刍兽疫病毒疫苗株均为阴性,试验结果与口蹄疫实时荧光定量RT-PCR方法的完全一致,表明其具有良好的特异性。敏感性试验结果是,试纸条的检测极限为1∶160稀释的样品,其敏感性相当于实时荧光定量RT-PCR方法的1/64。由于试纸条具有操作方便、检测快速等优点,因此该试纸条可以用于大量临床样品的快速检测和现场检测。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 单克隆抗体 胶体金试纸条

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牛病毒性腹泻病毒双单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用 被引量：6

17

作者 杨俊兴 曹琛福 +7 位作者 曾少灵 卢体康 孙洁 张彩虹 唐金明 陶虹 吕建强 花群义 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第5期11-16,共6页

为了建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原快速检测ELISA方法,用于BVDV抗原的快速检测。用纯化的BVDV作为抗原,经动物免疫、细胞融合、间接ELISA筛选和亚克隆,得到了3株抗BVDV的单克隆抗体(2A6、2F4和5C9)。选用单克隆抗体2A6和5C9包被ELISA... 为了建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原快速检测ELISA方法,用于BVDV抗原的快速检测。用纯化的BVDV作为抗原,经动物免疫、细胞融合、间接ELISA筛选和亚克隆,得到了3株抗BVDV的单克隆抗体(2A6、2F4和5C9)。选用单克隆抗体2A6和5C9包被ELISA板,用HRP标记的单克隆抗体2F4作为夹心抗体,建立了检测BVDV的双单克隆抗体夹心ELISA方法。通过对BVDV阳性样品、其他病毒阳性样品和阴性对照样品及系列稀释的阳性样品检测,表明该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。用ELISA检测326份临床样品,结果表明该方法与RT-PCR和商品化ELISA试剂盒检测结果符合率分别为98.8%和99.0%。该方法可以用于BVDV抗原快速检测和对大量样本的筛选。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 酶联免疫吸附试验 单克隆抗体

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产CTX-M和TEM型ESBLs耐药大肠埃希菌双重PCR检测方法的建立 被引量：6

18

作者 陶虹 卢体康 +13 位作者 唐金明 廖立珊 阮周曦 刘建利 曾少灵 陈兵 胡运发 孙洁 曹琛福 张彩虹 吕建强 杨俊兴 花群义 秦智锋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第8期7-12,共6页

近年来,由于抗生素滥用导致细菌产生耐药性的现象已经非常严重,而产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌耐药菌株的出现,已成为目前出入境食品安全检测的重点和难点。耐药大肠埃希菌ESBLs基因型有5种,其中产CTX-M和TEM两种基因型最为普... 近年来,由于抗生素滥用导致细菌产生耐药性的现象已经非常严重,而产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌耐药菌株的出现,已成为目前出入境食品安全检测的重点和难点。耐药大肠埃希菌ESBLs基因型有5种,其中产CTX-M和TEM两种基因型最为普遍。为了加强对产CTX-M和TEM两种基因型ESBLs耐药大肠埃希菌的检测,本研究在反复优化的基础上,建立了针对产CTX-M和TEM两种基因型ESBLs大肠埃希菌的快速检测方法。针对CTX-M基因型的PCR方法检测CTX-M ESBLs型的灵敏度为10-5,针对TEM基因型的PCR方法检测TEM ESBLs型的灵敏度为10-4,双重PCR方法检测对应基因型ESBLs灵敏度均为10-4。该方法特异性好,尚未发现假阴性和假阳性现象。采用建立的方法与VITEK-2细菌鉴定系统的鉴定方法和NCCLSM100-S10推荐的检测方法同时对623份样品进行检测并比较,结果表明,共检出只含CTX-M型ESBLs的耐药菌株13株,检出只含TEM基因型ESBLs的耐药菌株1株,同时含有CTX-M和TEM两种基因型ESBLs的耐药菌株9株,检测结果与细菌分离鉴定结果一致。表明所建立的方法可为产ESBLs大肠埃希菌的快速准确检测提供有效的工具,能够满足产ESBLs大肠埃希菌快速、准确、有效的口岸检疫需求。 展开更多

关键词 超广谱Β-内酰胺酶 耐药性 快速检测

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水疱性口炎病毒单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定 被引量：5

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作者 杨俊兴 花群义 +6 位作者 卢体康 吕建强 曹琛福 阮周曦 张彩虹 孙洁 周晓黎 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第7期6-10,共5页

用纯化的水疱性口炎毒(VSV)免疫接种Balb/c小鼠,取免疫接种的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,获得4株稳定分泌抗VSV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(5B1、8H1、9B9和11E11)。4株单克隆抗体均... 用纯化的水疱性口炎毒(VSV)免疫接种Balb/c小鼠,取免疫接种的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,获得4株稳定分泌抗VSV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(5B1、8H1、9B9和11E11)。4株单克隆抗体均能与VSV反应,且不与其他病毒及BHK细胞反应,表明4株单克隆抗体特异性良好。4株单克隆抗体腹水ELISA效价分别为1∶512 000、1∶256000、1∶256 000、1∶1 024 000。本试验为研究VSV生物学特性和建立VSV免疫学检测方法奠定了基础。 展开更多

关键词 水疱性口炎病毒 单克隆抗体 生物学特性

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猪流行性腹泻病毒分离鉴定与实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：5

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作者 唐金明 陈书琨 +14 位作者 林庆燕 黄新亚 卢体康 孙洁 阮周曦 曾少灵 祁振强 吕建强 杨俊兴 曹琛福 张彩虹 刘建利 廖立珊 花群义 秦智锋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第8期31-35,共5页

采用Vero-76细胞系从临床样品小肠内容物中分离到1株猪流行性腹泻病毒(PEDV),通过RT-PCR进行了鉴定。针对PEDV,参照保守的M基因序列设计了特异性引物和探针,建立了针对PEDV特异性的实时荧光定量RT-PCR检测方法(PEDV-rRT-PCR)。所建立的... 采用Vero-76细胞系从临床样品小肠内容物中分离到1株猪流行性腹泻病毒(PEDV),通过RT-PCR进行了鉴定。针对PEDV,参照保守的M基因序列设计了特异性引物和探针,建立了针对PEDV特异性的实时荧光定量RT-PCR检测方法(PEDV-rRT-PCR)。所建立的方法特异性强,与传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、猪细小病毒等猪主要病原体无交叉反应;方法灵敏度高,检测灵敏度达到重组质粒10-8稀释度(约20cop);重复性好,组内变异系数≤0.26%。20份田间样品检测结果表明,所建立的PEDV-rRTPCR方法快速、灵敏,检测结果准确可靠,适合用于PEDV的快速检测和流行病学调查。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 病毒分离 实时荧光定量RT-PCR

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