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犬少突胶质前体细胞的制备及嗜神经病毒感染模型的建立
1
作者 杨晓媛 薛雨佳 +5 位作者 杜文乐 崔赛赛 刘家森 康洪涛 姜骞 曲连东 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第4期327-332,共6页
为建立研究嗜神经病毒致病机制的可靠细胞模型,本实验将健康幼犬剖杀无菌去除其脑膜、脑干及血管等结构,收集并处理大脑皮质后,利用神经组织解离试剂盒及配套设备对大脑组织解离,采用3次差速贴壁法从犬大脑皮质中纯化细胞。3次贴壁后观... 为建立研究嗜神经病毒致病机制的可靠细胞模型,本实验将健康幼犬剖杀无菌去除其脑膜、脑干及血管等结构,收集并处理大脑皮质后,利用神经组织解离试剂盒及配套设备对大脑组织解离,采用3次差速贴壁法从犬大脑皮质中纯化细胞。3次贴壁后观察可见,贴壁细胞体积较大,突起数量增加,突起变长有分支,分支呈交叉状态。进一步采用间接免疫荧光试验(IFA)和RT-PCR鉴定纯化后的细胞,结果显示,纯化的细胞中少突胶质前体细胞标记物CSPG4抗体和基因检测均为阳性,而其他细胞标记物的抗体和基因检测均为阴性,表明获得了纯化的犬少突胶质前体细胞(OPC),纯度约97%。对分离纯化后的OPC采用PCR/RT-PCR检测常见犬外源病毒,结果显示,犬瘟热病毒(CDV)、犬副流感病毒5型(CPIV5)、犬细小病毒(CPV)均为阴性结果,表明获得的OPC无常见犬外源病毒感染。将犬源嗜神经病毒CDV和CPIV5分别感染OPC,感染后24 h和48 h观察细胞形态,并采用IFA鉴定两种病毒的感染状况。细胞形态观察可见,接种CDV 24 h出现细胞病变,48 h后的细胞病变更为明显,大部分细胞圆缩、聚堆、甚至脱落;接种CPIV524 h的细胞无明显病变,48 h出现圆缩、聚堆,但无明显脱落,与自然感染的细胞形态一致。IFA结果显示,CDV和CPIV5感染的细胞均出现绿色荧光,但CDV感染细胞出现的绿色荧光多于CPIV5感染的细胞。上述结果表明犬源OPC可作为CDV、CPIV5等嗜神经病毒感染的细胞模型。本研究获得了犬大脑皮质OPC的体外分离、纯化及培养方法,建立了嗜神经病毒感染的细胞模型,为该类病毒致病机制的研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 少突胶质前体细胞(OPC) 原代细胞培养 犬 嗜神经病毒
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一株猫疱疹病毒(Ⅰ型)的分离、鉴定及致病性研究
2
作者 冯可昕 高思璐 +3 位作者 陈梦茹 刘哲 刘家森 曲连东 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第3期245-251,共7页
猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)侵入猫上呼吸道系统引发的鼻气管炎是全世界猫科动物中常见的一种病毒性传染疾病,目前我国分离到FHV-1的报道并不多。本研究采集患呼吸系统疾病猫眼鼻拭子,利用猫肾细胞(F81)分离病毒和纯化,结果显示感染分离产物... 猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)侵入猫上呼吸道系统引发的鼻气管炎是全世界猫科动物中常见的一种病毒性传染疾病,目前我国分离到FHV-1的报道并不多。本研究采集患呼吸系统疾病猫眼鼻拭子,利用猫肾细胞(F81)分离病毒和纯化,结果显示感染分离产物的F81细胞出现明显的疱疹病毒细胞病变(CPE),对其细胞培养物上清进行PCR鉴定,目的条带符合预期大小(625 bp)。进一步对该分离株进行IFA鉴定,结果显示感染该分离株的F81与FHV-1多克隆抗体作用后出现特异性绿色荧光。对分离产物进行超速离心和纯化后经电子显微镜可观察到球形、有囊膜、直径约为200 nm的疱疹病毒样颗粒。将该分离株FHV-1命名为FHV-Q3株。PCR扩增FHV-Q3的gD基因片段,并对其进行测序,结果显示,与NCBI中已登录的FHV-1 gD基因的同源性达99%以上。利用Reed-Muench法测定FHV-Q3的TCID_(50),结果显示FHV-Q3的病毒效价为1.78×10^(6) TCID_(50)/mL。将FHV-Q3株第6代5倍稀释后以滴鼻点眼的方式接种3只3月龄的中华田园猫,同时设置PBS接种的猫作为对照组。于感染后3 d、6 d、9 d、12 d、15 d采集眼鼻拭子并进行临床症状观察和评分,感染后16 d剖杀各组猫并取气管、喉、肺,利用qPCR检测病毒载量,同时制作气管和肺脏的病理切片并观察。结果显示,FHV-Q3株感染后会引发典型的鼻气管炎症状,在实验的15 d内无死亡;眼鼻拭子病毒载量最高可达7.9×10^(6)拷贝/μL,组织脏器中喉部的病毒粒子含量最高可达7.9×10^(3)拷贝/mg;组织病理切片观察显示,仅肺部有明显的炎症性细胞浸润和肺泡上皮细胞增生。综上所述本研究在猫眼鼻拭子中分离出了FHV-1,该分离株可引起典型的猫病毒性鼻气管炎症状,该结果不仅丰富了我国FHV-1分离株的病毒库,也为今后FHV-1的临床研究以及FHV-1相关生物制品的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒Ⅰ型 病毒的分离鉴定 致病性研究
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仙台病毒F基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达及抗原性分析 被引量：5
3
作者 曲连东 蒋良丰 +6 位作者 刘家森 司昌德 郭东春 姜骞 林欢 韩凌霞 刘娣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期347-350,共4页
为真核表达仙台病毒(SeV)融合蛋白(F)基因,本研究根据GenBank登录的SeV F基因序列设计合成一对特异性引物,以pMD18-T-F阳性重组质粒为模板扩增F基因,并将其克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac HTa中,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,转化感受... 为真核表达仙台病毒(SeV)融合蛋白(F)基因,本研究根据GenBank登录的SeV F基因序列设计合成一对特异性引物,以pMD18-T-F阳性重组质粒为模板扩增F基因,并将其克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac HTa中,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,转化感受态细胞DH10Bac,提取重组杆粒rBacmid-F,经PCR鉴定正确将rBacmid-F转染Sf9细胞,连续传代后,细胞病变明显。经SDS-PAGE分析,成功表达了相对分子量为65ku左右的F蛋白,western blot和ELISA分析表明重组F蛋白具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 仙台病毒 F基因 重组杆状病毒表达系统
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穴位接种猪TGE苗家兔β－EP与免疫活性细胞动态研究 被引量：5
4
作者 曲连东 褚桂芳 +3 位作者 蔡虹 王继科 刘洪 孟宪松 《中兽医医药杂志》 北大核心 1994年第3期3-6,共4页
本试验用酶标组化方法对穴位接种猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）苗家兔外周血、脾、淋巴结的β－内啡肽（β－ＥＰ）进行了动态定量和定位研究，外周血β－ＥＰ在穴位注苗后３０ｍｉｎ有一个峰值，迅速下降后缓慢升高，第５天达第２个峰值，... 本试验用酶标组化方法对穴位接种猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）苗家兔外周血、脾、淋巴结的β－内啡肽（β－ＥＰ）进行了动态定量和定位研究，外周血β－ＥＰ在穴位注苗后３０ｍｉｎ有一个峰值，迅速下降后缓慢升高，第５天达第２个峰值，然后缓慢下降；脾和淋巴结仅在注苗后５天出现一个峰值。首次发现活化Ｔ细胞存在β－ＥＰ阳性反应细胞，而Ｂ细胞不存在。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎 Β-内啡肽 猪病 疫苗
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实验性慢性氟中毒家兔肝、肾动态超微病理学研究 被引量：2
5
作者 曲连东 褚桂芳 +2 位作者 滕国麟 张伟木 杨贵军 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 1994年第4期360-365,共6页
２４只２０～３０日龄体重０．７～１．２ｋｇ新西兰白兔随机分为实验组１５只（每日每只随饮水摄取ＮａＦ４５ｍｇ／ｋｇ体重）及健康对照组９只（饮用自来水）．两组在相同饲养管理条件下实验观察．分别在实验第３０，６０．９０ｄ时... ２４只２０～３０日龄体重０．７～１．２ｋｇ新西兰白兔随机分为实验组１５只（每日每只随饮水摄取ＮａＦ４５ｍｇ／ｋｇ体重）及健康对照组９只（饮用自来水）．两组在相同饲养管理条件下实验观察．分别在实验第３０，６０．９０ｄ时迫杀，对肝和肾进行超微病理学研究．结果表明，肝和肾实质细胞膜系统损伤明显，胶原原纤维再生增多，且有再生障碍及再生后的损伤性变化． 展开更多
关键词 慢性 氟中毒 肝 肾 病理学 兔 家兔
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穴位接种IBD双价细胞苗鸡的抗原定位及免疫活性细胞监测 被引量：2
6
作者 曲连东 褚桂芳 +5 位作者 王笑梅 王继科 刘洪 蔡虹 尹训南 孟宪松 《中国畜禽传染病》 CSCD 1997年第5期20-23,共4页
１５日龄滨白鸡后海穴接种鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）双价细胞苗，采用免疫荧光组化跟踪抗原定位和免疫活性细胞的免疫形态学监测，以评价其免疫效果。同时与口服和肌肉免疫途径进行了对比试验。结果表明，后海穴穴位免疫优于口服免疫... １５日龄滨白鸡后海穴接种鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）双价细胞苗，采用免疫荧光组化跟踪抗原定位和免疫活性细胞的免疫形态学监测，以评价其免疫效果。同时与口服和肌肉免疫途径进行了对比试验。结果表明，后海穴穴位免疫优于口服免疫和肌肉免疫。 展开更多
关键词 鸡病 IBD 疫苗 穴位接种 抗原定位 免疫
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经蓝舌病病毒云南株攻击绵羊的颊部超微病理学观察 被引量：1
7
作者 曲连东 褚桂芳 +3 位作者 王继科 刘洪 蔡虹 尹训南 《中国畜禽传染病》 CSCD 1995年第5期50-52,共3页
用蓝舌病病毒云南株强毒攻击绵羊,对其颊部进行了超微病理学研究。结果表明,颊粘膜棘细胞层严重损伤,表现为棘细胞核浓缩,崩解,线粒体肿胀变圆,乃至破裂,粗面内质网扩张,脱颗粒,间桥断裂,形成大量空泡;固有层血管内皮细胞翘起,脱离基膜... 用蓝舌病病毒云南株强毒攻击绵羊,对其颊部进行了超微病理学研究。结果表明,颊粘膜棘细胞层严重损伤,表现为棘细胞核浓缩,崩解,线粒体肿胀变圆,乃至破裂,粗面内质网扩张,脱颗粒,间桥断裂,形成大量空泡;固有层血管内皮细胞翘起,脱离基膜,内皮细胞内也可见大量空泡;在攻毒后期,固有层有嗜中性粒细胞,巨噬细胞和淋巴细胞浸润,成纤维细胞增生,胶原原纤维增多且排列紊乱。上述病理学变化说明,蓝舌病病毒云南株主要危害绵羊颊棘细胞层和固有层血管内皮细胞,造成其损伤,从而揭示出蓝舌病病毒可能是在绵羊颊棘细胞和固有层血管内皮细胞内增殖的,颇棘细胞和血管内皮细胞都是蓝舌病病毒的靶细胞。 展开更多
关键词 羊病 绵羊 蓝舌病 病毒 超微病理学
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家禽的骨骼疾病(综述) 被引量：6
8
作者 曲连东 褚桂芳 《辽宁畜牧兽医》 1995年第1期31-33,共3页
在现代家禽生产中,骨骼疾病无论对肉鸡还是蛋鸡生产都造成了巨大损失。需要营养的缺乏和内环境改变都可引起骨骼疾病。最近的调查研究表明,骨骼疾病可导致2—8％的肉鸡死亡,8周龄的雄性鸡死亡率更高一些。火鸡大约3—4％死于骨骼疾病。... 在现代家禽生产中,骨骼疾病无论对肉鸡还是蛋鸡生产都造成了巨大损失。需要营养的缺乏和内环境改变都可引起骨骼疾病。最近的调查研究表明,骨骼疾病可导致2—8％的肉鸡死亡,8周龄的雄性鸡死亡率更高一些。火鸡大约3—4％死于骨骼疾病。高产蛋鸡至产蛋结束,由于骨骼的脆性可导致大约30％的鸡发生骨折。 展开更多
关键词 禽病 家禽 骨骼疾病
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家兔外用免疫器官β－内腓肽的免疫组织化学研究
9
作者 曲连东 褚桂芳 +2 位作者 王继科 刘洪 蔡虹 《中国畜禽传染病》 CSCD 1994年第6期22-24,共3页
采用荧光免疫组织化学方法，对家兔外周免疫器官β－内腓肽（β－Ｅｐ）进行定位研究．β－Ｅｐ阳性反应细胞存在于Ｔ淋巴细胞区，而Ｂ淋巴细胞区不存在。推恻β－Ｅｐ对外周免疫器官调节作用是通过Ｔ淋巴细胞完成的。在Ｔ淋巴细胞区即... 采用荧光免疫组织化学方法，对家兔外周免疫器官β－内腓肽（β－Ｅｐ）进行定位研究．β－Ｅｐ阳性反应细胞存在于Ｔ淋巴细胞区，而Ｂ淋巴细胞区不存在。推恻β－Ｅｐ对外周免疫器官调节作用是通过Ｔ淋巴细胞完成的。在Ｔ淋巴细胞区即有细胞膜上的β－Ｅｐ阳性细胞反应，又有细胞浆内β－Ｅｐ阳性细胞反应，说明β－Ｅｐ对免疫器官的调节作用可能存在反馈调节机制。 展开更多
关键词 家兔 外周免疫器官 β 内腓肽 免疫组织化学
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关注禽流感的综合预防
10
作者 曲连东 周琦 +1 位作者 叶喜永 张萍 《中国农村科技》 2001年第11期30-32,共3页
2001年5月16日继1997年香港出现因感染H5亚型禽流感病毒致人死亡事件,使全港百余万只鸡全部被扑杀销毁后,再次宣布在活鸡市场发现H5N1病毒。
关键词 禽流感 综合预防 H5亚型 病毒 鸡 禽类产品 传播途径 血清亚型 症状 鉴定 分型 监测
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猪断乳后多系统衰竭综合征诊断技术研究进展
11
作者 曲连东 崔尚金 《畜牧兽医科技信息》 2005年第11期16-19,共4页
关键词 多系统衰竭综合征 猪圆环病毒2型 诊断技术 断乳后 淋巴结肿大 间质性肺炎 PMWS 组织学变化 临床表现 呼吸困难
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家禽的骨骼疾病(综述)
12
作者 曲连东 褚桂芳 《辽宁畜牧兽医》 1995年第2期37-39,共3页
佝偻病(Rickets) 佝偻病是由维生素D_3、钙磷缺乏或比例失调而引起的。其特征是生长板增厚,矿物质沉着减少,骨化受阻。在肉仔鸡,经常可见长骨屈曲,引起跛行。常发部位是胫骨近端。亚临床型的佝偻病报道并不多。佝偻病也可由过度劳累而... 佝偻病(Rickets) 佝偻病是由维生素D_3、钙磷缺乏或比例失调而引起的。其特征是生长板增厚,矿物质沉着减少,骨化受阻。在肉仔鸡,经常可见长骨屈曲,引起跛行。常发部位是胫骨近端。亚临床型的佝偻病报道并不多。佝偻病也可由过度劳累而引起。 佝偻病常见的是低血钙型和低血磷型。低血钙型佝偻病是由于软骨细胞数量增多而骺软骨增厚,伴随血液供应障碍,这是典型常发的佝偻病,是低血钙引起的。低血磷型佝偻病表现为软骨细胞肥大,而使骺软骨增厚。两型佝偻病均可见钙化软骨减少。钙磷比例直接影响佝偻病的发生发展。 展开更多
关键词 禽病 家禽 骨骼疾病
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猪断奶后多系统衰竭综合征诊断方法的系列研究 被引量：14
13
作者 崔尚金 全艳平 +6 位作者 李曦 蔡阳 符芳 胡守萍 付德霞 吴东来 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期146-149,共4页
本研究对猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的诊断方法临床症状和病理变化、病毒的分离与鉴定、聚合酶链式反应(PCR)、间接免疫荧光试验(IFA)、间接酶联免疫吸附试验(IELISA)、免疫组织化学试验(IHC)等进行了系列研究,这些方法适用于猪断... 本研究对猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的诊断方法临床症状和病理变化、病毒的分离与鉴定、聚合酶链式反应(PCR)、间接免疫荧光试验(IFA)、间接酶联免疫吸附试验(IELISA)、免疫组织化学试验(IHC)等进行了系列研究,这些方法适用于猪断奶后多系统衰竭综合征的诊断。 展开更多
关键词 猪圆环病毒 病毒分离 聚合酶链反应 免疫组化 酶联免疫吸附试验
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国内部分地区多杀性巴氏杆菌荚膜血清型和基因型的研究 被引量：22
14
作者 王林柏 孙久鹤 +5 位作者 郭东春 曹培丽 刘家森 刘春国 刘大飞 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期116-119,共4页
为了解国内部分地区不同动物多杀性巴氏杆菌(P.multicida)流行情况,本研究以36株P.multicida为研究对象,通过多重荚膜PCR、多位点序列分型(MLST)和脂多糖多重PCR(LPS-m PCR)对其荚膜型和基因型进行鉴定。采用多重荚膜PCR方法将36株细菌... 为了解国内部分地区不同动物多杀性巴氏杆菌(P.multicida)流行情况,本研究以36株P.multicida为研究对象,通过多重荚膜PCR、多位点序列分型(MLST)和脂多糖多重PCR(LPS-m PCR)对其荚膜型和基因型进行鉴定。采用多重荚膜PCR方法将36株细菌的荚膜血清型分为A、B和D 3种,其中禽源P.multicida主要以A为主;以LPS-m PCR方法将P.multicida分为L1、L2、L3和L6 4种LPS基因型,禽源P.multicida主要为L1型;通过MLST技术将P.multicida分为ST-129、ST-8、ST-58、ST-5、ST-13、ST-50和ST-122 7种ST型,禽源P.multicida主要为ST-129型。本研究为P.multicida的流行病学监测和基因多样性提供了技术支撑。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 多位点序列分型 脂多糖多重PCR LPS基因型
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犬瘟热病毒A株核衣壳蛋白基因的克隆、表达及特性分析 被引量：13
15
作者 周洁 李昌文 +3 位作者 张洪英 陈洪岩 李建伟 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期485-488,共4页
根据GenBank中A75/14株犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR从病毒总RNA中扩增出1600bp的N基因,将其克隆于pMD18-T载体对其进行序列分析。结果表明A株CDV与其它毒株N基因序列的同源性较高。将N基因... 根据GenBank中A75/14株犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR从病毒总RNA中扩增出1600bp的N基因,将其克隆于pMD18-T载体对其进行序列分析。结果表明A株CDV与其它毒株N基因序列的同源性较高。将N基因定向克隆于原核表达载体pPROEXTMHT,用重组质粒pPROEXTMHT-N转化感受态E.coliDH5a细胞,用IPTG于37℃诱导表达了分子量约63Ku的重组N蛋白,占菌体总蛋白18%。经Westernblot分析证实所表达的重组N蛋白具反应活性,将表达产物用ProBondTM纯化试剂盒进行了纯化。用所获得的重组蛋白免疫家兔制备的多克隆抗体可与CDV全病毒发生特异性反应,经琼扩试验测定其效价为1∶16。本实验为下一步用重组N蛋白作为诊断用抗原,建立特异的CDV抗体检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 核衣壳蛋白 表达 反应活性 多克隆抗体
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同时检测猫细小病毒、杯状病毒、疱疹病毒1型多重PCR方法的建立 被引量：15
16
作者 王翀 刘大飞 +6 位作者 刘春国 柴洪亮 张洪英 程景 吕健 华育平 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期31-33,共3页
为建立检测多种猫科病毒的多重PCR方法,本研究参照GenBank中登录的猫细小病毒(FPV)的NS基因序列、猫杯状病毒(FCV)的ORF2基因序列以及猫疱疹病毒(FHV-I)的TK基因序列设计合成3对引物,通过对反应体系及条件的优化,建立了可以同时扩增FPV(... 为建立检测多种猫科病毒的多重PCR方法,本研究参照GenBank中登录的猫细小病毒(FPV)的NS基因序列、猫杯状病毒(FCV)的ORF2基因序列以及猫疱疹病毒(FHV-I)的TK基因序列设计合成3对引物,通过对反应体系及条件的优化,建立了可以同时扩增FPV(392 bp)、FCV(922 bp)和FHV-I(290 bp)的多重PCR方法。该检测方法结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测出以上3种病毒,FPV、FCV和FHV的最低检出限分别为101.5TCID50、101.9TCID50和101.2TCID50。以该方法对黑龙江省各地区收集的120份血清进行检测,其中FPV、FCV和FHV-I的阳性率分别为5%(6/120)、2.5%(3/120)和4.1%(5/120),证明该方法可以用于3种病毒的检测,具有良好的特异性和敏感性。 展开更多
关键词 猫细小病毒 猫杯状病毒 猫疱疹病毒 多重PCR
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产肠毒素大肠杆菌多重PCR检测方法的建立 被引量：11
17
作者 曲泽慧 陈佩佩 +3 位作者 张爱芹 郭东春 师东方 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期980-982,共3页
为快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌毛(K88和K99)和毒素(STa)基因,本研究设计合成了针对K88、K99和STa基因的3对特异性引物,对K88、K99和STa基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、K99和STa的多重PCR方法。该方法对K88、K99和STa... 为快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌毛(K88和K99)和毒素(STa)基因,本研究设计合成了针对K88、K99和STa基因的3对特异性引物,对K88、K99和STa基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、K99和STa的多重PCR方法。该方法对K88、K99和STa基因的扩增产物分别为237 bp,314 bp和166 bp;此外,该方法具有良好的灵敏性和特异性。本实验建立的多重PCR方法为致幼畜腹泻ETEC的检测提供了快速准确方法。用所建立的多重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果 2株为K99/STa阳性,1株为STa阳性。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 多重PCR K88菌毛 K99菌毛 STa毒素
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犬瘟热重组N蛋白抗原间接ELISA方法的建立及应用 被引量：13
18
作者 姜骞 周洁 +6 位作者 刘家森 李慕瑶 司昌德 韩凌霞 孟庆文 陈洪岩 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期225-228,232,共5页
本研究以纯化的犬瘟热病毒(CDV)重组N蛋白为诊断抗原,建立了犬瘟热病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rN-CDV ELISA。确定最佳抗原包被量为0.167μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,其作用时间为45 min,羊抗犬酶标抗体稀释... 本研究以纯化的犬瘟热病毒(CDV)重组N蛋白为诊断抗原,建立了犬瘟热病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rN-CDV ELISA。确定最佳抗原包被量为0.167μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,其作用时间为45 min,羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1∶2 000,作用时间为60 min,S/P值≥0.208者判为阳性,S/P值≤0.16者判为阴性,介于两者之间者判为可疑。该抗原不与犬细小病毒、犬传染性肝炎、犬副粘病毒、犬波特氏杆菌等4种疾病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内、批间重复试验,变异系数均小于15%,具有良好的重复性;检测血清样品96份,与进口诊断试剂盒的符合率为97.1%。本研究为现地免疫犬群抗体检测和进行CDV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 重组N蛋白 间接ELISA
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兔出血症抗体间接ELISA检测试剂盒的研制与初步应用 被引量：14
19
作者 刘怀然 关云涛 +4 位作者 李昌文 张龄 姜骞 陈洪岩 曲连东 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2006年第1期20-24,共5页
目的建立检测兔病毒性出血症（RHD）血清抗体的间接ELISA方法并组装成试剂盒，进行初步应用。方法通过差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯RHDV病毒粒子作为包被抗原，优化反应条件和筛选试剂，建立间接ELISA检测方法，组装试剂盒并对其总... 目的建立检测兔病毒性出血症（RHD）血清抗体的间接ELISA方法并组装成试剂盒，进行初步应用。方法通过差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯RHDV病毒粒子作为包被抗原，优化反应条件和筛选试剂，建立间接ELISA检测方法，组装试剂盒并对其总体性能进行评价。结果试剂盒敏感性为血凝抑制试验的4～32倍，重复性和特异性良好，保质期为4℃ 3个月。对105份兔血清进行随机检测，与血凝抑制试验的复核率为95％。结论本试剂盒可以在检测和科研中初步应用。 展开更多
关键词 出血病病毒 兔 酶联免疫吸附测定 试剂盒 诊断
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兔出血症病毒VP60蛋白的原核表达及检测方法初步应用 被引量：7
20
作者 刘怀然 胡迎东 +4 位作者 陈洪岩 张龄 李昌文 关云涛 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期201-204,共4页
VP60是免出血症病毒（RHDV）的主要结构蛋白，也是免疫原性蛋白，与诱导抗病毒免疫反应直接相关，因而也是检测用首选抗原。本实验在原核系统pPRoEX^TMHTa中表达了VP60基因，经SDS—PAGE电泳中可见表达带。Western blot鉴定结果表明，... VP60是免出血症病毒（RHDV）的主要结构蛋白，也是免疫原性蛋白，与诱导抗病毒免疫反应直接相关，因而也是检测用首选抗原。本实验在原核系统pPRoEX^TMHTa中表达了VP60基因，经SDS—PAGE电泳中可见表达带。Western blot鉴定结果表明，重组蛋白可被RHD阳性血清特异性识别，具有相应的抗原性。将表达蛋白经SDS—PAGE电泳切胶纯化后免疫BALB／c小鼠，免疫血清经全病毒ELISA检测，效价可达1：3200-1：6400，经琼脂扩散试验检测效价为1：16。重组蛋白纯化、复性后，作为包被抗原初步建立了间接ELISA方法，并检测了48份免血清样品，与全病毒间接ELSIA试剂盒检测结果相同。实验结果表明．用原核系统表达的VP60蛋白．可以作为RHD新型诊断试剂的候选抗原。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 衣壳蛋白 VP60基因 原核表达 诊斯
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