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新的人内源性逆转录病毒NP9基因的分子克隆与病毒蛋白表达 被引量:1
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作者 任跃忠 戴巧定 徐荣臻 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2005年第4期361-364,371,共5页
目的:研究新近发现的人内源性逆转录病毒NP9基因与自身免疫性疾病的相关性及其可能的作用机制,构建该基因的蛋白表达系统。方法:提取自身免疫性疾病患者外周血单个核细胞(PBMCs)的总RNA,利用RT-PCR技术,扩增NP9基因,然后将该片段进行T-... 目的:研究新近发现的人内源性逆转录病毒NP9基因与自身免疫性疾病的相关性及其可能的作用机制,构建该基因的蛋白表达系统。方法:提取自身免疫性疾病患者外周血单个核细胞(PBMCs)的总RNA,利用RT-PCR技术,扩增NP9基因,然后将该片段进行T-A克隆并测序鉴定,纯化回收后亚克隆于原核表达载体pQE30中,然后提取质粒,酶切鉴定;最后经IPTG诱导,原核表达重组子在M15宿主菌进行表达,并进行SDS-PAGE与Western印迹分析与鉴定。结果:应用RT-PCR技术,从系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞的总RNA中扩增到一条大小约为250bp的片段,经T-A克隆与测序鉴定,证实此片段为NP9基因,具有一个完整的开放阅读框架;将pQE30-NP9重组子转化入宿主菌,用IPTG诱导菌体表达NP9重组蛋白,经SDS-PAGE电泳和Western印迹技术鉴定证实:在相对分子量约9kD处见明显的病毒特异性的高表达条带。结论:已成功克隆了新的人内源性逆转录病毒NP9基因,并经IPTG诱导,在M15宿主菌中表达了相应的病毒蛋白,为进一步研究该逆转录病毒与自身免疫性疾病的相关性奠定基础。 展开更多
关键词 内源性逆转录病毒 基因 病毒 病毒NP9基因 克隆 分子 病毒蛋白表达
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原发性干燥综合征的系统性损害浅析 被引量:1
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作者 康海英 戴巧定 宋欣伟 《实用中医内科杂志》 2006年第4期351-353,共3页
关键词 干燥综合征 系统性损害 分析
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类风关Ⅰ号对佐剂性关节炎大鼠SP影响的实验研究
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作者 康海英 宋欣伟 +1 位作者 张彦 戴巧定 《实用中医内科杂志》 2010年第8期15-17,共3页
[目的]以雷公藤多甙作为阳性药物对照组,观察中药类风关1号对佐剂型关节炎(AA)大鼠SP的影响。[方法]大鼠右侧后肢足跖部皮内注射完全弗氏佐剂诱导出从大鼠模型,经类风关Ⅰ号、雷公藤多甙治疗30天后,放射免疫法测定大鼠脊髓后角、血浆、... [目的]以雷公藤多甙作为阳性药物对照组,观察中药类风关1号对佐剂型关节炎(AA)大鼠SP的影响。[方法]大鼠右侧后肢足跖部皮内注射完全弗氏佐剂诱导出从大鼠模型,经类风关Ⅰ号、雷公藤多甙治疗30天后,放射免疫法测定大鼠脊髓后角、血浆、膝关节滑膜中的SP含量。[结果]与雷公藤多甙比较,类风关Ⅰ号降低大鼠脊髓后角SP含量幅度较明显(P<0.05)。[结论]类风关Ⅰ号可能通过影响SP的合成和释放而治疗RA。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 P物质 中医药疗法
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