目的探讨达格列净对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠足细胞损伤的影响及相关分子机制。方法46只Wistar雄性大鼠以随机数字表法分为对照组(NC组,n=10)和造模组(n=36)。成功构建DN模型的30只造模组大鼠随机分为模型组(DN组)、达...目的探讨达格列净对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠足细胞损伤的影响及相关分子机制。方法46只Wistar雄性大鼠以随机数字表法分为对照组(NC组,n=10)和造模组(n=36)。成功构建DN模型的30只造模组大鼠随机分为模型组(DN组)、达格列净组(Dapa组)、达格列净+雷帕霉素组(Dapa+Rapa组),每组10只。各组大鼠均给药干预12周,1次/d。采用血糖仪检测大鼠空腹血糖(FBG)。全自动生化分析仪测定大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白(UP)。HE染色观察大鼠肾组织病理形态学。透射电子显微镜观察大鼠肾脏足细胞变化。Western blot法检测足细胞标志蛋白(nephrin、podocin)、自噬蛋白(Beclin-1、LC3Ⅱ、P62)及mTOR信号通路相关蛋白(mTOR、p-mTOR)表达。结果与NC组比较,DN组大鼠肾小球体积增大,肾小管上皮细胞空泡变性,存在大量炎性细胞浸润;足细胞足突融合,排列紊乱,可见明显线粒体嵴断裂或空泡化。与DN组比较,Dapa组和Dapa+Rapa组大鼠肾脏病理损伤明显减轻;足细胞可见部分足突融合,排列较整齐,整体情况明显改善。与Dapa组比较,Dapa+Rapa组大鼠肾脏病理损伤和足细胞整体情况显著改善。与NC组比较,DN组大鼠血清FBG、SCr、BUN、24 h UP水平均升高(P<0.05);肾组织nephrin、podocin、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达水平均下降,P62蛋白表达水平、p-mTOR/mTOR比值均升高(P<0.05)。与DN组比较,Dapa组和Dapa+Rapa组大鼠血清FBG、SCr、BUN、24 h UP水平均降低(P<0.05),肾组织nephrin、podocin、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达水平均升高(P<0.05),P62蛋白表达水平、p-mTOR/mTOR比值均降低(P<0.05)。与Dapa组比较,Dapa+Rapa组大鼠血清FBG、SCr、BUN、24 h UP水平均降低(P<0.05),肾组织nephrin、podocin、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达水平均升高(P<0.05),P62蛋白表达水平、p-mTOR/mTOR比值均降低(P<0.05)。结论达格列净通过调节足细胞自噬减轻DN足细胞损伤,进而改善DN,其作用机制可能与调控mTOR自噬信号通路有关。展开更多
文摘目的探讨达格列净对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠足细胞损伤的影响及相关分子机制。方法46只Wistar雄性大鼠以随机数字表法分为对照组(NC组,n=10)和造模组(n=36)。成功构建DN模型的30只造模组大鼠随机分为模型组(DN组)、达格列净组(Dapa组)、达格列净+雷帕霉素组(Dapa+Rapa组),每组10只。各组大鼠均给药干预12周,1次/d。采用血糖仪检测大鼠空腹血糖(FBG)。全自动生化分析仪测定大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白(UP)。HE染色观察大鼠肾组织病理形态学。透射电子显微镜观察大鼠肾脏足细胞变化。Western blot法检测足细胞标志蛋白(nephrin、podocin)、自噬蛋白(Beclin-1、LC3Ⅱ、P62)及mTOR信号通路相关蛋白(mTOR、p-mTOR)表达。结果与NC组比较,DN组大鼠肾小球体积增大,肾小管上皮细胞空泡变性,存在大量炎性细胞浸润;足细胞足突融合,排列紊乱,可见明显线粒体嵴断裂或空泡化。与DN组比较,Dapa组和Dapa+Rapa组大鼠肾脏病理损伤明显减轻;足细胞可见部分足突融合,排列较整齐,整体情况明显改善。与Dapa组比较,Dapa+Rapa组大鼠肾脏病理损伤和足细胞整体情况显著改善。与NC组比较,DN组大鼠血清FBG、SCr、BUN、24 h UP水平均升高(P<0.05);肾组织nephrin、podocin、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达水平均下降,P62蛋白表达水平、p-mTOR/mTOR比值均升高(P<0.05)。与DN组比较,Dapa组和Dapa+Rapa组大鼠血清FBG、SCr、BUN、24 h UP水平均降低(P<0.05),肾组织nephrin、podocin、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达水平均升高(P<0.05),P62蛋白表达水平、p-mTOR/mTOR比值均降低(P<0.05)。与Dapa组比较,Dapa+Rapa组大鼠血清FBG、SCr、BUN、24 h UP水平均降低(P<0.05),肾组织nephrin、podocin、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达水平均升高(P<0.05),P62蛋白表达水平、p-mTOR/mTOR比值均降低(P<0.05)。结论达格列净通过调节足细胞自噬减轻DN足细胞损伤,进而改善DN,其作用机制可能与调控mTOR自噬信号通路有关。
