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猪β-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其活性
被引量：
8
1
作者
姚清侠
曹毅
+4 位作者
钱平
徐卓菲
何雁南
司有辉
陈焕春
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期506-512,共7页
为了高效表达分泌型的猪β-干扰素,将去除信号肽的编码梅山猪β-干扰素成熟多肽基因（mPoIFNβ）插入酵母-大肠杆菌穿梭载体pPIC9K,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFNβ。将以SalⅠ线性化的pPIC9K-mPoIFNβ用化学方法（LiCl）,与...
为了高效表达分泌型的猪β-干扰素,将去除信号肽的编码梅山猪β-干扰素成熟多肽基因（mPoIFNβ）插入酵母-大肠杆菌穿梭载体pPIC9K,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFNβ。将以SalⅠ线性化的pPIC9K-mPoIFNβ用化学方法（LiCl）,与鲑鱼精DNA（ssDNA）共转化入毕赤酵母菌株GS115,转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后获得阳性菌株,再经高浓度G418筛选到多拷贝菌株。以1%甲醇连续诱导4 d,SDS-PAGE和Western blot检测结果表明：表达产物为22 ku和26 ku的混合物,在GS115中的表达量约为80 mg/L,占分泌型总蛋白的29.4%-30.8%,表明猪β-干扰素基因在毕赤酵母中获得了高效分泌表达。对表达产物进行理化分析发现,重组酵母菌表达的蛋白耐酸（pH2）,对热（56℃）部分敏感,并能被特异性的抗猪β-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应。以细胞病变抑制法（CPE50）测定干扰素抗病毒活性,在MDBK（牛肾细胞系）中表达的猪β-干扰素的抗VSV比活性达到2.0×10^6U/mg;对口蹄疫病毒在IBRS-2细胞中的增殖也有明显的抑制作用。
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关键词
猪β-干扰素
毕赤酵母
分泌表达
抗病毒活性
口蹄疫病毒
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职称材料
多杀性巴氏杆菌HN06基因组分泌蛋白的预测与分析
被引量：
4
2
作者
彭忠
梁婉
+5 位作者
刘文静
徐卓菲
谭臣
吴斌
周锐
陈焕春
《动物医学进展》
北大核心
2015年第12期6-10,共5页
预测分析多杀性巴氏杆菌HN06株的分泌蛋白并筛选多株巴氏杆菌共有Sec途径分泌蛋白,为研究多杀性巴氏杆菌亚单位疫苗候选蛋白奠定基础。利用Signal P、Tmhmm、Phobius、Target P、Lipop、GPI-SOM、Tat P、SecretomeP对已完成全基因组测...
预测分析多杀性巴氏杆菌HN06株的分泌蛋白并筛选多株巴氏杆菌共有Sec途径分泌蛋白,为研究多杀性巴氏杆菌亚单位疫苗候选蛋白奠定基础。利用Signal P、Tmhmm、Phobius、Target P、Lipop、GPI-SOM、Tat P、SecretomeP对已完成全基因组测序的多杀性巴氏杆菌HN06株进行分泌蛋白预测及功能分析,并结合已公布全基因组序列的多杀性巴氏杆菌Pm70、3480、36950的基因组序列筛选4株多杀性巴氏杆菌中共有的Sec途径分泌蛋白。结果表明,预测出HN06株分泌蛋白共373个,其中Sec分泌蛋白157个,Tat途径分泌蛋白8个,无信号肽的非经典途径分泌蛋白208个。Sec分泌蛋白中被Ⅰ型信号肽酶识别的有120个,被Ⅱ型信号肽酶识别的有37个。再对Pm70、3480、36950株进行Sec途径分泌蛋白的预测,使用blastp筛选它们共有的Sec蛋白114个。经过统计发现,多杀性巴氏杆菌HN06株不同类型分泌蛋白的功能分布各有侧重,其中ABC转运蛋白和铁摄取相关蛋白对于巴氏杆菌毒力因子的研究具有很重要的意义。因此,对分泌蛋白的深入分析对于更清晰地了解巴氏杆菌的致病机制及筛选免疫原性蛋白具有重要意义。
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关键词
多杀性巴氏杆菌
分泌蛋白
预测与分析
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职称材料
猪链球菌3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶的原核表达、活性检测和同源建模
3
作者
刘璨颖
徐卓菲
付强
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第11期2318-2324,共7页
旨在以猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)为药靶,给S.suis病防治研制新型抗菌药提供理论和试验基础。原核表达了S.suis HMGR,用Ni-NTA树脂对重组蛋白质进行了纯化,并用分光光度法测定了其酶活...
旨在以猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)为药靶,给S.suis病防治研制新型抗菌药提供理论和试验基础。原核表达了S.suis HMGR,用Ni-NTA树脂对重组蛋白质进行了纯化,并用分光光度法测定了其酶活力。此外,运用CLUSTALW对同源HMGR氨基酸序列进行多序列比对。通过SWISS-MODEL对S.suis HMGR三维结构进行同源建模,并用PROCHECK评价模型的质量。酶活力测定结果显示,催化HMG-CoA还原为甲羟戊酸的反应中,S.suis HMGR最佳反应温度和pH分别为37℃和5.0,其Vmax和Km为846U·mg-1和0.213mmol·L-1。经分析显示,肺炎链球菌HMGR晶体结构(PDB ID:3QAE_A)是构建S.suis HMGR三维结构的最佳模板。构建的三维结构模型经质量评估证实为可靠的理论模型,将有助于虚拟筛选出对抗S.suis感染的新型抗生素,酶活力的测定为用试验手段验证S.suis HMGR抑制剂的有效性提供了可行性的方法。
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关键词
链球菌
HMGR
原核表达
蛋白质纯化
酶活测定
同源建模
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职称材料
题名
猪β-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其活性
被引量：
8
1
作者
姚清侠
曹毅
钱平
徐卓菲
何雁南
司有辉
陈焕春
机构
华中农业大学预防兽医学院动物病毒室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期506-512,共7页
基金
国家863计划基金(2002AA245071)
湖北省科技攻关(2004AA202B01)资助项目
文摘
为了高效表达分泌型的猪β-干扰素,将去除信号肽的编码梅山猪β-干扰素成熟多肽基因（mPoIFNβ）插入酵母-大肠杆菌穿梭载体pPIC9K,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFNβ。将以SalⅠ线性化的pPIC9K-mPoIFNβ用化学方法（LiCl）,与鲑鱼精DNA（ssDNA）共转化入毕赤酵母菌株GS115,转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后获得阳性菌株,再经高浓度G418筛选到多拷贝菌株。以1%甲醇连续诱导4 d,SDS-PAGE和Western blot检测结果表明：表达产物为22 ku和26 ku的混合物,在GS115中的表达量约为80 mg/L,占分泌型总蛋白的29.4%-30.8%,表明猪β-干扰素基因在毕赤酵母中获得了高效分泌表达。对表达产物进行理化分析发现,重组酵母菌表达的蛋白耐酸（pH2）,对热（56℃）部分敏感,并能被特异性的抗猪β-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应。以细胞病变抑制法（CPE50）测定干扰素抗病毒活性,在MDBK（牛肾细胞系）中表达的猪β-干扰素的抗VSV比活性达到2.0×10^6U/mg;对口蹄疫病毒在IBRS-2细胞中的增殖也有明显的抑制作用。
关键词
猪β-干扰素
毕赤酵母
分泌表达
抗病毒活性
口蹄疫病毒
Keywords
porcine interferon-β
Pichia pastoris
secreting expression
antiviral activity
FMDV
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
多杀性巴氏杆菌HN06基因组分泌蛋白的预测与分析
被引量：
4
2
作者
彭忠
梁婉
刘文静
徐卓菲
谭臣
吴斌
周锐
陈焕春
机构
华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室生猪健康养殖协同创新中心
华中农业大学动物科学技术学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室生猪健康养殖协同创新中心
出处
《动物医学进展》
北大核心
2015年第12期6-10,共5页
基金
国家科技支撑计划项目(2014BAD20B00)
湖北省科技支撑计划项目(2013BBB14)
文摘
预测分析多杀性巴氏杆菌HN06株的分泌蛋白并筛选多株巴氏杆菌共有Sec途径分泌蛋白,为研究多杀性巴氏杆菌亚单位疫苗候选蛋白奠定基础。利用Signal P、Tmhmm、Phobius、Target P、Lipop、GPI-SOM、Tat P、SecretomeP对已完成全基因组测序的多杀性巴氏杆菌HN06株进行分泌蛋白预测及功能分析,并结合已公布全基因组序列的多杀性巴氏杆菌Pm70、3480、36950的基因组序列筛选4株多杀性巴氏杆菌中共有的Sec途径分泌蛋白。结果表明,预测出HN06株分泌蛋白共373个,其中Sec分泌蛋白157个,Tat途径分泌蛋白8个,无信号肽的非经典途径分泌蛋白208个。Sec分泌蛋白中被Ⅰ型信号肽酶识别的有120个,被Ⅱ型信号肽酶识别的有37个。再对Pm70、3480、36950株进行Sec途径分泌蛋白的预测,使用blastp筛选它们共有的Sec蛋白114个。经过统计发现,多杀性巴氏杆菌HN06株不同类型分泌蛋白的功能分布各有侧重,其中ABC转运蛋白和铁摄取相关蛋白对于巴氏杆菌毒力因子的研究具有很重要的意义。因此,对分泌蛋白的深入分析对于更清晰地了解巴氏杆菌的致病机制及筛选免疫原性蛋白具有重要意义。
关键词
多杀性巴氏杆菌
分泌蛋白
预测与分析
Keywords
Pasteurella multocida
secretory proteins
prediction and analysis
分类号
S852.615 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪链球菌3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶的原核表达、活性检测和同源建模
3
作者
刘璨颖
徐卓菲
付强
机构
佛山科学技术学院生命科学与工程技术学院
华中农业大学动物科学与动物医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第11期2318-2324,共7页
基金
广东普通高校青年创新人才项目(2015KQNCX173)
广东省自然科学基金-博士启动(2014A030310020)
文摘
旨在以猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)为药靶,给S.suis病防治研制新型抗菌药提供理论和试验基础。原核表达了S.suis HMGR,用Ni-NTA树脂对重组蛋白质进行了纯化,并用分光光度法测定了其酶活力。此外,运用CLUSTALW对同源HMGR氨基酸序列进行多序列比对。通过SWISS-MODEL对S.suis HMGR三维结构进行同源建模,并用PROCHECK评价模型的质量。酶活力测定结果显示,催化HMG-CoA还原为甲羟戊酸的反应中,S.suis HMGR最佳反应温度和pH分别为37℃和5.0,其Vmax和Km为846U·mg-1和0.213mmol·L-1。经分析显示,肺炎链球菌HMGR晶体结构(PDB ID:3QAE_A)是构建S.suis HMGR三维结构的最佳模板。构建的三维结构模型经质量评估证实为可靠的理论模型,将有助于虚拟筛选出对抗S.suis感染的新型抗生素,酶活力的测定为用试验手段验证S.suis HMGR抑制剂的有效性提供了可行性的方法。
关键词
链球菌
HMGR
原核表达
蛋白质纯化
酶活测定
同源建模
Keywords
Streptococcus suis
3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase
prokaryotic expression
protein expression
enzyme activity assay
homology modeling
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪β-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其活性
姚清侠
曹毅
钱平
徐卓菲
何雁南
司有辉
陈焕春
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
8
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职称材料
2
多杀性巴氏杆菌HN06基因组分泌蛋白的预测与分析
彭忠
梁婉
刘文静
徐卓菲
谭臣
吴斌
周锐
陈焕春
《动物医学进展》
北大核心
2015
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
猪链球菌3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶的原核表达、活性检测和同源建模
刘璨颖
徐卓菲
付强
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
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