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肺炎克雷伯菌环介导等温扩增技术检测方法的建立 被引量：5
1
作者 徐云明 魏利斌 +7 位作者 周弇扬 李叶辉 孙智远 仲思远 陈爱宁 郭丽娟 柳增善 任洪林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期3003-3010,共8页
本研究旨在建立一种环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测食品中的肺炎克雷伯菌。选取肺炎克雷伯菌特有的毒力基因区域,设计2对引物(1对内引物、1对外引物),进行体外恒温扩增反应。对反应体系内的甜菜... 本研究旨在建立一种环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测食品中的肺炎克雷伯菌。选取肺炎克雷伯菌特有的毒力基因区域,设计2对引物(1对内引物、1对外引物),进行体外恒温扩增反应。对反应体系内的甜菜碱、核酸原料(dNTPs)、内外引物比例、Mg^(2+)浓度、反应时间和温度进行优化和选择,并进行特异性和灵敏性试验检测。应用建立的LAMP方法对灭菌鸡肉人工污染加标样品进行检测。结果表明,通过优化试验,筛选到最优反应体系和反应条件;应用优化后的LAMP反应体系对包括肺炎克雷伯菌在内的18种常见微生物进行特异性检测试验,特异性良好。肺炎克雷伯菌LAMP反应体系对基因组的最低检测限是0.875pg/μL,比传统PCR方法灵敏性高100倍。对人工鸡肉阳性样品进行检测,检测限为30CFU/mL。本试验成功建立了一种能检测食物中致病肺炎克雷伯菌的LAMP检测方法,该方法利用2对引物针对肺炎克雷伯菌目的基因6个区域进行体外恒温核酸阶梯性扩增,灵敏性更高,反应时间更短,检测成本更低。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 环介导等温扩增(LAMP) 检测
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肠炎沙门菌avrA蛋白的原核表达及其生物信息学分析
2
作者 徐云明 卜永谦 +5 位作者 卞蓉蓉 杨剑波 孙智远 陈益 柳增善 任洪林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第11期4168-4177,共10页
【目的】表达具有生物学活性的肠炎沙门菌(Salmonella Enteritidis)avrA蛋白,并对其进行生物信息学分析,为研究肠炎沙门菌avrA蛋白对猪肠道细胞免疫功能的影响提供参考。【方法】根据GenBank中肠炎沙门菌avrA蛋白全基因序列(基因ID:1254... 【目的】表达具有生物学活性的肠炎沙门菌(Salmonella Enteritidis)avrA蛋白,并对其进行生物信息学分析,为研究肠炎沙门菌avrA蛋白对猪肠道细胞免疫功能的影响提供参考。【方法】根据GenBank中肠炎沙门菌avrA蛋白全基因序列(基因ID:1254388)设计引物扩增avrA基因,回收的目的片段与表达载体pGEX-4T-1进行重组、克隆,用限制性内切酶和基因测序验证重组表达质粒的正确性。将验证后的重组表达质粒转化大肠杆菌Rosetta 2(DE3)感受态细胞,并在不同条件下对重组表达菌进行诱导表达。应用SDS-PAGE和Western blotting检测avrA蛋白的表达情况。将酶切测序后目的基因序列进行BLAST比对分析,并用ExPASy-Translate Tool软件预测avrA蛋白的氨基酸组成。应用生物信息学软件预测avrA蛋白的跨膜结构域、二级结构、三级结构及抗原性。【结果】肠炎沙门菌avrA基因CDS序列全长为909 bp,编码302个氨基酸。限制性内切酶及基因测序分析结果表明,重组表达质粒pGEX-4T-1-avrA构建成功。SDS-PAGE和Western-blotting结果表明,重组菌所表达的avrA蛋白为可溶性蛋白。重组菌在15℃诱导16 h表达的蛋白量为10 mg/L,蛋白溶解度为40%。生物信息学分析表明,avrA蛋白为膜外蛋白,该蛋白的16―301位氨基酸具有来自超家族YopJ丝氨酸/苏氨酸乙酰转移酶的保守结构域;avrA蛋白二级结构中无规则卷曲、α-螺旋、延伸链分别占43.71%、39.40%和16.89%;avrA蛋白三级结构预测结果与二级结构一致;avrA蛋白有9个与B细胞结合的抗原表位,分别在第5―40、51―68、80―92、94、101―109、146―157、160―168、199―231和236―298位氨基酸处。【结论】试验成功克隆出肠炎沙门菌avrA基因,并成功构建重组表达质粒和表达菌,诱导表达的avrA蛋白为可溶性表达;avrA蛋白为膜外蛋白,有9个能与B细胞结合的抗原表位。本研究结果为进一步制备检测肠炎沙门菌感染的抗体提供参考。 展开更多
关键词 肠炎沙门菌 avrA蛋白 原核表达 生物信息学分析
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镉、汞、铅污染及其微生物修复研究进展 被引量：29
3
作者 李兆辉 王光明 +2 位作者 徐云明 柳增善 任洪林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第9期39-43,共5页
随着人类活动的增强,重金属的应用越来越广,同时造成的环境污染问题愈发严重,特别是重金属镉、汞、铅。利用微生物技术修复环境污染中的重金属,以其成本低、效率高等特点,已经成为环境污染修复领域的研究热点。作者综述镉、汞、铅污染... 随着人类活动的增强,重金属的应用越来越广,同时造成的环境污染问题愈发严重,特别是重金属镉、汞、铅。利用微生物技术修复环境污染中的重金属,以其成本低、效率高等特点,已经成为环境污染修复领域的研究热点。作者综述镉、汞、铅污染及其微生物修复的研究进展,并提出利用微生物细胞表面展示技术构建高效吸附重金属的基因工程菌,在微生物修复方面应用的重要价值。 展开更多
关键词 镉 汞 铅 污染 微生物修复 细胞表面展示
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小尾寒羊溶菌酶基因的克隆与差异表达分析 被引量：4
4
作者 李闯 徐云明 +9 位作者 唐峰 邹德颖 刘楠楠 郭兴 杨咏洁 周玉 柳增善 卢士英 鲁承 任洪林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期19-22,共4页
本试验从猪种布鲁氏菌S2疫苗株免疫雄性小尾寒羊构建的白细胞层SSH cDNA文库中筛选1段cDNA序列,经测序和BLAST同源性搜索比对发现其为溶菌酶重组片段,该片段大小为770bp,编码148个氨基酸残基,编码的蛋白质是一种天然抗感染物质,已提交Ge... 本试验从猪种布鲁氏菌S2疫苗株免疫雄性小尾寒羊构建的白细胞层SSH cDNA文库中筛选1段cDNA序列,经测序和BLAST同源性搜索比对发现其为溶菌酶重组片段,该片段大小为770bp,编码148个氨基酸残基,编码的蛋白质是一种天然抗感染物质,已提交GenBank,登录号为JX263305。经荧光定量PCR分析,与正常组羊相比,在S2免疫14和30d的羊白细胞层中该溶菌酶基因表达轻微上调,但差异不显著(P>0.05);在免疫40d时恢复到正常水平。这也进一步说明溶菌酶是一种存在机体内必不可少的天然免疫因子,为布鲁氏菌病有效防控方面的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 白细胞层 布鲁氏菌 溶菌酶 差异表达分析 荧光定量PCR
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花绒寄甲防治桃红颈天牛的效果及其与气象因子的关系 被引量：7
5
作者 邱晓红 徐云明 +1 位作者 褚姝频 朱友理 《中国南方果树》 北大核心 2019年第4期107-110,114,共5页
2018年于江苏句容研究了释放花绒寄甲卵对桃园桃红颈天牛的防治效果。结果表明:释放比例为(20~25)∶1、(25~30)∶1的花绒寄甲释放处理对桃园桃红颈天牛均有明显抑制作用,释放初期湿度是影响其防效的主要气象因子。防治后20 d,释放比例(2... 2018年于江苏句容研究了释放花绒寄甲卵对桃园桃红颈天牛的防治效果。结果表明:释放比例为(20~25)∶1、(25~30)∶1的花绒寄甲释放处理对桃园桃红颈天牛均有明显抑制作用,释放初期湿度是影响其防效的主要气象因子。防治后20 d,释放比例(25~30)∶1的处理防效达87.8%。从防治效果和经济成本综合考虑,建议加强春秋两季虫情监测,通过分阶段多次释放来提升防效,春季发现少量桃红颈天牛排粪孔时按照(20~25)∶1的比例释放花绒寄甲,桃红颈天牛虫量较多时按照(25~30)∶1的比例释放花绒寄甲;秋季排粪孔有少许虫粪可进行人工捕杀,排粪孔虫粪较多时按照(20~25)∶1的比例释放花绒寄甲。 展开更多
关键词 花绒寄甲 桃红颈天牛 防治效果 气象因子
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不同饲喂程序对种鸡繁殖性能和蛋品质的影响
6
作者 丁威 徐云明 周燕芬 《中国饲料》 北大核心 2018年第20期13-16,共4页
文章旨在研究不同时间点饲喂种鸡对其繁殖性能和蛋品质的影响。试验选择健康、体重一致的雌性Cobb种鸡375只和雄性种鸡150只,随机分为3组,每组5个重复,每个重复35只(25只雌性和10只雄性)。各组分别在上午8点(处理1组,饲喂1次),8点和15点... 文章旨在研究不同时间点饲喂种鸡对其繁殖性能和蛋品质的影响。试验选择健康、体重一致的雌性Cobb种鸡375只和雄性种鸡150只,随机分为3组,每组5个重复,每个重复35只(25只雌性和10只雄性)。各组分别在上午8点(处理1组,饲喂1次),8点和15点(处理2组,饲喂2次)和15点(处理3组,饲喂1次)饲喂相同的日粮,试验共进行13周。结果显示:处理3组产蛋率在同一周显著低于其他各组(0.05);处理1组较其他两组显著提高鸡蛋比重(P <0.05);处理3组较处理1组显著提高了蛋黄和蛋壳的重量(P <0.05)。一天饲喂两次(处理2组)鸡蛋蛋壳大肠杆菌数量(36周)较其他各组和周龄最高(P <0.05)。处理1组较处理2组显著提高了受精蛋孵化率(P <0.05)。处理2组和处理3组较处理1组显著提高了胚胎死亡率(P <0.05)。结论 :上午8点饲喂一次可以降低胚胎死亡率,下午3点饲喂1次降低种鸡产蛋率,但可以提高鸡蛋的比重、蛋黄、蛋壳重量及蛋壳厚度。 展开更多
关键词 饲喂程序 种鸡 繁殖性能 蛋品质
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龙马水电站导流洞堵头设计 被引量：2
7
作者 陈贵斌 徐云明 易俊新 《云南水力发电》 2010年第1期35-37,共3页
介绍龙马水电站导流洞堵头结构设计的总体思路和所采取的工程技术措施。龙马导流洞堵头是工程枢纽中的一个重要挡水建筑物,其设计水头118.885m,校核水头为121.465m。由于导流洞断面较大,堵头承受水推力约2400余吨,堵头穿过大坝帷幕,防... 介绍龙马水电站导流洞堵头结构设计的总体思路和所采取的工程技术措施。龙马导流洞堵头是工程枢纽中的一个重要挡水建筑物,其设计水头118.885m,校核水头为121.465m。由于导流洞断面较大,堵头承受水推力约2400余吨,堵头穿过大坝帷幕,防渗要求较高,因此精心设计是成功封堵的关键。导流洞的顺利封堵和堵头建成后良好的挡水效果,为龙马电站的正常运行奠定了基础。 展开更多
关键词 龙马水电站 导流洞堵头 楔形体 防渗 安全可靠
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上海海仑宾馆工程施工中采用的几项新技术
8
作者 徐云明 刘溶 周晨 《建筑技术》 北大核心 1992年第2期67-72,共6页
上海海仑宾馆工程处于闹市,施工场地狭窄,地下管线密布,工期紧迫。为此,施工中采用了大直径超长钻孔灌注承重桩,稀齿形地下连续墙(加钢筋混凝土斜撑) 作基坑的支护结构,基础承台钢筋(Φ40) 采用冷压连接,8600m～3基础承台混凝土一次连... 上海海仑宾馆工程处于闹市,施工场地狭窄,地下管线密布,工期紧迫。为此,施工中采用了大直径超长钻孔灌注承重桩,稀齿形地下连续墙(加钢筋混凝土斜撑) 作基坑的支护结构,基础承台钢筋(Φ40) 采用冷压连接,8600m～3基础承台混凝土一次连续浇捣。并研制了适合大体积混凝土浇捣的新型外掺剂,在基础承台混凝土浇捣及养护过程中进行测温监控,合理选择模板体系,采用泵送商品混凝土,悬撑式外脚手架等新工艺,仅用14个月完成了主体结构施工。 展开更多
关键词 钻孔桩 地下连续墙 宾馆 施工
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上海海仑宾馆基础8600m^3混凝土一次连续浇捣的实践
9
作者 徐云明 马兴宝 +1 位作者 金祖芳 范庆国 《建筑施工》 1990年第3期22-24,共3页
一、工程概况与环境特点 1.基础工程概况 (1)海仑宾馆工程采用钻孔灌注桩承重,桩长71.64m,桩直径设计为850mm,总根数为296根,单桩设计承载能力为300t。 (2)该工程基础平面尺寸为56 x 51.5m,基础实际开挖深度分别为-8.15m、-8.80m、-9.60... 一、工程概况与环境特点 1.基础工程概况 (1)海仑宾馆工程采用钻孔灌注桩承重,桩长71.64m,桩直径设计为850mm,总根数为296根,单桩设计承载能力为300t。 (2)该工程基础平面尺寸为56 x 51.5m,基础实际开挖深度分别为-8.15m、-8.80m、-9.60m和-10.60m,基础承台厚度为2.80m(电梯井加深部分厚达5.25m.),混凝土工程总量为8600m～3。 2.本工程的环境特点 (1)地处闹市中心,施工场地几乎等于零; (2)交通繁忙,人流拥挤; (3)工地四周管线密布,纵横交错; (4)居民密集、危房成片; (5)工期特别紧。二、基础承台混凝土(8600m～3)浇捣方案的选择在基础承台混凝土浇捣方案的选择时。 展开更多
关键词 基础 承台 混凝土 浇注 捣实
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龙马水电站导流洞进口渐变段优化设计 被引量：1
10
作者 陈贵斌 李晓燕 徐云明 《云南水力发电》 2010年第1期15-19,56,共6页
龙马水电站导流洞渐变段由于施工条件限制,结合施工工期、工程结构安全等方面进行系统研究,调整渐变段结构体型,由原浅埋式优化为明洞。为工程的顺利建设和按期投产创造了条件,工程经济效益明显。2007年3月导流洞下闸封堵期间,在93m外... 龙马水电站导流洞渐变段由于施工条件限制,结合施工工期、工程结构安全等方面进行系统研究,调整渐变段结构体型,由原浅埋式优化为明洞。为工程的顺利建设和按期投产创造了条件,工程经济效益明显。2007年3月导流洞下闸封堵期间,在93m外水水头直接作用下,渐变段结构安全可靠,没有出现结构破坏和渗漏情况。 展开更多
关键词 龙马水电站 渐变段 外水作用 渗漏要求 经济效益
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