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稳定过表达NM-ⅡA Tail的IPEC-J2细胞系构建及其对PEDV感染的影响研究
1
作者
黄小久
雷磊
+7 位作者
彭小烨
王开心
陈英仪
王济贤
王玉格
段德勇
杨毅
王爱兵
《中国畜牧兽医》
北大核心
2025年第5期2243-2252,共10页
【目的】本研究利用慢病毒载体系统构建稳定过表达非肌性肌球蛋白ⅡA尾部(NM-ⅡA Tail)的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2),探讨其在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染细胞过程中的作用,为揭示PEDV的感染机制提供...
【目的】本研究利用慢病毒载体系统构建稳定过表达非肌性肌球蛋白ⅡA尾部(NM-ⅡA Tail)的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2),探讨其在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染细胞过程中的作用,为揭示PEDV的感染机制提供理论依据。【方法】采用同源重组技术构建过表达pLV-CMV-NM-ⅡA Tail-3×Flag-CopGFP-Puro的重组质粒。将重组质粒与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染HEK-293FT细胞,制备慢病毒液。采用慢病毒液侵染IPEC-J2细胞,经药物筛选后观察EGFP荧光标签蛋白的表达情况;利用Western blotting和实时荧光定量PCR技术鉴定过表达NM-ⅡA Tail的细胞株构建情况。结合Western blotting和免疫荧光试验(IFA)分析PEDV内化阶段的变化,通过测定病毒粒子的拷贝量和病毒滴度,分析过表达NM-ⅡA Tail对PEDV复制和释放阶段的影响。【结果】在成功构建的过表达细胞株中,NM-ⅡA Tail mRNA转录水平较对照组提高了15倍(P<0.01),且Western blotting验证结果显示,NM-ⅡA Tail蛋白存在高效表达。在PEDV内化阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞中PEDV N蛋白表达量极显著高于对照组(P<0.01)。IFA结果显示,过表达NM-ⅡA Tail细胞中NM-ⅡA和PEDV的荧光信号强于对照组。在PEDV复制阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞中PEDV M基因拷贝数及病毒半数组织感染剂量(TCID 50)显著或极显著高于对照组(P<0.05;P<0.01)。在PEDV释放阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞释放的PEDV M基因的拷贝数较对照组提高了2.7倍,上清中的病毒TCID 50极显著高于对照组(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了稳定过表达NM-ⅡA Tail的IPEC-J2细胞株,为深入研究NM-ⅡA在PEDV感染过程中的作用提供了试验材料。过表达NM-ⅡA Tail显著促进了PEDV的内化、复制和释放过程,为阐明PEDV的感染机制提供了新思路,并为疫病防控策略开发提供了参考依据。
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关键词
非肌性肌球蛋白ⅡA
猪流行性腹泻病毒(PEDV)
慢病毒载体
过表达细胞系
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职称材料
组蛋白去乙酰化酶参与畜禽病毒感染的作用及机制
被引量：
1
2
作者
谭磊
彭小烨
+3 位作者
王开心
黄小久
张帆
禹思宇
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第3期1259-1266,共8页
畜禽在养殖过程中易受病毒感染,给养殖业造成严重的经济损失,其中部分畜禽病毒(如乙脑病毒和口蹄疫病毒)属于人兽共患性病原,对养殖工作人员及消费者健康也可造成潜在威胁。因此,防控畜禽病毒不仅可减少养殖业经济损失,同时对保障公共...
畜禽在养殖过程中易受病毒感染,给养殖业造成严重的经济损失,其中部分畜禽病毒(如乙脑病毒和口蹄疫病毒)属于人兽共患性病原,对养殖工作人员及消费者健康也可造成潜在威胁。因此,防控畜禽病毒不仅可减少养殖业经济损失,同时对保障公共健康也十分重要。组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDACs)属于表观遗传修饰酶,可通过调控组蛋白乙酰化过程影响基因表达,继而参与多种生命活动过程。大量研究表明,HDACs可通过与病毒蛋白互作或影响细胞相关信号通路来参与多种畜禽病毒感染过程,且HDACs抑制剂处理可抑制部分病毒(如伪狂犬病病毒和马立克病毒)复制,提示HDACs可作为抗畜禽病毒感染的广谱抗病毒药物靶点。因此,深入了解HDACs参与畜禽病毒感染的过程对防控畜禽病毒感染具有重要意义。作者简要介绍了HDACs及其抑制剂,重点综述了HDACs参与畜禽病毒感染的作用及机制,为深入研究HDACs调控畜禽病毒感染提供参考,为开发新型抗病毒药物提供科学指导。
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关键词
组蛋白去乙酰化酶(HDACs)
抑制剂
畜禽病毒感染
作用及机制
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职称材料
阿克苏地区某猪场猪附红细胞体病的诊断和治疗
被引量：
3
3
作者
金紫薇
张家浩
+4 位作者
彭小烨
李健楠
李凯伦
李莲瑞
石长青
《中国动物保健》
2023年第4期8-9,66,共3页
新疆阿克苏地区某规模化猪场,养殖规模4 000头,2022年4月,不同日龄的猪皮肤出现发红、高热不退,精神不振,四肢弱软无力、颤抖,进食减弱甚至食欲废绝,粪便发稀呈灰黄色或水样腹泻,眼结膜出现苍白色,大部分病猪四肢、后背等部位皮肤发绀...
新疆阿克苏地区某规模化猪场,养殖规模4 000头,2022年4月,不同日龄的猪皮肤出现发红、高热不退,精神不振,四肢弱软无力、颤抖,进食减弱甚至食欲废绝,粪便发稀呈灰黄色或水样腹泻,眼结膜出现苍白色,大部分病猪四肢、后背等部位皮肤发绀。取病猪血样进行血压片和血涂片镜检,根据结果显示病猪感染附红细胞体,针对附红细胞体病用药治疗并给出了防治措施,在猪场得到了有效的反馈。
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关键词
附红细胞体
猪场
防治措施
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职称材料
题名
稳定过表达NM-ⅡA Tail的IPEC-J2细胞系构建及其对PEDV感染的影响研究
1
作者
黄小久
雷磊
彭小烨
王开心
陈英仪
王济贤
王玉格
段德勇
杨毅
王爱兵
机构
湖南农业大学动物医学院
出处
《中国畜牧兽医》
北大核心
2025年第5期2243-2252,共10页
基金
湖南省自然科学基金项目(2020JJ4041)。
文摘
【目的】本研究利用慢病毒载体系统构建稳定过表达非肌性肌球蛋白ⅡA尾部(NM-ⅡA Tail)的猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2),探讨其在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染细胞过程中的作用,为揭示PEDV的感染机制提供理论依据。【方法】采用同源重组技术构建过表达pLV-CMV-NM-ⅡA Tail-3×Flag-CopGFP-Puro的重组质粒。将重组质粒与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染HEK-293FT细胞,制备慢病毒液。采用慢病毒液侵染IPEC-J2细胞,经药物筛选后观察EGFP荧光标签蛋白的表达情况;利用Western blotting和实时荧光定量PCR技术鉴定过表达NM-ⅡA Tail的细胞株构建情况。结合Western blotting和免疫荧光试验(IFA)分析PEDV内化阶段的变化,通过测定病毒粒子的拷贝量和病毒滴度,分析过表达NM-ⅡA Tail对PEDV复制和释放阶段的影响。【结果】在成功构建的过表达细胞株中,NM-ⅡA Tail mRNA转录水平较对照组提高了15倍(P<0.01),且Western blotting验证结果显示,NM-ⅡA Tail蛋白存在高效表达。在PEDV内化阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞中PEDV N蛋白表达量极显著高于对照组(P<0.01)。IFA结果显示,过表达NM-ⅡA Tail细胞中NM-ⅡA和PEDV的荧光信号强于对照组。在PEDV复制阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞中PEDV M基因拷贝数及病毒半数组织感染剂量(TCID 50)显著或极显著高于对照组(P<0.05;P<0.01)。在PEDV释放阶段,过表达NM-ⅡA Tail细胞释放的PEDV M基因的拷贝数较对照组提高了2.7倍,上清中的病毒TCID 50极显著高于对照组(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了稳定过表达NM-ⅡA Tail的IPEC-J2细胞株,为深入研究NM-ⅡA在PEDV感染过程中的作用提供了试验材料。过表达NM-ⅡA Tail显著促进了PEDV的内化、复制和释放过程,为阐明PEDV的感染机制提供了新思路,并为疫病防控策略开发提供了参考依据。
关键词
非肌性肌球蛋白ⅡA
猪流行性腹泻病毒(PEDV)
慢病毒载体
过表达细胞系
Keywords
non-muscle myosinⅡA(NM-ⅡA)
Porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)
lentiviral vector
overexpressing cell line
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
组蛋白去乙酰化酶参与畜禽病毒感染的作用及机制
被引量：
1
2
作者
谭磊
彭小烨
王开心
黄小久
张帆
禹思宇
机构
长江大学动物科学技术学院
湖南农业大学动物医学院
长沙环境保护职业技术学院
长沙海关技术中心
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第3期1259-1266,共8页
基金
湖南省自然科学基金-科教联合项目(2021JJ60091)。
文摘
畜禽在养殖过程中易受病毒感染,给养殖业造成严重的经济损失,其中部分畜禽病毒(如乙脑病毒和口蹄疫病毒)属于人兽共患性病原,对养殖工作人员及消费者健康也可造成潜在威胁。因此,防控畜禽病毒不仅可减少养殖业经济损失,同时对保障公共健康也十分重要。组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDACs)属于表观遗传修饰酶,可通过调控组蛋白乙酰化过程影响基因表达,继而参与多种生命活动过程。大量研究表明,HDACs可通过与病毒蛋白互作或影响细胞相关信号通路来参与多种畜禽病毒感染过程,且HDACs抑制剂处理可抑制部分病毒(如伪狂犬病病毒和马立克病毒)复制,提示HDACs可作为抗畜禽病毒感染的广谱抗病毒药物靶点。因此,深入了解HDACs参与畜禽病毒感染的过程对防控畜禽病毒感染具有重要意义。作者简要介绍了HDACs及其抑制剂,重点综述了HDACs参与畜禽病毒感染的作用及机制,为深入研究HDACs调控畜禽病毒感染提供参考,为开发新型抗病毒药物提供科学指导。
关键词
组蛋白去乙酰化酶(HDACs)
抑制剂
畜禽病毒感染
作用及机制
Keywords
histone deacetylases(HDACs)
inhibitors
livestock and poultry virus infection
role and mechanism
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
阿克苏地区某猪场猪附红细胞体病的诊断和治疗
被引量：
3
3
作者
金紫薇
张家浩
彭小烨
李健楠
李凯伦
李莲瑞
石长青
机构
塔里木大学动物科学学院
新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室
新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室
出处
《中国动物保健》
2023年第4期8-9,66,共3页
基金
阿拉尔规模化猪场疫病防控预警系统的构建及推广示范(项目编号:2018CB037)
国家级大创项目(项目编号:202010757009)。
文摘
新疆阿克苏地区某规模化猪场,养殖规模4 000头,2022年4月,不同日龄的猪皮肤出现发红、高热不退,精神不振,四肢弱软无力、颤抖,进食减弱甚至食欲废绝,粪便发稀呈灰黄色或水样腹泻,眼结膜出现苍白色,大部分病猪四肢、后背等部位皮肤发绀。取病猪血样进行血压片和血涂片镜检,根据结果显示病猪感染附红细胞体,针对附红细胞体病用药治疗并给出了防治措施,在猪场得到了有效的反馈。
关键词
附红细胞体
猪场
防治措施
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
稳定过表达NM-ⅡA Tail的IPEC-J2细胞系构建及其对PEDV感染的影响研究
黄小久
雷磊
彭小烨
王开心
陈英仪
王济贤
王玉格
段德勇
杨毅
王爱兵
《中国畜牧兽医》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
组蛋白去乙酰化酶参与畜禽病毒感染的作用及机制
谭磊
彭小烨
王开心
黄小久
张帆
禹思宇
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
阿克苏地区某猪场猪附红细胞体病的诊断和治疗
金紫薇
张家浩
彭小烨
李健楠
李凯伦
李莲瑞
石长青
《中国动物保健》
2023
3
在线阅读
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职称材料
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