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siRNA沉默旋毛虫GAD基因对小鼠免疫反应影响的研究: 1; 作者张博涵阮入琳 +3 位作者张鉴慧刘跃辉王浩迪宋铭忻《中国预防兽医学报》北大核心 2025年第6期623-631,共9页; 为探究旋毛虫肌幼虫谷氨酸脱羧酶(GAD)在肌幼虫侵入肠道中发挥的作用,本研究分别将设计与合成的siRNA-GAD、siRNA-Control转染旋毛虫肌幼虫(siRNA-GAD组、siRNA-Control组、后者为阳性对照组NC)并设未转染siRNA的阳性对照组(PC组),于转... 展开更多; 关键词旋毛虫谷氨酸脱羧酶 RNA干扰免疫反应; 在线阅读下载PDF 职称材料

旋毛虫鸟氨酸脱羧酶对旋毛虫抗酸能力调控的研究被引量：3: 2; 作者侯嘉茗杨啸 +7 位作者王雪莹薄禄琪王爽张博涵张鉴慧阮入琳宋铭忻白志坤《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期302-309,共8页; 为探究旋毛虫体内是否存在鸟氨酸依赖性抗酸系统(AR5)及旋毛虫鸟氨酸脱羧酶(TsODC)对旋毛虫抗酸能力的调控作用,本实验分别采用p H1.5、p H2.5、p H4.5、p H6.6的培养液以及PBS(pH7.4)作为对照组分别培养0.5 h、1 h和2 h后,通过统计旋... 展开更多; 关键词旋毛虫旋毛虫鸟氨酸脱羧酶抗酸性精氨酸姜黄素雷帕霉素; 在线阅读下载PDF 职称材料

siRNA-757干扰旋毛虫Ts-ODC基因对其抗酸能力的影响: 3; 作者薄禄琪王雪莹 +7 位作者侯嘉茗张力张鉴慧阮入琳张博涵王爽宋铭忻张子群《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2114-2125,共12页; 旨在探究旋毛虫肌幼虫体内是否存在鸟氨酸依赖型抗酸系统,本研究根据GenBank中Ts-ODC全序列基因组设计三条特异性siRNA分子,采用脂质体浸染转染的方法将其分别转染至旋毛虫肌幼虫体内,使用qPCR、Western blot和间接免疫荧光试验,筛选最... 展开更多; 关键词旋毛虫鸟氨酸脱羧酶 RNA干扰抗酸系统; 在线阅读下载PDF 职称材料

旋毛虫海藻糖酶(TsTRE)蛋白的表达及其间接ELISA抗体检测方法的建立: 4; 作者侯嘉茗张博涵 +5 位作者阮入琳张鉴慧刘坤陈颢元宋铭忻张子群《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2023年第12期1174-1180,共7页; 目的以原核表达的旋毛虫海藻糖酶(Trichinella spiralis trehalase, TsTRE)重组蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA抗体检测方法。方法本实验采用RT-PCR技术扩增TsTRE基因,将其与pCold I表达质粒连接并于E.coli BL21感受态细胞中表达。... 展开更多; 关键词旋毛虫海藻糖酶原核表达间接ELISA方法; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名siRNA沉默旋毛虫GAD基因对小鼠免疫反应影响的研究: 1; 作者张博涵阮入琳张鉴慧刘跃辉王浩迪宋铭忻; 机构东北农业大学动物源性人兽共患病黑龙江省重点实验室; 出处《中国预防兽医学报》北大核心 2025年第6期623-631,共9页; 基金国家自然科学基金(32172883) 国家寄生虫资源库(NPRC-2019-194-30)。; 文摘为探究旋毛虫肌幼虫谷氨酸脱羧酶(GAD)在肌幼虫侵入肠道中发挥的作用,本研究分别将设计与合成的siRNA-GAD、siRNA-Control转染旋毛虫肌幼虫(siRNA-GAD组、siRNA-Control组、后者为阳性对照组NC)并设未转染siRNA的阳性对照组(PC组),于转染后12 h分别采用荧光定量PCR(qPCR)和western blot检测各组旋毛虫肌幼虫GAD基因的转录及其蛋白表达水平。结果显示,siRNA-GAD组相对PC组肌幼虫GAD基因的转录水平和蛋白表达水平分别降低63.7%(P<0.001)和62%(P<0.0001),表明siRNA-GAD能够干扰旋毛虫肌幼虫GAD基因的转录及表达。将上述各组旋毛虫肌幼虫分别感染BALB/c小鼠,并设未感染的小鼠为阴性对照,感染10 d时对小鼠采样,采用ELISA检测小鼠血清中促炎细胞因子TNF-α、IFN-γ和抗炎细胞因子IL-4、IL-10的分泌水平;通过流式细胞术检测小鼠脾脏CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值;制备各组小鼠小肠组织病理切片观察其病理变化;采用qPCR检测小鼠小肠调节性T细胞(Treg细胞)活化标志物GARP、CD62L、OX40和趋化因子受体CXCR3、CCR4、CCR5、CCR10 mRNA的相对转录水平;采用免疫组化法检测各组小鼠小肠Foxp3的表达情况。结果显示,与阴性对照组相比,旋毛虫感染引起宿主血清细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10的分泌水平均显著上升(P<0.05),相比PC组siRNA-GAD组小鼠血清中IL-4和IL-10的分泌水平分别下降7.249%和8.460%(P<0.05);siRNA-GAD组小鼠脾脏中CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值升高34.72%,差异显著(P<0.05);组织病理切片观察可见,PC组小鼠小肠上皮受损,局部炎性浸润,siRNA-GAD组小鼠肠绒毛水肿严重;相较PC组,siRNA-GAD组小鼠小肠Treg细胞活化标志物GARP和OX45的转录水平分别降低37.30%和13.06%(P<0.05);Treg细胞趋化因子受体CXCR3和CCR4的转录水平分别降低77.26%和61.06%(P<0.05);免疫组化结果显示,与阴性对照组相比,旋毛虫感染后小鼠小肠Treg细胞中的黄色颗粒增多,而siRNA-GAD组小鼠小肠Treg细胞中的黄色颗粒沉着相对较少,表明干扰GAD基因能够降低旋毛虫成虫期诱导Treg细胞标志蛋白Foxp3的表达。上述结果表明,干扰旋毛虫GAD基因能够降低小鼠小肠Treg细胞的活化水平,抑制宿主Th2型免疫反应,提高宿主非特异性免疫反应水平,也表明GAD参与旋毛虫诱导的宿主免疫反应,本研究为探究旋毛虫的致病机制及旋毛虫病的防治提供新思路。; 关键词旋毛虫谷氨酸脱羧酶 RNA干扰免疫反应; Keywords Trichinella spiralis glutamic acid decarboxylase RNA interference immune response; 分类号 R383.1 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名旋毛虫鸟氨酸脱羧酶对旋毛虫抗酸能力调控的研究被引量：3: 2; 作者侯嘉茗杨啸王雪莹薄禄琪王爽张博涵张鉴慧阮入琳宋铭忻白志坤; 机构东北农业大学动物源性人兽共患病黑龙江省重点实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期302-309,共8页; 基金家畜疫病病原生物学国家重点实验室(中国农业科学院兰州兽医研究所)开放基金课题(SKLVEB202IKFKT004) 国家自然科学基金(32172883) 国家寄生虫资源库(NPRC-2019-194-30)。; 文摘为探究旋毛虫体内是否存在鸟氨酸依赖性抗酸系统(AR5)及旋毛虫鸟氨酸脱羧酶(TsODC)对旋毛虫抗酸能力的调控作用,本实验分别采用p H1.5、p H2.5、p H4.5、p H6.6的培养液以及PBS(pH7.4)作为对照组分别培养0.5 h、1 h和2 h后,通过统计旋毛虫肌幼虫的存活率、采用荧光定量PCR(qPCR)和western blot,分别筛选旋毛虫肌幼虫体外最适酸处理条件。结果显示,在酸度为p H2.5培养2 h时,肌幼虫的存活率为51%(此时死亡数与存活数基本相等)及Ts ODC基因的转录和表达水平最高。因此,p H2.5培养2 h为旋毛虫肌幼虫体外最佳酸处理条件。于培养液中分别添加不同浓度的精氨酸、Ts ODC多抗血清、姜黄素和雷帕霉素,以PBS作为对照组分别培养12 h、24 h和48 h后,采用上述最佳酸处理条件处理后,通过计算肌幼虫存活率,采用q PCR检测Ts ODC基因的转录水平并初步筛选不同制剂的最佳培养浓度及时间,并在各最佳浓度和时间培养后,再经最佳酸处理条件处理,采用western blot检测Ts ODC蛋白的表达,分析各制剂对旋毛虫抗酸能力的调控作用;从旋毛虫感染42 d的小鼠中收集肌幼虫并采集小鼠的膈肌,分别制备冰冻切片,采用间接免疫荧光试验(IFA)检测Ts ODC蛋白在肌幼虫中的分布。存活率结果显示,与PBS对照组相比,当添加浓度为10μg/mL的精氨酸培养24 h时,肌幼虫存活率提高27%,Ts ODC基因转录水平和蛋白表达水平分别提高83.3%和68%(P<0.01);当添加浓度为1 mg/mL的Ts ODC多抗血清、20μmol/L的姜黄素和2μmol/L的雷帕霉素均培养48 h时,肌幼虫存活率分别下降13%、18%和26%,Ts ODC基因转录水平分别降低24.1%、27.1%和37.7%(P<0.01)及其蛋白表达水平分别降低11.6%、25.8%(P<0.05)和47.8%(P<0.01)。IFA结果显示,绿色荧光信号主要出现在肌幼虫的表皮层、头部的唇乳突及尾部的生殖原基。上述结果表明,精氨酸可以通过上调Ts ODC基因的转录和表达水平提高旋毛虫的抗酸能力,而Ts ODC多抗血清、姜黄素和雷帕霉素则通过降低Ts ODC基因的转录和表达水平消弱旋毛虫的抗酸能力;Ts ODC可能是分泌蛋白且与旋毛虫的生长发育和繁殖有关。综上所述,本研究首次证实在旋毛虫肌幼虫中存在AR5,且其中的Ts ODC能够正调控旋毛虫的抗酸作用,为深入研究旋毛虫抗酸机制提供参考依据。; 关键词旋毛虫旋毛虫鸟氨酸脱羧酶抗酸性精氨酸姜黄素雷帕霉素; Keywords Trichinella spiralis TsODC acidoresistance arginine curcumin rapamycin; 分类号 S855.9 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名siRNA-757干扰旋毛虫Ts-ODC基因对其抗酸能力的影响: 3; 作者薄禄琪王雪莹侯嘉茗张力张鉴慧阮入琳张博涵王爽宋铭忻张子群; 机构东北农业大学动物源性人兽共患病黑龙江省重点实验室哈尔滨海关技术中心; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2114-2125,共12页; 基金国家自然科学基金(32172883) 家畜疫病病原生物学国家重点实验室(中国农业科学院兰州兽医研究所)开放课题(SKLVEB2021KFKT004) 国家寄生虫资源库(NPRC-2019-194-30)。; 文摘旨在探究旋毛虫肌幼虫体内是否存在鸟氨酸依赖型抗酸系统,本研究根据GenBank中Ts-ODC全序列基因组设计三条特异性siRNA分子,采用脂质体浸染转染的方法将其分别转染至旋毛虫肌幼虫体内,使用qPCR、Western blot和间接免疫荧光试验,筛选最佳干扰siRNA分子及最佳干扰条件;并在pH 1.5、2.5、4.5和6.6的条件下将肌幼虫分别培养0.5、1和2 h,从肌幼虫Ts-ODC基因转录水平、酶活性及存活率等方面分析Ts-ODC基因干扰对旋毛虫肌幼虫抗酸能力的影响;将Ts-ODC基因被干扰的旋毛虫肌幼虫感染小鼠,在7和42 d时分别收集成虫和肌幼虫,分别计算其减虫率;将子一代肌幼虫在pH 2.5的酸性条件下培养2 h,计算其存活率,对Ts-ODC基因干扰的遗传性进行分析。结果显示,Ts-ODC siRNA-757为最佳干扰分子,转染12 h、浓度为2μmol·L^(-1)培养3 d时为最佳干扰条件;各组pH 2.5培养2 h时Ts-ODC基因转录水平最高,pH 1.5培养2 h时虫体的存活率明显低于其他培养条件(P<0.01),pH 4.5培养0.5 h时虫体体内酶活性最高;转染Ts-ODC siRNA-757的肌幼虫接种小鼠后,7 d时成虫和42 d时肌幼虫的减虫率分别为58.95%和65.91%;其子一代肌幼虫在pH 2.5的培养液内培养2 h时其存活率为49%。综上表明,旋毛虫肌幼虫体内具有鸟氨酸依赖型抗酸系统,本研究首次通过siRNA技术干扰旋毛虫肌幼虫Ts-ODC基因,且证实干扰Ts-ODC基因可降低肌幼虫抗酸能力,为后期旋毛虫病的防治提供新思路。; 关键词旋毛虫鸟氨酸脱羧酶 RNA干扰抗酸系统; Keywords Trichinella spiralis ornithine decarboxylase RNA interference anti-acid system; 分类号 S852.731 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名旋毛虫海藻糖酶(TsTRE)蛋白的表达及其间接ELISA抗体检测方法的建立: 4; 作者侯嘉茗张博涵阮入琳张鉴慧刘坤陈颢元宋铭忻张子群; 机构东北农业大学哈尔滨海关技术中心; 出处《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2023年第12期1174-1180,共7页; 基金国家寄生虫资源库(No.NPRC-2019-194-30)~~。; 文摘目的以原核表达的旋毛虫海藻糖酶(Trichinella spiralis trehalase, TsTRE)重组蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA抗体检测方法。方法本实验采用RT-PCR技术扩增TsTRE基因,将其与pCold I表达质粒连接并于E.coli BL21感受态细胞中表达。应用亲和柱层析技术获得纯化rTsTRE,分别利用间接免疫荧光技术和Western-blot技术定位TsTRE和检测rTsTRE的免疫反应原性。与此同时,以rTsTRE蛋白为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法,并对其抗原包被浓度和待测血清稀释度、抗原包被条件、封闭液种类和封闭条件、酶标二抗稀释度和孵育条件、TMB显色时间等进行优化。确定该方法的临界值及评估该方法的重复性、敏感性、特异性和临床检出率等性能。结果免疫荧光结果显示,在肌幼虫的杆状体、尾部和表皮等部位含有大量的海藻糖酶;Western-blot结果显示,rTsTRE可结合感染旋毛虫42 d小鼠的阳性血清且蛋白分子量约为60 kDa。建立的间接ELISA抗体检测方法的阳性临界值为0.384;批内和批间变异系数分别在5.504%~7.630%和4.664%~9.929%,且均不超过10%;最低检出效价为1∶1 280;与华支睾吸虫、血吸虫、猪蛔虫、猪弓形虫和弓首蛔虫抗体均无交叉反应,特异性较强;临床阴性检出率为0%。结论本实验成功表达rTsTRE,以该蛋白为包被抗原建立的间接ELISA检测方法具有良好的重复性、敏感性、特异性和临床检测性,可应用于临床样本的检测。; 关键词旋毛虫海藻糖酶原核表达间接ELISA方法; Keywords Trichinella spiralis trehalase prokaryotic expression the indirect ELISA method; 分类号 R383.1 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	siRNA沉默旋毛虫GAD基因对小鼠免疫反应影响的研究	张博涵阮入琳张鉴慧刘跃辉王浩迪宋铭忻	《中国预防兽医学报》北大核心	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	旋毛虫鸟氨酸脱羧酶对旋毛虫抗酸能力调控的研究	侯嘉茗杨啸王雪莹薄禄琪王爽张博涵张鉴慧阮入琳宋铭忻白志坤	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2023	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	siRNA-757干扰旋毛虫Ts-ODC基因对其抗酸能力的影响	薄禄琪王雪莹侯嘉茗张力张鉴慧阮入琳张博涵王爽宋铭忻张子群	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2023	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	旋毛虫海藻糖酶(TsTRE)蛋白的表达及其间接ELISA抗体检测方法的建立	侯嘉茗张博涵阮入琳张鉴慧刘坤陈颢元宋铭忻张子群	《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心	2023	0	在线阅读下载PDF 职称材料