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TRIM44沉默对肝癌细胞增殖的影响及分子机制研究 被引量:5
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作者 张蕴蕴 田艺 +2 位作者 周伟 孙卯 吴永忠 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1972-1978,共7页
目的:研究三结构域蛋白44(tripartite motif-containing protein 44,TRIM44)对肝癌细胞增殖的影响并探讨其分子机制。方法:RT-q PCR和Western blot法分别检测TRIM44在正常肝组织、肝癌组织和癌旁组织,以及永生化肝细胞和肝癌细胞系中的m... 目的:研究三结构域蛋白44(tripartite motif-containing protein 44,TRIM44)对肝癌细胞增殖的影响并探讨其分子机制。方法:RT-q PCR和Western blot法分别检测TRIM44在正常肝组织、肝癌组织和癌旁组织,以及永生化肝细胞和肝癌细胞系中的mRNA和蛋白表达水平;在肝癌细胞中转染靶向沉默TRIM44的shRNA,Western blot实验检测对TRIM44的沉默效果;MTS实验分析TRIM44沉默对肝癌细胞活力的影响,Ed U标记实验检测TRIM44沉默对肝癌细胞DNA合成能力的影响;软琼脂集落形成实验检测TRIM44沉默对肝癌细胞锚定非依赖生长能力的影响;Western blot法检测TRIM44沉默对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)总蛋白及磷酸化水平的影响;用m TOR激活剂MHY1485处理TRIM44沉默的肝癌细胞,并通过MTS实验分析肝癌细胞的活力。结果:TRIM44的mRNA和蛋白水平在肝癌组织中高于癌旁组织和正常肝组织,TRIM44的mRNA和蛋白水平在肝癌细胞系中高于永生化肝细胞;TRIM44沉默可抑制肝癌细胞的活力、DNA合成能力及锚定非依赖生长能力;TRIM44沉默可降低m TOR磷酸化水平,MHY1485拮抗TRIM44沉默对肝癌细胞活力的抑制作用。结论:TRIM44沉默可能通过下调m TOR活性抑制肝癌细胞增殖。 展开更多
关键词 三结构域蛋白44 肝细胞癌 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
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Clusterin基因沉默对脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响
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作者 张蕴蕴 周伟 +2 位作者 孙卯 黄锣 陈晓品 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期173-177,共5页
目的:研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术沉默簇集蛋白(clusterin,CLU)基因表达对人脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响。方法:设计和合成靶向CLU的短发夹RNA(short hairprin RNA,shRNA)序列(CLU shRNA1,CLU shRNA2),并构建到慢病毒的载体pl... 目的:研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术沉默簇集蛋白(clusterin,CLU)基因表达对人脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响。方法:设计和合成靶向CLU的短发夹RNA(short hairprin RNA,shRNA)序列(CLU shRNA1,CLU shRNA2),并构建到慢病毒的载体plentilox 3.7,以不针对任何基因的shRNA序列作为对照(对照shRNA)。包被能成功表达各种shRNA载体的慢病毒。将慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞,Real-time PCR法和Western blot法测定CLU mRNA表达和蛋白质表达水平,证实干扰效果。给予不同放射剂量(2、4、6 Gy)处理后,通过四甲基偶氮唑盐(thiazolyl blue tetrazolium bxomide,MTT)法及流式细胞仪Annexin V/PI法检测脑胶质瘤U87细胞的存活率及凋亡率。Western blot方法筛选多个凋亡相关信号分子的改变。结果:靶向CLU基因的shRNA特异性地抑制了CLU mRNA和蛋白质的表达。MTT实验结果显示实验干扰组细胞在不同放射剂量下的脑胶质瘤实验U87细胞的存活率与对照组比较明显下降,差异具有统计学意义(4 Gy时,对照shRNA vs.CLU shRNA1:P=0.000,对照shRNA vs.CLU shRNA2:P=0.003;6 Gy时,对照shRNA vs.CLU shRNA1:P=0.000,对照shRNA vs.CLU shRNA2:P=0.000)。流式细胞仪Annexin V/PI法检测结果表明:4 Gy放疗后2个实验组细胞凋亡率均明显增加,最高达(35.54±0.95)%,较对照组高2倍多,差异具有明显统计学意义(对照shRNA vs.CLU shRNA1:P=0.000;对照shRNA vs.CLU shRNA2:P=0.000)。Western blot法发现CLU沉默可以显著上调促凋亡分子Bax蛋白水平。结论:CLU基因沉默可能通过调控Bax蛋白的表达,明显增强脑胶质瘤U87细胞对放射的敏感性,有望成为增加脑胶质瘤放射敏感性的新靶点。 展开更多
关键词 簇集蛋白 脑胶质瘤 放射敏感性 RNA干扰
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预混门冬胰岛素30和预混人胰岛素30R治疗2型糖尿病的对比研究 被引量:7
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作者 南映瑜 龙波 +3 位作者 钟艺华 张蕴蕴 黄恬 唐显军 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期379-381,共3页
目的:探讨每日2次注射预混门冬胰岛素30(诺和锐30)和预混人胰岛素30R(诺和灵30R)治疗2型糖尿病患者的疗效和安全性。方法:68例经口服降糖药物控制不佳的2型糖尿病患者被随机分为诺和锐30治疗组和诺和灵30R治疗组,分别采用每日早,晚餐前... 目的:探讨每日2次注射预混门冬胰岛素30(诺和锐30)和预混人胰岛素30R(诺和灵30R)治疗2型糖尿病患者的疗效和安全性。方法:68例经口服降糖药物控制不佳的2型糖尿病患者被随机分为诺和锐30治疗组和诺和灵30R治疗组,分别采用每日早,晚餐前注射诺和锐30和诺和灵30R,进行为期12周的观察。比较两组患者糖化血红蛋白(HbA1c),7个时点血糖,低血糖发生频率等。结果:诺和锐30治疗组的早,晚餐后血糖明显低于诺和灵30R治疗组(P<0.01);诺和锐30治疗组低血糖发生次数低于诺和灵30R治疗组,但差异无统计学意义(P>0.05),诺和锐30治疗组无严重低血糖发生。结论:对于2型糖尿病患者,每天2次注射诺和锐30较诺和灵30R能更明显地降低餐后血糖及减少低血糖风险,同时更易于为患者接受。 展开更多
关键词 门冬胰岛素 预混胰岛素 2型糖尿病
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红景天苷调节Nrf2/ROS通路增强U-251MG的放射敏感性 被引量:5
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作者 张蕴蕴 周宪 吴永忠 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1463-1468,共6页
目的:探究红景天苷(SD)对人星形胶质瘤细胞U-251MG放疗敏感性的影响及相关的分子机制。方法:将U-251MG细胞随机分成4组:对照组、红景天苷单独处理组(SD)、放疗组和放射+SD组。SD组和放射+SD组加50 nmol/L红景天苷处理,放疗组和放射+SD... 目的:探究红景天苷(SD)对人星形胶质瘤细胞U-251MG放疗敏感性的影响及相关的分子机制。方法:将U-251MG细胞随机分成4组:对照组、红景天苷单独处理组(SD)、放疗组和放射+SD组。SD组和放射+SD组加50 nmol/L红景天苷处理,放疗组和放射+SD组给予10 Gy、6 MV X射线照射。细胞增殖试剂盒(CCK8)检测0、1、2、3、4 d细胞增殖。流式细胞术检测细胞凋亡情况。蛋白质印迹检测B淋巴细胞瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)和还原型辅酶/醌氧化还原酶(NQO-1)的表达。氧化应激相关试剂盒检测活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx)的活性。脑立体定向注射U-251MG建立原位移植瘤裸鼠模型,接种1周后,将20只雄性裸鼠随机分成4组,每组5只。SD组和放射+SD组裸鼠腹腔注射50 nmol/kg的红景天苷,放疗组和放射+SD组裸鼠给予X射线照射。28 d后检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67和PCNA的表达。结果:与对照组相比,SD组和放疗组细胞增殖速率显著降低;凋亡细胞数目明显增加;Bcl-2表达显著下调,Bax的表达显著上调;ROS和MDA的含量显著升高,SOD和Gpx的活性显著降低;Nrf2和NQO-1的表达变化无显著差异,HO-1的表达显著下调;SD组和放疗组体内实验中肿瘤重量显著降低,Ki67和PCNA的表达显著下调。放射+SD组与SD组和放疗组相比,细胞增殖速率显著降低;凋亡细胞数目明显增加;Bcl-2表达显著下调,Bax的表达显著上调;ROS和MDA的含量显著上升,SOD和Gpx的活性显著降低;Nrf2、HO-1和NQO-1的表达显著下调;放射+SD组体内实验中肿瘤重量显著降低,Ki67和PCNA的表达显著下调。结论:红景天苷可能通过调节Nrf2/ROS通路,增强人星形胶质瘤U-251MG的放射敏感性。 展开更多
关键词 红景天苷 细胞增殖 细胞凋亡 放疗敏感性 氧化应激 人胶质瘤细胞
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