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红灰链霉菌硫氧还蛋白还原酶的异源表达及其酶学性质分析
1
作者
李吉玲
刘睿
+4 位作者
张雨欣
张莉刚
陆君铭
申乃坤
张红岩
《广西科学》
北大核心
2025年第3期517-525,共9页
为充分利用废弃羽毛中的角蛋白资源,本研究利用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增得到红灰链霉菌(Streptomyces rubrogriseus)硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase,TrxR)基因trxB,通过构建重组质粒并将其转化到大...
为充分利用废弃羽毛中的角蛋白资源,本研究利用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增得到红灰链霉菌(Streptomyces rubrogriseus)硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase,TrxR)基因trxB,通过构建重组质粒并将其转化到大肠杆菌[Escherichia coli BL21(DE3)]中进行表达,得到的TrxR经镍离子亲和层析纯化后测定酶学性质。结果表明:经PCR扩增得到大小为969 bp的trxB,并成功构建重组质粒pET22b-trxB。在最优诱导表达条件[异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度为0.5 mmol/L,光密度(OD_(600))为0.8,诱导温度为30℃,诱导时间为4 h]下,纯化后的TrxR大小为38.5 kDa。以羽毛粉为底物进行酶促反应时,TrxR的最适pH值为8.0,最适温度为60℃;K^(+)、Mg^(2+)对TrxR酶活力有明显的激活作用,而Fe^(2+)、Fe^(3+)、Cu^(2+)对其有明显的抑制作用;异丙醇、苯甲基磺酰氟(PMSF)、二甲基亚砜(DMSO)均对TrxR酶活力有抑制作用,而二硫苏糖醇(DTT)对TrxR酶活力有促进作用;TrxR酶促反应的米氏常数(K_(m))为64.04 mg/mL,最大反应速率(V_(max))为3.70 U/min。TrxR具有较高的酶活力和回收率,在降解羽毛角蛋白方面有一定的应用价值。
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关键词
二硫键还原酶
红灰链霉菌
异源表达
表达优化
酶学性质
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题名
红灰链霉菌硫氧还蛋白还原酶的异源表达及其酶学性质分析
1
作者
李吉玲
刘睿
张雨欣
张莉刚
陆君铭
申乃坤
张红岩
机构
广西民族大学海洋与生物技术学院
出处
《广西科学》
北大核心
2025年第3期517-525,共9页
基金
国家自然科学基金项目(31660022)
广西科技重点研发计划项目(桂科AB21196019,桂科AB21220020)
大学生创新创业训练计划项目(S202210608156,S202210608164)资助。
文摘
为充分利用废弃羽毛中的角蛋白资源,本研究利用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增得到红灰链霉菌(Streptomyces rubrogriseus)硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase,TrxR)基因trxB,通过构建重组质粒并将其转化到大肠杆菌[Escherichia coli BL21(DE3)]中进行表达,得到的TrxR经镍离子亲和层析纯化后测定酶学性质。结果表明:经PCR扩增得到大小为969 bp的trxB,并成功构建重组质粒pET22b-trxB。在最优诱导表达条件[异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度为0.5 mmol/L,光密度(OD_(600))为0.8,诱导温度为30℃,诱导时间为4 h]下,纯化后的TrxR大小为38.5 kDa。以羽毛粉为底物进行酶促反应时,TrxR的最适pH值为8.0,最适温度为60℃;K^(+)、Mg^(2+)对TrxR酶活力有明显的激活作用,而Fe^(2+)、Fe^(3+)、Cu^(2+)对其有明显的抑制作用;异丙醇、苯甲基磺酰氟(PMSF)、二甲基亚砜(DMSO)均对TrxR酶活力有抑制作用,而二硫苏糖醇(DTT)对TrxR酶活力有促进作用;TrxR酶促反应的米氏常数(K_(m))为64.04 mg/mL,最大反应速率(V_(max))为3.70 U/min。TrxR具有较高的酶活力和回收率,在降解羽毛角蛋白方面有一定的应用价值。
关键词
二硫键还原酶
红灰链霉菌
异源表达
表达优化
酶学性质
Keywords
disulfide bond reductase
Streptomyces rubrogriseus
heterologous expression
expression optimization
enzymatic properties
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q55 [生物学—生物化学]
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题名
作者
出处
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1
红灰链霉菌硫氧还蛋白还原酶的异源表达及其酶学性质分析
李吉玲
刘睿
张雨欣
张莉刚
陆君铭
申乃坤
张红岩
《广西科学》
北大核心
2025
0
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