两歧双歧杆菌作为重要益生菌,其工业化培养过程中存在氮源利用率低、生长密度低等问题。前期研究发现,两歧双歧杆菌可利用含脯氨酸的肽。该研究旨在根据两歧双歧杆菌的氮源利用特征靶向制备脯氨酸肽,以提升氮源利用效率和生长水平。研...两歧双歧杆菌作为重要益生菌,其工业化培养过程中存在氮源利用率低、生长密度低等问题。前期研究发现,两歧双歧杆菌可利用含脯氨酸的肽。该研究旨在根据两歧双歧杆菌的氮源利用特征靶向制备脯氨酸肽,以提升氮源利用效率和生长水平。研究优选5种富脯氨酸蛋白和5种蛋白酶制备短肽,结合菌株培养从中筛选出了2种高含脯氨酸且对生长有益的底物蛋白(酪蛋白、谷蛋白)。结合菌株氮源利用特性与肽酶特征制定多步酶解策略,利用计算机工具预测了酶解肽,并使用分子对接模拟肽段与肽转运的关键蛋白寡肽结合蛋白OppA(oligopeptide binding protein A,OppA)的结合,发现77.5%以上的肽都能与OppA有效结合。经酶解制备得到了6种脯氨酸肽,分子质量为180~2000 Da的肽占到72.49%以上(180~500 Da的短肽>50%),且脯氨酸大多以肽的形式存在(极少量游离)。将制备的脯氨酸肽与1种乳清蛋白肽都用作培养,发现乳清蛋白肽WA(whey protein peptides hydrolyzed by alkaline protease,WA)与酪蛋白肽CAF(casein peptides hydrolyzed by alkaline protease and flavourzyme,CAF)按质量比2∶1复配,添加量8 g/L时活菌数达到(2.04±0.1)×10^(9)CFU/mL,单位氮源产生(1.38±0.18)×10^(12)CFU的活菌,相较于传统MRS培养基分别提升35%和198.5%。该研究为两歧双歧杆菌的高效培养及工业化应用提供了创新策略。展开更多
文摘两歧双歧杆菌作为重要益生菌,其工业化培养过程中存在氮源利用率低、生长密度低等问题。前期研究发现,两歧双歧杆菌可利用含脯氨酸的肽。该研究旨在根据两歧双歧杆菌的氮源利用特征靶向制备脯氨酸肽,以提升氮源利用效率和生长水平。研究优选5种富脯氨酸蛋白和5种蛋白酶制备短肽,结合菌株培养从中筛选出了2种高含脯氨酸且对生长有益的底物蛋白(酪蛋白、谷蛋白)。结合菌株氮源利用特性与肽酶特征制定多步酶解策略,利用计算机工具预测了酶解肽,并使用分子对接模拟肽段与肽转运的关键蛋白寡肽结合蛋白OppA(oligopeptide binding protein A,OppA)的结合,发现77.5%以上的肽都能与OppA有效结合。经酶解制备得到了6种脯氨酸肽,分子质量为180~2000 Da的肽占到72.49%以上(180~500 Da的短肽>50%),且脯氨酸大多以肽的形式存在(极少量游离)。将制备的脯氨酸肽与1种乳清蛋白肽都用作培养,发现乳清蛋白肽WA(whey protein peptides hydrolyzed by alkaline protease,WA)与酪蛋白肽CAF(casein peptides hydrolyzed by alkaline protease and flavourzyme,CAF)按质量比2∶1复配,添加量8 g/L时活菌数达到(2.04±0.1)×10^(9)CFU/mL,单位氮源产生(1.38±0.18)×10^(12)CFU的活菌,相较于传统MRS培养基分别提升35%和198.5%。该研究为两歧双歧杆菌的高效培养及工业化应用提供了创新策略。
