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CAT2和NCA1的原核共表达中CAT2酶活性质研究
1
作者
张瑞含
韩毅
《合肥工业大学学报(自然科学版)》
北大核心
2025年第2期236-240,共5页
植物过氧化氢酶2(CAT2)是控制植物体内氧化还原水平、调控过氧化氢信号传递的关键酶。在植物体内NCA1是CAT2重要的分子伴侣,可以保护CAT2不被降解并发挥其正常功能。在目前的原核表达研究中,大部分研究仅单独表达了CAT2蛋白。文章利用...
植物过氧化氢酶2(CAT2)是控制植物体内氧化还原水平、调控过氧化氢信号传递的关键酶。在植物体内NCA1是CAT2重要的分子伴侣,可以保护CAT2不被降解并发挥其正常功能。在目前的原核表达研究中,大部分研究仅单独表达了CAT2蛋白。文章利用拟南芥CAT2和NCA1基因的全编码序列构建了原核表达载体pMAL-p2x-CAT2和PET28a(+)-NCA1,转入同一大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)后,共表达成功获得了存在于破细胞后上清液内的CAT2蛋白。通过对相关酶学性质的研究,发现CAT2的最适温度为20℃,最适pH值为8,酶活高达580 U/mg,是单独表达CAT2酶活的5倍,蛋白质量浓度为0.42μg/μL。NO是植物体内一种可以对蛋白进行亚硝基化修饰的信号分子,在成功表达出CAT2基础上利用NO供体亚硝基谷胱甘肽(GSNO)进行处理,发现NO处理后CAT2的酶活受到抑制,利用还原剂二硫苏糖醇(DTT)处理后可以使酶活恢复,推测NO可能通过亚硝基化修饰CAT2调控其酶活力,从而间接地影响细胞内环境的状态。
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关键词
过氧化氢酶
NCA1基因
原核表达
一氧化碳
亚硝基化
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职称材料
拟南芥GOX1基因的克隆和表达分析
被引量：
1
2
作者
田蜜蜜
穆秀杰
+1 位作者
张瑞含
韩毅
《合肥工业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023年第5期698-703,共6页
乙醇酸氧化酶1(glycolate oxidase 1,GOX1)是拟南芥光呼吸过程中的关键酶之一,可将乙醇酸氧化为乙醛酸和过氧化氢。文章以野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana)Columbia(Col-0)为研究材料,通过反转录(reverse transcription,RT)和聚合酶...
乙醇酸氧化酶1(glycolate oxidase 1,GOX1)是拟南芥光呼吸过程中的关键酶之一,可将乙醇酸氧化为乙醛酸和过氧化氢。文章以野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana)Columbia(Col-0)为研究材料,通过反转录(reverse transcription,RT)和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术获得GOX1基因1104 bp的CDS序列,运用生物信息学技术初步分析其基因功能,并构建带有His标签的PET28a(+)-GOX1原核表达载体,转化至大肠杆菌感受态BL21中,采用SDS-PAGE电泳检测诱导表达后的蛋白产物。GOX1基因编码367个氨基酸,相对分子质量为40341.48,理论等电点为9.16,属于亲水性蛋白,定位于过氧化物酶体。SDS-PAGE在40 kDa处检测到目的条带,与理论值预测一致。通过对GOX1基因的表达分析,为进一步探究蛋白功能和调控机制奠定了基础。
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关键词
乙醇酸氧化酶1(GOX1)
基因克隆
生物信息学分析
原核表达
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职称材料
题名
CAT2和NCA1的原核共表达中CAT2酶活性质研究
1
作者
张瑞含
韩毅
机构
合肥工业大学食品与生物工程学院
安徽农业大学生命科学学院
出处
《合肥工业大学学报(自然科学版)》
北大核心
2025年第2期236-240,共5页
基金
安徽省自然科学基金面上资助项目(2208085MC44)。
文摘
植物过氧化氢酶2(CAT2)是控制植物体内氧化还原水平、调控过氧化氢信号传递的关键酶。在植物体内NCA1是CAT2重要的分子伴侣,可以保护CAT2不被降解并发挥其正常功能。在目前的原核表达研究中,大部分研究仅单独表达了CAT2蛋白。文章利用拟南芥CAT2和NCA1基因的全编码序列构建了原核表达载体pMAL-p2x-CAT2和PET28a(+)-NCA1,转入同一大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)后,共表达成功获得了存在于破细胞后上清液内的CAT2蛋白。通过对相关酶学性质的研究,发现CAT2的最适温度为20℃,最适pH值为8,酶活高达580 U/mg,是单独表达CAT2酶活的5倍,蛋白质量浓度为0.42μg/μL。NO是植物体内一种可以对蛋白进行亚硝基化修饰的信号分子,在成功表达出CAT2基础上利用NO供体亚硝基谷胱甘肽(GSNO)进行处理,发现NO处理后CAT2的酶活受到抑制,利用还原剂二硫苏糖醇(DTT)处理后可以使酶活恢复,推测NO可能通过亚硝基化修饰CAT2调控其酶活力,从而间接地影响细胞内环境的状态。
关键词
过氧化氢酶
NCA1基因
原核表达
一氧化碳
亚硝基化
Keywords
catalase
NCA1 gene
prokaryotic expression
carbon monoxide
nitrosation
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
拟南芥GOX1基因的克隆和表达分析
被引量：
1
2
作者
田蜜蜜
穆秀杰
张瑞含
韩毅
机构
合肥工业大学食品与生物工程学院
出处
《合肥工业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023年第5期698-703,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(31300225)。
文摘
乙醇酸氧化酶1(glycolate oxidase 1,GOX1)是拟南芥光呼吸过程中的关键酶之一,可将乙醇酸氧化为乙醛酸和过氧化氢。文章以野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana)Columbia(Col-0)为研究材料,通过反转录(reverse transcription,RT)和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术获得GOX1基因1104 bp的CDS序列,运用生物信息学技术初步分析其基因功能,并构建带有His标签的PET28a(+)-GOX1原核表达载体,转化至大肠杆菌感受态BL21中,采用SDS-PAGE电泳检测诱导表达后的蛋白产物。GOX1基因编码367个氨基酸,相对分子质量为40341.48,理论等电点为9.16,属于亲水性蛋白,定位于过氧化物酶体。SDS-PAGE在40 kDa处检测到目的条带,与理论值预测一致。通过对GOX1基因的表达分析,为进一步探究蛋白功能和调控机制奠定了基础。
关键词
乙醇酸氧化酶1(GOX1)
基因克隆
生物信息学分析
原核表达
Keywords
glycolate oxidase 1(GOX1)
gene cloning
bioinformatics analysis
prokaryotic expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
CAT2和NCA1的原核共表达中CAT2酶活性质研究
张瑞含
韩毅
《合肥工业大学学报(自然科学版)》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
拟南芥GOX1基因的克隆和表达分析
田蜜蜜
穆秀杰
张瑞含
韩毅
《合肥工业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023
1
在线阅读
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职称材料
已选择
0
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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