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RT-RAA-CRISPR/Cas12a试纸条法快速检测苹果坏死花叶病毒方法的建立
1
作者 王思元 侯雨萌 +4 位作者 董铮 赵振兴 王金国 周涛 张永江 《西南农业学报》 北大核心 2025年第5期920-926,共7页
【目的】苹果花叶病是苹果最重要的病害之一,苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus, ApNMV)是引起我国苹果花叶病的主要病原物。针对苹果坏死花叶病毒建立快速、灵敏的检测技术,旨在实现该病毒的早期鉴定和防控。【方法】将反... 【目的】苹果花叶病是苹果最重要的病害之一,苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus, ApNMV)是引起我国苹果花叶病的主要病原物。针对苹果坏死花叶病毒建立快速、灵敏的检测技术,旨在实现该病毒的早期鉴定和防控。【方法】将反转录重组酶等温扩增(Reverse transcription-recombinase aided amplification, RT-RAA)技术与CRISPR/Cas系统相结合,基于CRISPR/Cas12a系统的设计原则,设计特异性识别ApNMV RT-RAA扩增产物的crRNA,通过优化反应体系的报告分子浓度、反应温度和反应时间,获得最佳反应体系和反应条件,并利用侧流层析试纸条展示检测结果。【结果】RT-RAA-CRISPR/Cas12a检测方法的检测灵敏度是实时荧光定量RT-PCR方法的10倍,对苹果样品RNA的检测极限达到500 fg/μL,并且对其他常见苹果病毒没有交叉反应。使用该方法检测田间采集样品的阳性率高于普通RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR方法。【结论】基于RT-RAA-CRISPR/Cas12a建立的苹果坏死花叶病毒试纸条检测方法具有强特异性、高灵敏度。本研究为苹果坏死花叶病毒的田间现场诊断提供了新手段。 展开更多
关键词 苹果坏死花叶病毒 反转录重组酶等温扩增 CRISPR/Cas12a 现场检测
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基于RT-RAA和CRISPR/Cas12a的一管式玉米矮花叶病毒快速检测方法
2
作者 侯雨萌 赵振兴 +4 位作者 王思元 董铮 胡中泽 周涛 张永江 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第2期268-275,共8页
玉米矮花叶病毒(Maize dwarf mosaic virus,MDMV)是一种重要的检疫性病毒,严重影响玉米的生产。为了有效防治玉米矮花叶病,本研究基于反转录重组酶介导等温核酸扩增(RT-RAA)技术和CRISPR/Cas12a系统构建了一种MDMV快速检测方法,将所有... 玉米矮花叶病毒(Maize dwarf mosaic virus,MDMV)是一种重要的检疫性病毒,严重影响玉米的生产。为了有效防治玉米矮花叶病,本研究基于反转录重组酶介导等温核酸扩增(RT-RAA)技术和CRISPR/Cas12a系统构建了一种MDMV快速检测方法,将所有试剂集中在一个试管中进行反应,并通过侧向流动试纸条(LFD)检测反应结果。本研究筛选得到的最佳反应条件为,引物添加量2.8μL、FB报告分子浓度100 nmol/L、RT-RAA系统反应时间20 min、CRISPR/Cas12a系统反应时间20 min。本研究构建的基于RT-RAA和CRISPR/Cas12a的一管式玉米矮花叶病毒快速检测方法特异性强、灵敏度高,且所用试验材料方便携带和运输,适用于现场检测。 展开更多
关键词 玉米矮花叶病毒 反转录重组酶介导等温核酸扩增(RT-RAA)技术 CRISPR/Cas12a 侧向流动试纸条
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基于RT-RAA的苹果坏死花叶病毒快速检测方法的建立
3
作者 侯雨萌 赵振兴 +4 位作者 王思元 董铮 胡中泽 周涛 张永江 《植物保护》 北大核心 2025年第4期314-319,共6页
苹果是我国重要的园艺作物,具有较高的经济地位。病毒是引起苹果病害的重要因素,苹果坏死花叶病毒(apple necrotic mosaic virus,ApNMV)是引起苹果坏死和花叶症状的病原之一。为了有效预防ApNMV的侵染,本研究基于反转录重组酶介导恒温扩... 苹果是我国重要的园艺作物,具有较高的经济地位。病毒是引起苹果病害的重要因素,苹果坏死花叶病毒(apple necrotic mosaic virus,ApNMV)是引起苹果坏死和花叶症状的病原之一。为了有效预防ApNMV的侵染,本研究基于反转录重组酶介导恒温扩增(reverse transcription-recombinase aided amplification,RT-RAA)技术,建立ApNMV的快速检测方法。根据ApNMV外壳蛋白编码基因的保守序列设计4对RAA引物,筛选最佳引物序列,并进行反应体系的优化。结果表明,RAA的最佳反应条件为:引物终浓度0.8μmol/L,反应温度42℃,反应时间20 min。该方法能够特异性检测ApNMV。对携带ApNMV样品的RNA进行检测,RT-RAA检测体系的检测极限为5 pg/μL,普通RT-PCR检测体系的检测极限为50 pg/μL,RT-RAA检测体系灵敏度是普通RT-PCR体系的10倍。该检测方法具有快速、简便、灵敏度高等优点。 展开更多
关键词 苹果坏死花叶病毒(ApNMV) 反转录重组酶介导恒温扩增 快速检测
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播期推迟对棉花根系生长发育特征及产量的影响 被引量：3
4
作者 张超 张鹏 +7 位作者 杨喆 孙红春 祝令晓 张科 张永江 白志英 刘连涛 李存东 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2024年第3期181-193,共13页
【目的】研究推迟播期对棉花根系生长发育特征和产量的影响,为黄河流域棉区棉花适期播种提供依据。【方法】2022―2023年在河北农业大学威县试验站开展田间试验,设置常规播期(4月15日)和推迟播期(5月1日)2个处理,分析推迟播期对棉花品... 【目的】研究推迟播期对棉花根系生长发育特征和产量的影响,为黄河流域棉区棉花适期播种提供依据。【方法】2022―2023年在河北农业大学威县试验站开展田间试验,设置常规播期(4月15日)和推迟播期(5月1日)2个处理,分析推迟播期对棉花品种冀农大23号的根系分布、根系生长速率、根冠比、干物质积累量和产量等的影响。【结果】与常规播期相比,推迟播期条件下,棉花根系长度和生物量的最大增长速率分别增加2.92~5.35 cm·d^(-1)和0.40~0.76 mg·d^(-1);深层土壤中棉花根系占比提高,其中30~60 cm土层根系长度占比和根系生物量占比分别增加2.99~3.55百分点和3.94~4.42百分点;生育后期棉株地上部干物质积累量和根冠比无明显差异;根系载荷能力显著降低6.43%~17.69%;2022年籽棉产量无显著差异,2023年单位面积铃数和籽棉产量分别显著增加9.72%和7.66%。相关分析表明,0~60 cm土层根长密度、0~60 cm土层根系生物量密度、根系生物量最大增长速率和30~60 cm土层根系长度占比均与籽棉产量极显著正相关。【结论】黄河流域棉区推迟播期(5月1日)可通过提高棉花根系生长速率、深层土壤中根系长度和根系生物量的占比,增强根系吸收功能以保障地上部干物质的积累,促进棉花高产。 展开更多
关键词 棉花 推迟播种 根系 根长 生物量 根冠比 产量
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外源褪黑素对盐胁迫下棉花生长发育、抗氧化酶活性及渗透调节物质含量的影响 被引量：2
5
作者 宋晨 刘莎莎 +7 位作者 王简 马鑫颖 刘连涛 张科 张永江 孙红春 白志英 李存东 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2024年第6期486-498,共13页
【目的】探究外源褪黑素(melatonin, MT)对盐胁迫下棉花生长发育的调控效应。【方法】以国欣棉9号为材料,采用室内盆栽方法,土壤含盐量为0.3%(质量分数),筛选出适宜的MT浓度后,设置4个处理:浇灌清水+喷施清水(CK)、浇灌盐水+喷施清水(S... 【目的】探究外源褪黑素(melatonin, MT)对盐胁迫下棉花生长发育的调控效应。【方法】以国欣棉9号为材料,采用室内盆栽方法,土壤含盐量为0.3%(质量分数),筛选出适宜的MT浓度后,设置4个处理:浇灌清水+喷施清水(CK)、浇灌盐水+喷施清水(S)、浇灌清水+喷施MT(MT)和浇灌盐水+喷施MT(MS),研究了不同处理下棉花的株高、茎粗、叶面积、叶绿素相对含量(用soil and plant analyzer development,SPAD值代表)、单株生物量、根冠比、抗氧化酶活性、活性氧含量以及渗透调节物质含量的变化,并对上述指标进行了相关分析。【结果】与CK处理相比,S处理显著降低棉花的株高、茎粗、叶面积、SPAD值、单株地上部鲜物质质量、地下部鲜物质质量、地上部干物质质量、地下部干物质质量,显著提高根冠比;在盐胁迫处理后期,S处理显著降低叶片超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化物酶(peroxidase, POD)和过氧化氢酶(catalase, CAT)活性,显著提高过氧化氢、超氧阴离子和丙二醛的含量,显著降低可溶性糖、可溶性蛋白和脯氨酸的含量。与S处理相比,盐胁迫下叶片喷施200μmol·L^(-1)MT(MS处理)可显著提高棉花的株高、茎粗、叶面积、SPAD值、单株地上部与地下部的鲜物质质量及地上部干物质质量,显著降低根冠比,显著提高SOD、POD和CAT活性,显著降低过氧化氢、超氧阴离子和丙二醛的含量,显著提高可溶性糖、可溶性蛋白和脯氨酸的含量。棉株地上部干物质质量与株高、茎粗、叶面积、SPAD值、地上部鲜物质质量、地下部鲜/干物质质量、SOD活性、POD活性、CAT活性、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、脯氨酸含量均呈显著正相关关系,而与超氧阴离子含量、丙二醛含量显著负相关。【结论】叶面喷施200μmol·L^(-1)MT能够有效缓解高盐环境(土壤含盐量为0.3%)对棉花产生的氧化胁迫与渗透胁迫,促进棉花生长,提高耐盐能力。 展开更多
关键词 棉花 褪黑素 盐胁迫 抗氧化酶 渗透调节物质 生物量
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辣椒轻斑驳病毒RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化检测方法的建立 被引量：2
6
作者 赵振兴 范奇璇 +3 位作者 王思元 董铮 胡中泽 张永江 《河南农业科学》 北大核心 2024年第9期80-87,共8页
辣椒是重要的园艺作物,辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV)严重威胁辣椒等茄科园艺作物的生产安全。为提高PMMoV的防控效率,根据其编码外壳蛋白(Coat protein,CP)的基因保守序列,基于重组酶介导等温核酸扩增技术(Recombina... 辣椒是重要的园艺作物,辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV)严重威胁辣椒等茄科园艺作物的生产安全。为提高PMMoV的防控效率,根据其编码外壳蛋白(Coat protein,CP)的基因保守序列,基于重组酶介导等温核酸扩增技术(Recombinase?aided amplification,RAA),设计了特异性RAA引物,实现对PMMoV的快速等温扩增,并基于CRISPR/Cas12a的设计原则,设计了crRNA靶向RT-RAA扩增产物。优化结果显示,总反应体系在报告基因FQ终浓度为400 nmol/L,Cas12a/crRNA比例为1∶5、终浓度为200 nmol/L和1000 nmol/L条件下检测信号最强,最终的RT-RAA反应和CRISPR显色体系分别仅需15 min,即可在便携式蓝光照射设备下直接观察到阳性信号。该方法可特异性检测PMMoV,对携带PMMoV的辣椒样品RNA的检测极限可达到1.34 pg/μL,分别是普通RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测灵敏度的1000倍和10倍。对实际样品中的检测结果显示,建立的RT-RAA-CRISPR/Cas12a检测技术可以在PMMoV侵染的辣椒和番茄叶片、果实及土壤中检测到PMMoV,可用于辣椒轻斑驳病毒的快速、灵敏、可视化检测。 展开更多
关键词 辣椒轻斑驳病毒 RT-RAA CRISPR/Cas12a 可视化检测
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基于RPA-CRISPR/Cas12a的番茄花叶病毒可视化检测方法的建立 被引量：1
7
作者 董铮 赵振兴 +3 位作者 范奇璇 王思元 周涛 张永江 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期235-241,共7页
番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)属于植物杆状病毒科Virgaviridae烟草花叶病毒属Tobamovirus成员,主要危害番茄和辣椒,多数茄科植物易感染,严重影响果实的品质和产量。本研究根据ToMV编码的外壳蛋白的基因保守序列,设计重组酶... 番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)属于植物杆状病毒科Virgaviridae烟草花叶病毒属Tobamovirus成员,主要危害番茄和辣椒,多数茄科植物易感染,严重影响果实的品质和产量。本研究根据ToMV编码的外壳蛋白的基因保守序列,设计重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)特异性引物和簇状规则间隔短链重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)及相关蛋白12a(CRISPR-associated 12a,Cas12a)的crRNA并挑选报告基因。通过优化反应体系建立了ToMV的快速可视化检测方法,当荧光报告基因FQ终浓度为400 nmol/L、Cas12a/crRNA比例为1∶5、终浓度为200 nmol·L^(-1)/1000 nmol·L^(-1)时检测信号最强,只需RPA和CRISPR/Cas12a分别反应15 min,即可在便携式蓝光照射设备下直接观察到阳性信号。该方法可特异性检测ToMV,对携带ToMV样品的RNA检测灵敏度可以达到172 ag/μL,是普通RT-PCR检测灵敏度的10000倍,可用于ToMV快速灵敏的可视化检测。 展开更多
关键词 番茄花叶病毒 RPA CRISPR/Cas12a 可视化检测
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被动荧光探测水分胁迫对玉米叶片影响的初步研究 被引量：19
8
作者 张永江 赵春江 +3 位作者 刘良云 王纪华 马智宏 王人潮 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第9期39-43,共5页
利用叶绿素荧光被动探测方法初步探讨了水分胁迫对玉米叶片生理机能的影响。水分胁迫梯度通过将离体叶片放在干燥器时间不同而获得。室内采用积分球耦合A SD光谱仪,结合加/不加滤光片照明的方法得到反射率差值光谱,即代表叶绿素荧光光... 利用叶绿素荧光被动探测方法初步探讨了水分胁迫对玉米叶片生理机能的影响。水分胁迫梯度通过将离体叶片放在干燥器时间不同而获得。室内采用积分球耦合A SD光谱仪,结合加/不加滤光片照明的方法得到反射率差值光谱,即代表叶绿素荧光光谱。结果表明随着叶片含水率的降低,叶绿素荧光发射峰的位置几乎没有变化,峰高在686 nm处有先上升后逐渐降低的趋势,在740 nm处则缓慢下降。双峰比值D if686/D if740与叶片含水率呈负相关关系(R2=0.3850,n=21),不同水分胁迫程度下利用调制式荧光仪测定的荧光参数F v/Fm与740 nm荧光光谱峰值线性正相关,与双峰比值有负相关趋势。表明该被动方法可以探测水分胁迫引起的叶片光系统受胁状况,为田间被动遥感探测植物叶绿素荧光和生理状态提供参考。 展开更多
关键词 叶绿素荧光 反射率光谱 水分胁迫 被动遥感 玉米
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3种葫芦科作物种质资源中黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测 被引量：5
9
作者 张永江 马洁 +1 位作者 李桂芬 李明福 《种子》 CSCD 北大核心 2008年第10期41-43,共3页
为确定黄瓜绿斑驳花叶病毒在葫芦、西瓜、甜瓜3种葫芦科(Cucurbitaceae)作物种质中的携带部位、最低检测量及不同检测技术的检测效果,对3种作物的不同种质资源以及同种种质资源的不同处理进行了DAS-ELISA和RT-PCR检测,结果显示受侵染葫... 为确定黄瓜绿斑驳花叶病毒在葫芦、西瓜、甜瓜3种葫芦科(Cucurbitaceae)作物种质中的携带部位、最低检测量及不同检测技术的检测效果,对3种作物的不同种质资源以及同种种质资源的不同处理进行了DAS-ELISA和RT-PCR检测,结果显示受侵染葫芦种子的种皮、种仁可带毒;受侵染西瓜的瓜叶、瓜皮、瓜瓤、种皮、种仁、瓜蔓均可带毒;受侵染甜瓜的叶片可带毒。RT-PCR检测灵敏度高于ELISA。 展开更多
关键词 葫芦科 种质资源 黄瓜绿斑驳花叶病毒 检测
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实时荧光RT-PCR方法检测马铃薯V病毒 被引量：6
10
作者 张永江 辛言言 +4 位作者 李桂芬 马洁 魏梅生 朱水芳 沈建国 《江苏农业科学》 北大核心 2013年第6期36-38,共3页
为了给马铃薯V病毒提供快速灵敏的检测技术以防止其传播扩散,根据其外壳蛋白基因核苷酸保守序列设计引物和TaqMan探针,通过特异性及灵敏度试验建立该病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法检测灵敏度高,至少可检测到36 pg/μL的总RNA;... 为了给马铃薯V病毒提供快速灵敏的检测技术以防止其传播扩散,根据其外壳蛋白基因核苷酸保守序列设计引物和TaqMan探针,通过特异性及灵敏度试验建立该病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法检测灵敏度高,至少可检测到36 pg/μL的总RNA;对马铃薯V病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯A病毒、李痘病毒及马铃薯X病毒具有良好的特异性。该方法快速、灵敏、无需任何PCR后处理且交叉污染风险小,可用于马铃薯V病毒的快速检测。 展开更多
关键词 马铃薯V病毒 实时荧光RT—PCR方法 检测
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一步法RT-PCR检测烟草环斑病毒试剂盒的研制与应用 被引量：5
11
作者 张永江 李明福 +1 位作者 黄冲 相宁 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第10期2072-2073,共2页
根据烟草环斑病毒基因组序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术研制成一步法检测该病毒的试剂盒,并建立了操作程序。对试剂盒扩增到的预期产物进行测序验证,产物序列与目的序列间的同源性为97.8%,表明该试剂盒的准确性较高。试验结果还表明... 根据烟草环斑病毒基因组序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术研制成一步法检测该病毒的试剂盒,并建立了操作程序。对试剂盒扩增到的预期产物进行测序验证,产物序列与目的序列间的同源性为97.8%,表明该试剂盒的准确性较高。试验结果还表明,该试剂盒在常温、4℃和-20℃下可分别保存2d、7d和60d;灵敏度是DAS-ELISA的100倍;质量控制试验结果一致,具有较高的重复性。 展开更多
关键词 一步法RT—PCR 烟草环斑病毒 检测 试剂盒
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宁夏固原地区马铃薯M病毒的检测鉴定 被引量：3
12
作者 张永江 刘忠梅 +5 位作者 燕照玲 刘洪义 马洁 陈林 辛言言 马云霞 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第8期79-81,85,共4页
为了解宁夏固原地区马铃薯M病毒(potato virus M,PVM)发生情况,采集了18份表现叶片变形、茎坏死及植株矮化症状的样品,应用血清学(DAS-ELISA)和分子生物学(RT-PCR)方法进行检测。DAS-ELISA检测结果显示,有2份样品(5号和10号)为PVM阳性。... 为了解宁夏固原地区马铃薯M病毒(potato virus M,PVM)发生情况,采集了18份表现叶片变形、茎坏死及植株矮化症状的样品,应用血清学(DAS-ELISA)和分子生物学(RT-PCR)方法进行检测。DAS-ELISA检测结果显示,有2份样品(5号和10号)为PVM阳性。对2份阳性样品进行RT-PCR检测,均获得416bp的目的产物,其序列与国内外已报道的其他PVM分离物的核苷酸序列同源性最高分别达99%和98%,说明被检测样品确实感染了PVM。这是PVM在宁夏固原发生的首次报道,为今后该地区马铃薯病毒病害的防控提供了依据。 展开更多
关键词 宁夏固原 马铃薯M病毒 检测 鉴定
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基于外壳蛋白核酸序列的中国黄瓜绿斑驳花叶病毒分离物起源分析 被引量：8
13
作者 张永江 李明福 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期601-604,609,共5页
以直接从中国进口源性葫芦种子中提取的总RNA为模板,经RT-PCR扩增获得种子上携带的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)的外壳蛋白(CP)基因(LHP,Liaoning cucurbits seedprotein),将其克隆到pMD18-T载体上进... 以直接从中国进口源性葫芦种子中提取的总RNA为模板,经RT-PCR扩增获得种子上携带的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)的外壳蛋白(CP)基因(LHP,Liaoning cucurbits seedprotein),将其克隆到pMD18-T载体上进行序列测定。结果表明该CP基因(GenBank登陆号:DQ997778)由483个核苷酸组成,编码161个氨基酸。对包括该分离物在内的19个CP基因核苷酸序列进行同源性比较和系统进化树构建,并结合寄主来源及地域来源进行LHP的起源分析,结果表明黄瓜绿斑驳花叶病毒不同分离物的序列分群和进化关系与上述两个因素无明显关系。 展开更多
关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 葫芦 外壳蛋白 起源
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一步法逆转录重组酶聚合酶常温扩增(RT-RPA)技术检测菜豆荚斑驳病毒 被引量：8
14
作者 张永江 魏霜 +3 位作者 袁俊杰 乾义柯 李桂芬 魏梅生 《江苏农业科学》 2018年第21期96-98,共3页
菜豆荚斑驳病毒(bean pod mottle virus,简称BPMV)是我国进境植物检疫性有害生物,建立快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增(reverse transcription-recombinase polymerase amplification,简称RT-RPA)技术用于对BPMV的检测。根据BPM... 菜豆荚斑驳病毒(bean pod mottle virus,简称BPMV)是我国进境植物检疫性有害生物,建立快速灵敏的一步法逆转录重组酶聚合酶扩增(reverse transcription-recombinase polymerase amplification,简称RT-RPA)技术用于对BPMV的检测。根据BPMV基因组的保守序列,设计重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,简称RPA)技术特异性引物,对BPMV、南方菜豆花叶病毒(southern bean mosaic virus,简称SBMV)、大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,简称SMV)、南芥菜花叶病毒(arabis mosaic virus,简称Ar MV)及烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus,简称TRSV)共5种病毒进行RT-RPA特异性验证;并设计5个模板浓度梯度,以验证RT-RPA方法的灵敏性。结果表明,建立的RT-RPA检测方法能够从BPMV样品中检测到198 bp的特异性条带,且仅需在40℃下恒温反应40 min,不需要特殊的仪器设备;特异性验证试验表明,除BPMV能检测到特异性条带外,其他4种病毒SBMV、SMV、Ar MV、TRSV均未检测到特异性条带,证明该方法特异性好; RT-RPA检测BPMV的灵敏度达到10-4稀释度,说明所建立的RT-RPA方法灵敏性高。综上所述,建立的RT-RPA方法检测BPMV特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合实验室或者现场快速检测。 展开更多
关键词 菜豆荚斑驳病毒 RT-RPA检测 植物检疫
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应用纳米磁珠荧光PCR检测棉花曲叶病毒 被引量：3
15
作者 张永江 李明福 +3 位作者 辛言言 李桂芬 马洁 邓丛良 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期90-94,共5页
为了提供快速灵敏检测棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl virus,CLCuV)的技术以防止其传播扩散,本研究根据CLCuV外壳蛋白基因(Coat protein,CP)保守序列设计了引物和TaqMan探针,并结合纳米磁珠(Magneticnanoparticles,MNPs)建立了该病毒的... 为了提供快速灵敏检测棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl virus,CLCuV)的技术以防止其传播扩散,本研究根据CLCuV外壳蛋白基因(Coat protein,CP)保守序列设计了引物和TaqMan探针,并结合纳米磁珠(Magneticnanoparticles,MNPs)建立了该病毒的MNP实时荧光PCR(Real-time PCR)检测方法。该方法检测阈值约为525 fg.μL-1DNA。通过对CLCuV、非洲木薯花叶病毒、烟草线条病毒、黄瓜花叶病毒及番茄斑萎病毒的检测表明,该方法具有良好的特异性;同时该方法无需任何PCR后处理,交叉污染风险小。本方法可用于CLCuV的快速检测。 展开更多
关键词 棉花曲叶病毒 实时荧光PCR 检测
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辣椒种子中辣椒轻斑驳病毒的检测 被引量：3
16
作者 张永江 李桂芬 +1 位作者 马洁 郭京泽 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第14期4228-4229,共2页
采用三抗体夹心酶联(TAS-ELISA)法和反转录PCR(RT-RCR)扩增法分别对3份进口的包被种衣剂的辣椒种子进行了辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV)的检测。结果表明,两种方法均表明被检样品携带PMMoV,检测结果比较理想。在此基... 采用三抗体夹心酶联(TAS-ELISA)法和反转录PCR(RT-RCR)扩增法分别对3份进口的包被种衣剂的辣椒种子进行了辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV)的检测。结果表明,两种方法均表明被检样品携带PMMoV,检测结果比较理想。在此基础上建立了一种快速、灵敏的从辣椒种子中直接检测PMMoV的检测体系,缩短了检测时间,提高了检测效率。 展开更多
关键词 辣椒轻斑驳病毒 检测 种子 辣椒
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论外国刑法中的原因自由行为——兼论原因自由行为在我国刑法中的规定 被引量：5
17
作者 张永江 舒洪水 《宁夏社会科学》 CSSCI 北大核心 2006年第4期27-30,共4页
本文浅析了原因自由行为的含义及其可罚性的根据,结合国外有关原因自由行为的立法例,探讨我国大陆刑法中有关原因自由行为的立法完善。
关键词 原因自由行为 可罚性根据 立法例 完善
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体育课程校本开发的基本理论剖析 被引量：4
18
作者 张永江 顾渊彦 《武汉体育学院学报》 CSSCI 北大核心 2009年第4期80-85,共6页
对体育课程校本开发的发展状况进行探讨,着重分析了体育课程校本开发的目标导向和构建主义基本理念,试图通过研究分析,针对体育课程校本开发中出现的问题,提出了体育课程改革有益的建议,望能够为基层的体育工作者提供一些帮助。
关键词 校本课程 校本开发 课程改革 目标导向 构建
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不同环境温度下的育雏效果 被引量：4
19
作者 张永江 陈万中 《中国家禽》 北大核心 1998年第1期34-35,共2页
不同环境温度下的育雏效果＠张永江＠陈万中￥吉林省农科院畜牧分院不同环境温度下的育雏效果张永江陈万中（吉林省农科院畜牧分院怀德１３６１００）目前各养鸡场家和专业户采用不同的给温方法进行雏鸡培育工作，所取得的结果也各有不... 不同环境温度下的育雏效果＠张永江＠陈万中￥吉林省农科院畜牧分院不同环境温度下的育雏效果张永江陈万中（吉林省农科院畜牧分院怀德１３６１００）目前各养鸡场家和专业户采用不同的给温方法进行雏鸡培育工作，所取得的结果也各有不同，本文就常规低温、高温和超低温育雏谈一... 展开更多
关键词 鸡 环境温度 育雏 低温育雏 高温育雏
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海南省香草兰上病毒病的病原检测 被引量：2
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作者 张永江 李桂芬 施宗伟 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第B08期135-136,共2页
采用双抗体夹心酶联(DAS-ELISA)检测法和反转录PCR(RT-RCR)扩增法对海南省送检的香草兰叶片样品进行病毒病的病原检测,结果在香草兰叶片样品上发现了建兰花叶病毒。
关键词 香草兰 病原 检测
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