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一株门多萨假单胞菌的分离鉴定及药物敏感性分析 被引量:5
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作者 张楠驰 方庆 王利 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第6期1832-1840,共9页
试验旨在确定感染黄颡鱼的病原菌并探讨其耐药性。采用细菌培养、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析方法进行菌株分离鉴定,运用PCR方法扩增耐药基因,用纸片扩散法对分离菌进行药敏试验。结果显示,分离菌与门多萨假单胞菌基本一致,16S rDN... 试验旨在确定感染黄颡鱼的病原菌并探讨其耐药性。采用细菌培养、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析方法进行菌株分离鉴定,运用PCR方法扩增耐药基因,用纸片扩散法对分离菌进行药敏试验。结果显示,分离菌与门多萨假单胞菌基本一致,16S rDNA基因长度为1 442 bp。同源性及系统进化树分析显示,该菌16S rDNA序列与门多萨假单胞菌NK-01同源性为99.6%,亲缘关系最近。综合判定分离菌为门多萨假单胞菌,命名为fsznc-01。耐药基因检测结果显示,分离菌fsznc-01含有β-内酰胺类耐药基因TEM,氨基糖苷类耐药基因aph(3′)-Ⅱa、aac(6)-Ⅰb、aac(3)-Ⅱa及磺胺类耐药基因Sul1和Sul2,未检测出磺胺类耐药基因Sul3。药敏试验结果显示,分离菌fsznc-01对头孢他啶、庆大霉素和哌拉西林等药物敏感,对头孢氨苄、头孢唑林和头孢拉定耐药。本试验结果可为预防门多萨假单胞菌感染导致的鱼类疾病提供参考依据。 展开更多
关键词 门多萨假单胞菌 分离鉴定 耐药基因 药物敏感性分析 黄颡鱼
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致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌分离鉴定及三重PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 张楠驰 苟小兰 王利 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第7期95-101,共7页
为鉴定导致患病鲫鱼肛门红肿、腹部有出血点症状的病原菌,并建立一种快速检测该病原菌的方法。本研究从患病鲫鱼中分离了病原菌,采用形态学、理化特性分析及16S rDNA序列分析方法鉴定菌株。采用PCR扩增法检测该菌毒力基因,琼脂纸片扩散... 为鉴定导致患病鲫鱼肛门红肿、腹部有出血点症状的病原菌,并建立一种快速检测该病原菌的方法。本研究从患病鲫鱼中分离了病原菌,采用形态学、理化特性分析及16S rDNA序列分析方法鉴定菌株。采用PCR扩增法检测该菌毒力基因,琼脂纸片扩散法检测该菌株的耐药性,致病性能验证试验检测其致病性。针对该菌ail基因、inv基因和intB基因设计了3条特异性引物,通过对反应体系和条件的优化,建立了一种检测该菌的三重PCR方法并初步应用于患病鲫鱼样品的检测中。结果显示,从患病鲫鱼心脏组织中分离了一株小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica),命名为fsznc-10。检测到该菌携带ail、ystB、virF、intB毒力基因,该菌对诺氟沙星、庆大霉素等5种抗生素敏感,对鲫鱼具有一定的致病性。三重PCR方法可准确扩增出小肠结肠炎耶尔森氏菌ail、inv和intB三个目的基因,而其他菌株均未扩增出目的基因。该方法检测该菌DNA最低检出量为1.704×10-6 ng/μL,检测患病鱼心脏样品的阳性率约为86.67%,与16S rDNA序列分析方法的检测符合率为100%。本试验建立的三重PCR检测法具有特异性强、敏感性高、操作简单、成本低的优点。这为临床中小肠结肠炎耶尔森氏菌的防控和检测提供参考依据。 展开更多
关键词 小肠结肠炎耶尔森氏菌 毒力基因 快速检测 多重PCR
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鱼源藤黄微球菌三重PCR检测法的建立及耐药性分析
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作者 张楠驰 王利 方庆 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第5期94-100,共7页
为鉴定感染黄颡鱼菌株fsznc-CL、建立一种快速检测的方法和探讨其耐药特性。采用形态学、理化特性及16S rDNA序列分析方法进行菌株鉴定,人工回归感染研究其致病性。通过对三对特异性引物的反应体系和条件进行优化,建立一种三重PCR检测... 为鉴定感染黄颡鱼菌株fsznc-CL、建立一种快速检测的方法和探讨其耐药特性。采用形态学、理化特性及16S rDNA序列分析方法进行菌株鉴定,人工回归感染研究其致病性。通过对三对特异性引物的反应体系和条件进行优化,建立一种三重PCR检测法并应用到人工感染黄颡鱼的检测中。运用PCR方法扩增耐药基因,用琼脂纸片扩散法检测该菌的药敏特性。结果表明,分离菌株fsznc-CL为藤黄微球菌(Micrococcus luteus),该菌对黄颡鱼具有一定的致病性。三重PCR检测法可准确扩增出藤黄微球菌CBS、Sig和Pol三对目的基因,而其他菌株未扩增出,检测该菌的最低模板浓度为5.822×10-3 ng/μL,该方法检测带菌样品的阳性率约为83.33%。该菌携带了TEM、aph(3′)-Ⅱa、aac(6′)-Ⅰ、Sul1和Sul2耐药基因。菌株fsznc-CL对诺氟沙星、苯唑西林、红霉素和呋喃唑酮耐药。本试验建立的三重PCR检测法具有较高的特异性和灵敏度,目前藤黄微球菌对少部分抗生素耐药。 展开更多
关键词 藤黄微球菌 药敏分析 快速检测 多重PCR 黄颡鱼
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