肌球蛋白重链7基因来源的miR-208b-3p促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达 被引量：3

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作者 张梦珍 翟琳 +5 位作者 郭林林 朱杰宁 李晖 徐金东 方咸宏 单志新 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期642-650,共9页

【目的】探究肌球蛋白重链7基因来源的微小RNA-208b-3p(miR-208b-3p)对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用。【方法】通过miRNA表达谱芯片分析18周龄的糖尿病db/db小鼠和db/m对照小鼠心肌中差异的miRNAs。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR... 【目的】探究肌球蛋白重链7基因来源的微小RNA-208b-3p(miR-208b-3p)对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用。【方法】通过miRNA表达谱芯片分析18周龄的糖尿病db/db小鼠和db/m对照小鼠心肌中差异的miRNAs。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-208b-3p在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和高糖/葡萄糖氧化酶(G/Go)处理的C57BL/6乳小鼠心肌细胞(NMVCs)和心肌成纤维细胞(mCFs)中的表达;利用CCK8细胞增殖实验、流式细胞术和纤维化相关蛋白(包括COL1A1、COL3A1和α-SMA)表达检测来了解miR-208b-3p对mCFs纤维化表型的影响;双萤光素酶报告基因实验检测miR-208b-3p与潜在靶基因Mtf2和Pgrmc1 3′端非翻译区(3′-UTR)的结合作用;利用RT-qPCR和Western blot法分别检测miR-208b-3p转染的mCFs中Mtf2和Pgrmc1表达;通过小干扰RNA(siRNA)抑制Mtf2和Pgrmc1表达,并检测对mCFs中纤维化相关蛋白表达的作用。【结果】miRNA表达谱和RTqPCR结果证实miR-208b-3p在糖尿病db/db小鼠心肌中表达显著升高。miR-208b-3p前体与宿主基因Myh7在db/db小鼠心肌中表达显著升高,miR-208b-3p与Myh7 mRNA在乳小鼠来源的mCFs和NMVCs中均有表达,但在NMVCs中水平更高。miR-208b-3p在AngⅡ和G/Go处理后的mCFs和NMVCs中表达均明显升高。miR-208b-3p可显著增加mCFs中纤维化相关蛋白COL1A1、COL3A1和α-SMA表达,但不影响mCFs的增殖能力和细胞周期分布特征。双萤光素酶报告基因实验显示miR-208b-3p与Mtf2和Pgrmc1 3′-UTR有结合作用。miR-208b-3p可在转录后水平抑制mCFs中Mtf2和Pgrmc1表达。miR-208b-3p、Mtf2 siRNA和Pgrmc1 siRNA均能一致性地促进mCFs中纤维化相关蛋白表达。【结论】miR-208b-3p通过靶向Mtf2和Pgrmc1基因发挥促进mCFs中纤维化相关基因表达的作用。 展开更多

关键词 心肌纤维化 微小RNA miR-208b-3p 心肌成纤维细胞

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离体大鼠冠状动脉的分离培养及张力测定技术 被引量：10

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作者 邝素娟 邓春玉 +8 位作者 杨慧 饶芳 刘晓颖 张梦珍 朱杰宁 单志新 林秋雄 杨敏 余细勇 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期137-141,共5页

目的建立体外培养大鼠冠状动脉和测定血管平滑肌舒缩功能的方法,为研究各种药物对血管张力的作用提供良好的血管模型.方法采用脱臼法处死SD大鼠（200～250g）,取下心脏,冰浴条件下显微操作分离冠状动脉,制备成1.8～2.0mm长的血管条,置于... 目的建立体外培养大鼠冠状动脉和测定血管平滑肌舒缩功能的方法,为研究各种药物对血管张力的作用提供良好的血管模型.方法采用脱臼法处死SD大鼠（200～250g）,取下心脏,冰浴条件下显微操作分离冠状动脉,制备成1.8～2.0mm长的血管条,置于含DMEM-F12培养基（内含10%胎牛血清、1×105U·L-1青霉素、100mg·L-1链霉素）的培养皿内,在37℃,通以95%O2、5%CO2混合气的条件下培养24h后,用两根不锈钢丝穿过血管腔,固定于微血管张力测定仪的浴槽内.分别给予血管收缩剂5HT、U46619、CaCl2和血管舒张剂ACh,然后测定冠状动脉的张力变化.结果培养的冠状动脉对5-HT、U46619、CaCl2产生浓度依赖性收缩,对ACh产生浓度依赖性舒张反应.结论采用离体器官培养法培养离体的冠状动脉环,能保持血管平滑肌基本的功能,可用于各种因素对血管结构和功能影响的研究. 展开更多

关键词 冠状动脉 培养 血管张力 大鼠 血管收缩剂 血管舒张剂

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MicroRNA-34a靶向SIRT1参与阿霉素诱导的心肌细胞凋亡 被引量：8

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作者 唐春梅 张铭 +8 位作者 胡志琴 朱杰宁 符永恒 张梦珍 林秋雄 邓春玉 谭虹虹 吴书林 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期385-391,共7页

目的:研究微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)在阿霉素诱导的心肌细胞凋亡中的作用及其作用靶基因。方法:建立阿霉素(doxorubicin,Dox)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡模型;TUNEL染色观察H9c2细胞凋亡;双萤光素酶报告实验检测miR-34a与潜在... 目的:研究微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)在阿霉素诱导的心肌细胞凋亡中的作用及其作用靶基因。方法:建立阿霉素(doxorubicin,Dox)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡模型;TUNEL染色观察H9c2细胞凋亡;双萤光素酶报告实验检测miR-34a与潜在靶基因沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR检测miR-34a和SIRT1 mRNA表达水平,Western blot检测SIRT1和凋亡相关蛋白表达水平。结果:阿霉素处理H9c2细胞之后,细胞发生凋亡,miR-34a的表达显著增强;双萤光素酶报告实验提示miR-34a与SIRT1 3'UTR可相互作用,并证实miR-34a可在转录后水平抑制SIRT1的表达,SIRT1蛋白水平在阿霉素处理的心肌细胞中显著下调;过表达miR-34a及沉默SIRT1均能一致性抑制Bcl-2表达,促进Bax和p66shc的表达,而过表达SIRT1能有效抑制阿霉素诱导的H9c2细胞凋亡。结论:SIRT1是miR-34a的靶基因,并介导了miR-34a在阿霉素诱导的心肌细胞凋亡中的作用。 展开更多

关键词 阿霉素 心脏毒性 微小RNA-34a 沉默信息调节因子1 H9C2细胞 细胞凋亡

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TIAM2功能性基因突变对冠心病患者氯吡格雷抗血小板治疗后出血事件的影响 被引量：8

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作者 李新新 钟诗龙 +5 位作者 李园 韦素惠 张梦珍 祁周措 陈纪言 劳海燕 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第7期1080-1083,共4页

目的:探讨TIAM2功能性基因突变与冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后服用抗血小板药物氯吡格雷后出现出血事件的关联性。方法:从广东省人民医院顺序入选120例PCI术后接受氯吡格雷抗血小板治疗的中国汉族患者。应用PCR测序对PCI术... 目的:探讨TIAM2功能性基因突变与冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后服用抗血小板药物氯吡格雷后出现出血事件的关联性。方法:从广东省人民医院顺序入选120例PCI术后接受氯吡格雷抗血小板治疗的中国汉族患者。应用PCR测序对PCI术后随访6个月的患者进行TIAM2启动子区基因分型检测。结果:随访6个月后,失访7例,实为113例,其中19例出现出血,94例未出现出血;合并糖尿病(OR=3.115)或是同时服用他汀类药物(OR=11.539)者出血风险可能较高,但无统计学差异(P<0.05);TIAM2启动子区有3个变异(c.3168+3116C>T、c.3168+3261A>G、c.3168+3596A>C),分为野生型、杂合型、纯合型,在出血患者中的概率分别为36.84%、52.63%、10.53%,存在一定的连锁状态,对氯吡格雷抗血小板治疗出现出血事件无显著的关联性(P>0.05)。结论:TIAM2功能性基因突变对氯吡格雷抗血小板治疗出现出血事件无显著影响。 展开更多

关键词 冠心病 TIAM2基因 氯吡格雷 出血事件

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MEF2C介导microRNA-214发挥抑制心肌细胞肥大的作用 被引量：4

5

作者 唐春梅 朱杰宁 +8 位作者 朱文思 林秋雄 胡志琴 符永恒 张梦珍 邓春玉 谭虹虹 吴书林 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1345-1350,共6页

目的:研究微小RNA-214(mi R-214)对心肌细胞肥大的调控作用及其可能的作用靶基因。方法:建立血管紧张素Ⅱ(angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ)诱导的C57BL/6乳小鼠心室肌细胞肥大模型;双萤光素酶报告基因实验检测mi R-214与潜在靶基因MEF2C 3’端... 目的:研究微小RNA-214(mi R-214)对心肌细胞肥大的调控作用及其可能的作用靶基因。方法:建立血管紧张素Ⅱ(angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ)诱导的C57BL/6乳小鼠心室肌细胞肥大模型;双萤光素酶报告基因实验检测mi R-214与潜在靶基因MEF2C 3’端非翻译区(3’UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western blot法分别检测MEF2C及肥厚标志物的m RNA和蛋白表达水平。结果:心肌肥厚标志物ANP、ACTA1和β-MHC,以及mi R-214的表达在Ang-II诱导肥大的小鼠心肌细胞中显著增强;双萤光素酶报告基因实验提示mi R-214与MEF2C 3’UTR相互作用,证实mi R-214可在转录水平抑制MEF2C的表达,MEF2C蛋白水平在肥大的心肌细胞中显著上调;过表达mi R-214及沉默MEF2C均能一致性地抑制Ang-Ⅱ诱导的心肌细胞中肥大标志物的表达。结论:MEF2C是mi R-214的靶基因,并介导了mi R-214发挥抑制心肌细胞肥大的作用。 展开更多

关键词 心肌肥厚 微小RNA-214 MEF2C 心肌细胞

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巨噬细胞移动抑制因子缺失加重苯肾上腺素诱导的小鼠心肌肥厚

6

作者 肖珍 朱杰宁 +6 位作者 唐春梅 林秋雄 胡志琴 张灼 符永恒 张梦珍 单志新 《上海大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期336-343,共8页

研究巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)缺失对皮下注射苯肾上腺素(phenylephrine,PE)诱导的小鼠心肌肥厚的影响.利用MIF敲除(MIFknockout,MIF-KO)小鼠及其野生型对照小鼠,分别建立皮下注射PE诱导的小... 研究巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)缺失对皮下注射苯肾上腺素(phenylephrine,PE)诱导的小鼠心肌肥厚的影响.利用MIF敲除(MIFknockout,MIF-KO)小鼠及其野生型对照小鼠,分别建立皮下注射PE诱导的小鼠心肌肥厚模型.小动物心脏B超检测到小鼠心脏结构功能的改变.末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺节末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase(Td T)-mediated d UTP nick end labeling,TUNEL)法检测到小鼠心肌细胞凋亡.分别用实时定量逆转录多聚酶链反应(quantitative reverse-transcription-polymerase chain reaction,q RT-PCR)和Western Blot方法检测SOD1,SOD2和Trx2的表达.1连续3 d 20 mg/(kg·d)皮下注射PE可诱导小鼠发生心肌肥厚,注射PE诱导MIF-KO小鼠发生心肌肥厚的程度高于野生型对照小鼠;2 TUNEL结果显示,注射PE诱导MIF-KO小鼠心肌发生凋亡的程度高于野生型对照小鼠;3注射PE诱导MIF-KO小鼠心肌中SOD1和Trx2表达水平降低,而且MIF-KO小鼠心肌中Trx2表达水平显著低于野生型对照小鼠.MIF缺失会降低SOD1和Trx2的表达水平,进而加重苯肾上腺素诱导的小鼠心肌细胞凋亡和心肌肥厚. 展开更多

关键词 巨噬细胞移动抑制因子 苯肾上腺素 心肌细胞 心肌肥厚

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代谢综合征大鼠左心室外膜收缩功能不全与心外膜脂肪小窝蛋白-1表达降低平行出现

7

作者 刘福成 刘晓颖 +4 位作者 林曙光 余细勇 符永恒 张梦珍 林秋雄 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第24期4376-4379,共4页

目的:探讨代谢综合征大鼠心脏收缩功能及心外膜脂肪小窝蛋白-1表达的改变。方法:16只6周龄雄性SD大鼠随机分为代谢综合征模型组及对照组。模型大鼠给予小剂量链脲佐菌素、N-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐联合高脂、高盐、高糖饲养6周。实验... 目的:探讨代谢综合征大鼠心脏收缩功能及心外膜脂肪小窝蛋白-1表达的改变。方法:16只6周龄雄性SD大鼠随机分为代谢综合征模型组及对照组。模型大鼠给予小剂量链脲佐菌素、N-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐联合高脂、高盐、高糖饲养6周。实验开始及结束时测定大鼠的体重、空腹血糖、胰岛素、血脂、口服糖耐量及血压水平,超声检测大鼠左心室射血分数及应变指数。实验结束时分离心外膜脂肪检测小窝蛋白-1的表达。结果:6周后,模型大鼠体重[(462±31.6)g比(406±49.4)g]、空腹胰岛素[(5.47±2.26)ng/mL比(2.69±0.61)ng/mL]、口服糖耐量曲线下面积[(1544.6±502.2)mg/(L.min)比(911.0±69.8)mg/(L.min)]、甘油三酯[(0.66±0.44)mmol/L比(0.28±0.07)mmol/L]、总胆固醇[(1.71±0.43)mmol/L比(1.01±0.29)mmol/L]及低密度脂蛋白水平[(0.66±0.25)mmol/L比(0.22±0.08)mmol/L]、收缩压[(163.0±26.0)mmHg比(117.5±11.5)mmHg]及舒张压[(121.8±15.5)mmHg比(90.5±16.6)mmHg]均高于对照组(P<0.05),而空腹血糖及高密度脂蛋白水平与对照组比较无明显差异(P>0.05)。左心室外膜收缩期周向应变及应变率均低于对照组[(-7.20±1.46)%比(-9.87±1.93)%],[(-1.56±0.35)1/s比(-2.19±0.49)1/s;均P<0.05]。模型大鼠心外膜脂肪小窝蛋白-1的表达明显低于对照组。结论:代谢综合征大鼠左心室外膜收缩功能不全与心外膜脂肪小窝蛋白-1表达降低平行出现。 展开更多

关键词 代谢综合征X 应变 心外膜脂肪 大鼠 小窝蛋白-1

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沙库巴曲缬沙坦通过逆转高血压大鼠心房结构重塑降低房颤易感性 被引量：13

8

作者 李倩 李昕 +8 位作者 李路安 周慧珊 彭德威 张梦珍 王钊煜 邝素娟 邓春玉 饶芳 吴书林 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期631-637,共7页

目的观察沙库巴曲缬沙坦(sacubitril/valsartan,Sac/Val,LCZ696)对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)心房结构重构及房颤(atrial fibrillation,AF)易感性的影响。方法24只7周龄,♂,SHR随机均分为SHR组,SHR+Val组(3... 目的观察沙库巴曲缬沙坦(sacubitril/valsartan,Sac/Val,LCZ696)对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)心房结构重构及房颤(atrial fibrillation,AF)易感性的影响。方法24只7周龄,♂,SHR随机均分为SHR组,SHR+Val组(30 mg·kg^(-1)·d^(-1))和SHR+Sac/Val组(60 mg·kg^(-1)·d^(-1)),分别给予缬沙坦和沙库巴曲缬沙坦治疗,8只Wistar大鼠作对照组。快速起搏心房观察不同药物处理组SHR电生理指标及AF的可诱发性。Western blot检测肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)和纤维化相关蛋白的表达。结果与Wistar大鼠相比,SHR组AF诱发率明显增加(P<0.05);左房组织中ACE-1、angiotensin蛋白表达明显上调(P<0.05),ACE2下调(P<0.05);Col1A1、Col3A1、TGF-β、MMP-9均明显上调(P<0.05)。缬沙坦和Sac/Val治疗后均可明显逆转上述检测指标,且以SHR+Sac/Val组改善效果更明显(P<0.05)。结论缬沙坦和沙库巴曲缬沙坦均可通过抑制RAS改善SHR左心房纤维化,降低房颤易感性,且沙库巴曲缬沙坦效果优于缬沙坦,有望成为新的房颤治疗药物。 展开更多

关键词 沙库巴曲缬沙坦 房颤 纤维化 肾素-血管紧张素系统 自发性高血压大鼠 缬沙坦

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2型糖尿病大鼠心功能变化及RAGE表达增强和钙调控异常 被引量：14

9

作者 练飞鸿 饶芳 +9 位作者 邝素娟 陈肖燕 杨慧 吴飞龙 张梦珍 麦丽萍 林秋雄 单志新 杨敏 邓春玉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期488-493,共6页

目的:通过自发性2型糖尿病大鼠观察糖尿病状态下大鼠的心脏结构和功能变化,同时探讨糖尿病心肌病的发病机制。方法:用Zucker糖尿病肥胖(Zucker diabetic fatty,ZDF)大鼠建立糖尿病模型,Zucker lean(ZL)大鼠为对照组。利用超声多普勒法检... 目的:通过自发性2型糖尿病大鼠观察糖尿病状态下大鼠的心脏结构和功能变化,同时探讨糖尿病心肌病的发病机制。方法:用Zucker糖尿病肥胖(Zucker diabetic fatty,ZDF)大鼠建立糖尿病模型,Zucker lean(ZL)大鼠为对照组。利用超声多普勒法检测ZDF大鼠心脏结构和功能的改变;麦胚凝集素染色计算单个心脏细胞面积;Western blot检测心肌细胞肥大标志物β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)和心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP),以及晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)、L型钙通道蛋白α1C亚基(L-type calcium channelα1C subunit,CaV1.2)和钙库操纵性钙通道相关功能蛋白Orai1的表达水平。结果:与ZL大鼠相比,ZDF大鼠的血糖和体重明显增加,左心室壁增厚,心脏舒张功能明显减弱,收缩功能轻度增强;ZDF大鼠左室心肌细胞表面积明显增大,心肌细胞肥大相关蛋白β-MHC和ANP的表达水平也明显增加;ZDF大鼠心肌组织中的RAGE和Orai1蛋白表达增高,CaV1.2蛋白表达下降(P<0.05)。结论:2型糖尿病大鼠心肌细胞肥大,心室肥厚,心功能代偿性增强,其机制可能与RAGE表达增强和钙调控异常有关。 展开更多

关键词 2型糖尿病 糖尿病心肌病 钙调控 Zucker糖尿病肥胖大鼠 晚期糖基化终产物受体

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Drp1在高糖诱导的大鼠心肌细胞肥大中的作用研究 被引量：5

10

作者 吴清蕊 练飞鸿 +9 位作者 饶芳 邝素娟 杨慧 吴飞龙 张梦珍 麦丽萍 林秋雄 单志新 杨敏 邓春玉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期47-52,共6页

目的:探讨发动蛋白相关蛋白1(Drp1)在高糖诱导的心肌细胞肥大模型中的表达及其作用机制。方法:原代乳大鼠心肌细胞培养,用高糖诱导建立心肌细胞损伤模型,将细胞分为对照组、高渗透压组、DMSO组、高糖组和高糖+线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1... 目的:探讨发动蛋白相关蛋白1(Drp1)在高糖诱导的心肌细胞肥大模型中的表达及其作用机制。方法:原代乳大鼠心肌细胞培养,用高糖诱导建立心肌细胞损伤模型,将细胞分为对照组、高渗透压组、DMSO组、高糖组和高糖+线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1)组。用麦胚凝集素荧光染色检测单个心肌细胞表面积;用线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒(JC-1)检测心肌细胞MMP水平;Western blot检测心肌细胞肥大标志物心房钠尿肽(ANP)及Drp1和Drp1在Ser616/Ser637位点的磷酸化蛋白[p-Drp1(Ser616/Ser637)]的蛋白水平。结果:与对照组相比,高渗透压组各检测结果均无显著差异(P>0.05)。与对照组和高渗透压组相比,高糖组心肌细胞的表面积均显著增大(P<0.01),MMP显著降低(P<0.01),而Drp1总蛋白表达无显著变化(P>0.05);心肌细胞ANP表达显著增加(P<0.01),p-Drp1(Ser616)水平显著升高(P<0.05),而p-Drp1(Ser637)水平显著降低(P<0.05)。与高糖组相比,高糖+Mdivi-1组ANP和p-Drp1(Ser616)蛋白水平显著降低(P<0.05),而p-Drp1(Ser637)的水平显著升高(P<0.05)。结论:高糖诱导心肌细胞肥大的机制,与Drp1在Ser616位点磷酸化水平升高、Ser637位点磷酸化水平降低导致的线粒体分裂增加有关。 展开更多

关键词 糖尿病心肌病 发动蛋白相关蛋白1 线粒体分裂 心房钠尿肽

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miR-199a-3p靶向Smad1促进小鼠心肌纤维化相关基因的表达 被引量：3

11

作者 梁景南 朱文思 +6 位作者 张灼 朱杰宁 符永恒 林秋雄 邝素娟 张梦珍 单志新 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1203-1208,共6页

目的探讨微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)对心肌纤维化的调控作用及其作用靶基因。方法原代分离并体外培养成体C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞;脂质体转染法将miR-199a-3p模拟物和Smad1 siRNA瞬时转染至小鼠心肌成纤维细胞;双荧光素酶报告基... 目的探讨微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)对心肌纤维化的调控作用及其作用靶基因。方法原代分离并体外培养成体C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞;脂质体转染法将miR-199a-3p模拟物和Smad1 siRNA瞬时转染至小鼠心肌成纤维细胞;双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a-3p与潜在靶基因Smad1 3'端非翻译区(3'-UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法分别检测小鼠心肌成纤维细胞转染miR-199a-3p后,Smad1及纤维化相关基因表达。Western blot检测转染miR-199a-3p,Smad1 siRNA后,小鼠心肌成纤维细胞中纤维化相关基因、Smad1和Smad3的激活水平。结果 RT-qPCR和Western blot结果证实在心肌成纤维细胞中过表达miR-199a-3p可以增强纤维化相关基因表达。双荧光素酶报告基因实验显示miR-199a-3p与Smad1 3'-UTR有结合作用。RT-qPCR和Western blot结果证实miR-199a-3p可在转录水平抑制Smad1表达。过表达miR-199a-3p和沉默Smad1均能一致性的通过激活Smad3通路而促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达。结论miR-199a-3p通过靶向Smad1,从而激活Smad3通路来促进纤维化相关基因表达。 展开更多

关键词 心肌纤维化 心肌成纤维细胞 微小RNA SMAD1

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miR-199a-3p靶向视网膜母细胞瘤转录辅阻遏子1促进心肌细胞肥大 被引量：3

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作者 杨静 胡志琴 +6 位作者 朱杰宁 李晖 符永恒 袁淑菁 潘蓉 张梦珍 单志新 《中山大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期23-30,共8页

【目的】探讨微小RNA microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)对心肌细胞肥大的调控作用及其作用靶基因。【方法】原代分离培养C57BL/6乳小鼠心肌细胞(NMVC),转染miR-199a-3p模拟物(mimic)和视网膜母细胞瘤转录辅阻遏子1(Rb-1)siRNA分别来增加N... 【目的】探讨微小RNA microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)对心肌细胞肥大的调控作用及其作用靶基因。【方法】原代分离培养C57BL/6乳小鼠心肌细胞(NMVC),转染miR-199a-3p模拟物(mimic)和视网膜母细胞瘤转录辅阻遏子1(Rb-1)siRNA分别来增加NMVC中miR-199a-3p和抑制Rb-1的水平。双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a-3p与潜在靶基因Rb-1 3′端非翻译区(3′-UTR)的结合作用。FITC-鬼笔环肽染色检测乳小鼠心肌细胞表面积。RT-qPCR和Western blot检测miR-199a-3p,Rb-1和心肌细胞肥大相关基因的表达。【结果】①过表达miR-199a-3p可明显增加NMVC中的肥厚相关基因Nppa,Acta1,Myh7表达;②双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-199a-3p与Rb-1 3′UTR具有特异结合作用;miR-199a-3p可在转录后水平抑制Rb-1的表达;③过表达miR-199a-3p或抑制Rb-1表达均能一致性地增加心肌细胞表面积和心肌细胞肥大相关基因表达,并促进E2f2进入NMVC细胞核。【结论】miR-199a-3p通过抑制Rb-1表达,促进了E2f2进入细胞核来发挥促进NMVC肥大的作用。 展开更多

关键词 心肌肥厚 微小RNA microRNA-199a-3p 视网膜母细胞瘤转录辅阻遏子1

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miR-92b-3p靶向肌细胞增强子2D抑制心肌细胞肥大 被引量：3

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作者 胡志琴 朱杰宁 +5 位作者 杨静 林秋雄 符永恒 张梦珍 吴书林 单志新 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期820-826,877,共8页

【目的】探讨微小RNAmicroRNA-92b-3p(mi R-92b-3p)对心肌细胞肥大的调控作用及其作用靶基因。【方法】建立血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导的C57BL/6小鼠心肌肥厚模型。通过尾静脉注射胆固醇修饰的mi R-92b-3p模拟物(agomi R-92b-3p)来增加... 【目的】探讨微小RNAmicroRNA-92b-3p(mi R-92b-3p)对心肌细胞肥大的调控作用及其作用靶基因。【方法】建立血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导的C57BL/6小鼠心肌肥厚模型。通过尾静脉注射胆固醇修饰的mi R-92b-3p模拟物(agomi R-92b-3p)来增加小鼠心肌中mi R-92b-3p水平,分别设立3个实验组:agomi R-negative control(agomi R-NC)+saline组,agomi RNC+Ang-Ⅱ组,agomi R-92b-3p+Ang-Ⅱ组。用Ang-Ⅱ诱导乳小鼠心肌细胞建立心肌细胞肥大模型;双荧光素酶报告基因实验检测mi R-92b-3p与潜在靶基因MEF2D 3'端非翻译区(3'-UTR)的结合作用;蛋白印迹法检测MEF2D及肥厚相关蛋白的表达。【结果】(1)Ang-II诱导的小鼠肥厚心肌和肥大心肌细胞分别与对照组中心肌肥厚相关基因ANP、ACTA1和β-MHC水平比较,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)双荧光素酶报告基因实验结果提示mi R-92b-3p与MEF2D 3′UTR具有相互结合作用;mi R-92b-3p可在转录后水平抑制MEF2D的表达;升高mi R-92b-3p或降低MEF2D水平能一致性地抑制Ang-II诱导的乳小鼠心肌细胞肥大表型。【结论】MEF2D是mi R-92b-3p的靶基因,并介导了mi R-92b-3p发挥抑制心肌细胞肥大的作用。 展开更多

关键词 心肌肥厚 microRNA-92b-3p MEF2D

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机械敏感离子通道Piezo1通过激活β-catenin诱导心房成纤维细胞衰老

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作者 叶兴东 罗雪珊 +9 位作者 李巧巧 何锦涛 徐玉雯 杨慧 邓春玉 邝素娟 张梦珍 吴书林 饶芳 薛玉梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1234-1241,共8页

目的 衰老心房成纤维细胞中新型机械敏感离子通道Piezo1的基因表达明显升高,观察其是否通过激活β-catenin参与心房成纤维细胞的衰老进程。方法 通过酶消化法分离培养3~4周龄雄性C57BL/6小鼠原代心房成纤维细胞,给予叔丁基过氧化氢(TBHP... 目的 衰老心房成纤维细胞中新型机械敏感离子通道Piezo1的基因表达明显升高,观察其是否通过激活β-catenin参与心房成纤维细胞的衰老进程。方法 通过酶消化法分离培养3~4周龄雄性C57BL/6小鼠原代心房成纤维细胞,给予叔丁基过氧化氢(TBHP)刺激建立衰老模型,检测衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)活性。Western blot检测TBHP(100μmol·L^(-1))处理的细胞中Piezo1、β-catenin/p-β-catenin及衰老相关蛋白p53和p21的表达水平。衰老的小鼠心房成纤维细胞(MAFs)分别给予Piezo1通道抑制剂GsMTx4(3、10μmol·L^(-1))或Piezo1 siRNA,以及β-catenin抑制剂XAV939(3、10μmol·L^(-1));年轻的MAFs给予Piezo1特异性激动剂Yoda1(1、10μmol·L^(-1)),观察对细胞中β-catenin和衰老相关蛋白表达和活性的影响。结果 TBHP处理后,MAFs的SA-β-Gal染色阳性率明显增加,提示细胞发生衰老;且细胞中Piezo1、β-catenin/p-β-catenin和p53/p21的蛋白表达明显增加(P<0.05)。分别抑制Piezo1(GsMTx4/Piezo1 siRNA)或β-catenin(XAV939),可明显降低TBHP诱导的MAFs衰老率,以及减少β-catenin/p-β-catenin,p53/p21等蛋白表达和活性的增加(P<0.05)。而Yoda1可促进年轻细胞衰老,且β-catenin活性和衰老相关蛋白表达升高(P<0.05)。结论 机械敏感离子通道Piezo1通过激活β-catenin诱导心房成纤维细胞衰老的病理过程。 展开更多

关键词 Piezo1 Β-CATENIN 心房成纤维细胞 衰老 心房颤动 结构重构

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L-型钙通道参与大鼠动脉收缩反应的异质性 被引量：4

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作者 刘林 邝素娟 +7 位作者 杨慧 饶芳 张梦珍 麦丽萍 林秋雄 单志新 杨敏 邓春玉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期563-569,共7页

目的研究不同动脉对同一血管收缩剂的反应性是否存在差异,及其与L-型钙通道的关系。方法采用离体血管张力测定实验方法,测定在累积浓度血管收缩剂处理下的大鼠胸主动脉、肾内动脉或冠状动脉的张力变化以及L-型钙通道阻断剂硝苯地平(nife... 目的研究不同动脉对同一血管收缩剂的反应性是否存在差异,及其与L-型钙通道的关系。方法采用离体血管张力测定实验方法,测定在累积浓度血管收缩剂处理下的大鼠胸主动脉、肾内动脉或冠状动脉的张力变化以及L-型钙通道阻断剂硝苯地平(nifedipine)的影响。结果苯肾上腺素(phenylephrine,Phe)对冠状动脉无明显影响,但可诱导胸主动脉和肾内动脉产生明显的浓度依赖性收缩,胸主动脉的pEC_(50)明显大于肾内动脉(P<0.05);给予硝苯地平孵育后,再给予累积浓度的Phe,胸主动脉收缩的下降幅度大于肾内动脉(P<0.05)。5-羟色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)对胸主动脉的收缩作用不明显,但可浓度依赖性诱导肾内动脉和冠状动脉收缩;给予硝苯地平孵育后,再给予累积浓度的5-HT,冠状动脉收缩的下降幅度明显大于肾内动脉(P<0.05)。胸主动脉、肾内动脉和冠状动脉均对血栓素A2类似物(9,11-dideoxy-11α,9α-epoxymethanoprostaglandin,U46619)产生浓度依赖性收缩,肾内动脉收缩量效曲线的E_(max)最小(P<0.05),胸主动脉收缩量效曲线pEC_(50)最大(P<0.05)。给予硝苯地平孵育后,再给予累积浓度的U46619,冠状动脉收缩的下降幅度最大,胸主动脉收缩的下降幅度最小。结论大鼠胸主动脉、肾内动脉及冠状动脉对同一血管收缩剂的反应存在异质性,其中L-型钙通道介导的收缩作用也不同。 展开更多

关键词 动脉异质性 L-型钙通道 血管收缩剂 血管张力 胸主动脉 肾内动脉 冠状动脉

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