致病疫霉菌与多种病毒复合侵染马铃薯叶片的细胞病理研究

1

作者 廖珍凤 吕明芳 +3 位作者 王甄 宋西娇 沈梦梦 张恒木 《电子显微学报》 北大核心 2025年第3期307-316,共10页

近年来,湖北省恩施州天池山种植基地频繁发生一种马铃薯病害,其典型症状为叶片褪绿、黄化,严重的枯败坏死。为鉴定其病原,本研究采用显微镜观察表明其由卵菌和线状病毒复合侵染所致,RT-PCR检测显示其病原菌为马铃薯晚疫病(PLB)致病疫霉... 近年来,湖北省恩施州天池山种植基地频繁发生一种马铃薯病害,其典型症状为叶片褪绿、黄化,严重的枯败坏死。为鉴定其病原,本研究采用显微镜观察表明其由卵菌和线状病毒复合侵染所致,RT-PCR检测显示其病原菌为马铃薯晚疫病(PLB)致病疫霉菌,病毒为马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)和马铃薯M病毒(PVM)。病理学观察显示马铃薯病叶和茎表面被疫霉菌丝覆盖,在孢囊梗上有分生孢子着生;菌丝通过气孔和表皮细胞侵入叶肉细胞和细胞间隙的现象尤为明显;菌丝与细胞壁接触处形成高电子密度沉积物,局部出现坏死,产生大量囊泡,叶绿体包膜消解,基质外流;马铃薯病株汁液负染后可观察到长600~900 nm,直径10~15 nm的线状病毒粒子;并在叶肉细胞细胞质中观察到大量分散的线状病毒粒子、成束状的病毒粒子以及风轮状内含体等病毒相关的特征性结构,进一步支持该病害由卵菌和病毒复合侵染所致,为深入理解马铃薯病毒与卵菌互作提供基础。 展开更多

关键词 马铃薯晚疫病 疫霉菌 线状病毒 马铃薯病毒 复合侵染

在线阅读 下载PDF 职称材料

中国小麦花叶病毒(CWMV)外壳蛋白(CP)特异性抗体的制备与应用

2

作者 沈峥嵘 戴远兴 +2 位作者 郭留明 汪芷瑶 张恒木 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第9期2042-2050,共9页

中国小麦花叶病毒(CWMV)是浙江省农业科学院发现并鉴定的一种土传病毒,其RNA2编码的外壳蛋白(CP)在病毒侵染过程中发挥重要功能。为了检测该蛋白表达并分析其生物学功能,该研究采用RT-PCR方法从感染CWMV小麦病叶中扩增获得CP基因,并通过... 中国小麦花叶病毒(CWMV)是浙江省农业科学院发现并鉴定的一种土传病毒,其RNA2编码的外壳蛋白(CP)在病毒侵染过程中发挥重要功能。为了检测该蛋白表达并分析其生物学功能,该研究采用RT-PCR方法从感染CWMV小麦病叶中扩增获得CP基因,并通过In-Fusion技术构建了CWMV CP重组表达载体,将其导入BL21(DE3)菌株诱导表达;原核表达的重组CP蛋白经镍柱亲和层析纯化后注射免疫家兔,收集抗血清经亲和层析纯化获得CP多克隆抗体。Dot-ELISA、ID-ELISA、Western blot显示,该抗体不仅对CWMV具有高度的特异性,而且其效价高达1∶2.048×10^(7)、灵敏度达6.25×10^(-2)ng。应用该抗体采用Dot-ELISA、Western blot方法检测田间小麦样品显示其可用于CWMV的准确诊断,这为CWMV病毒病检测、CP定量分析及其功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 中国小麦花叶病毒 外壳蛋白 重组蛋白 多克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

烟草抗烟草花叶病毒基因N的研究 被引量：10

3

作者 张恒木 陈剑平 程晔 《浙江农业学报》 CSCD 2001年第2期55-60,共6页

烟草的N基因是一个较为理想的抗烟草花叶病毒 )tobaccomosaicvirus,TMV)基因 ,它和TMV之间的互作是植物和病毒互作领域里一个经典的系统。烟草N基因已经分离 ,TMV基因组结构和功能已经研究得很清楚 ,这为进一步研究两者的互作奠定了基... 烟草的N基因是一个较为理想的抗烟草花叶病毒 )tobaccomosaicvirus,TMV)基因 ,它和TMV之间的互作是植物和病毒互作领域里一个经典的系统。烟草N基因已经分离 ,TMV基因组结构和功能已经研究得很清楚 ,这为进一步研究两者的互作奠定了基础。本文介绍了这一领域取得的最新进展和存在的问题。 展开更多

关键词 N基因 烟草 烟草花叶病毒 抗性基因 结构 基因表达 互作 抗病反应 信号传导

在线阅读 下载PDF 职称材料

水稻条纹叶枯病空间分布格局及抽样技术 被引量：9

4

作者 王华弟 孙国昌 +5 位作者 张恒木 朱黎明 蒋学辉 朱晓群 王金良 戴德江 《浙江农业学报》 CSCD 2007年第5期360-363,共4页

采用扩散型指标法和Iwao回归法测定了水稻条纹叶枯病株的空间分布型。结果表明:水稻条纹叶枯病病株田间分布趋于聚集分布,其聚集原因主要是由灰飞虱传毒扩散、病菌本身生物学特性和环境因素引起的。根据空间分布型的参数,建立了理论抽... 采用扩散型指标法和Iwao回归法测定了水稻条纹叶枯病株的空间分布型。结果表明:水稻条纹叶枯病病株田间分布趋于聚集分布,其聚集原因主要是由灰飞虱传毒扩散、病菌本身生物学特性和环境因素引起的。根据空间分布型的参数,建立了理论抽样数模型n2=180.37/-X+19.57和序贯抽样模型TO′(n)=0.3n±0.7615n,确定了最适抽样数和序贯抽样表,提高了调查抽样的效率。 展开更多

关键词 水稻 水稻条纹叶枯病 空间分布格局 抽样技术

在线阅读 下载PDF 职称材料

外源水杨酸对水稻苗期生长与防卫相关基因表达的影响 被引量：3

5

作者 刘寒 戴远兴 +4 位作者 吕明芳 袁正杰 李静 严成其 张恒木 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第10期1789-1796,共8页

为探究外源水杨酸(SA)对水稻苗期生长与SA相关防卫反应的影响,用不同浓度外源SA喷施苗期日本晴水稻,利用分光光度计测定水稻苗期生长关键指标叶绿素含量,采用qRT-PCR定量分析外源SA对水稻苗期SA合成基因PAL1、SA受体基因NPR1、SA信号途... 为探究外源水杨酸(SA)对水稻苗期生长与SA相关防卫反应的影响,用不同浓度外源SA喷施苗期日本晴水稻,利用分光光度计测定水稻苗期生长关键指标叶绿素含量,采用qRT-PCR定量分析外源SA对水稻苗期SA合成基因PAL1、SA受体基因NPR1、SA信号途径下游的转录因子WRKY45/WRKY76和防卫基因PR1a/PR1b的表达水平。结果表明,外源SA对上述水稻基因的影响不同,即低浓度SA在一定程度上促进水稻苗期叶绿素积累,并显著影响水稻苗期防卫相关基因的表达水平;高浓度SA抑制叶绿素的积累,影响水稻的正常生长。综合比较结果显示,喷施2.0 mmol·L-1外源SA对水稻苗期防卫相关基因表达的影响最为有效,该结果为进一步探索外源SA促进水稻苗期生长并提高水稻苗期防卫能力的作用研究奠定基础。 展开更多

关键词 水稻 水杨酸 防卫相关基因 叶绿素

在线阅读 下载PDF 职称材料

白背飞虱酵母双杂交cDNA文库的构建 被引量：2

6

作者 薛进 李静 +4 位作者 羊健 唐彦 梁瑶 陈剑平 张恒木 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期2060-2067,共8页

白背飞虱(Sogatella furcifera Horváth)作为一种迁飞性害虫,不仅自身危害水稻,而且以持久性方式传播南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)。为了研究白背飞虱与SRBSDV之间的相互作用,需要构建... 白背飞虱(Sogatella furcifera Horváth)作为一种迁飞性害虫,不仅自身危害水稻,而且以持久性方式传播南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)。为了研究白背飞虱与SRBSDV之间的相互作用,需要构建一个高质量的酵母筛选文库,试验利用Gateway技术构建了白背飞虱cDNA酵母表达文库,检测分析显示,白背飞虱初级文库库容量约为1.72×10~7CFU,cDNA插入片段主要分布在500~2 000 bp,重组率约为95.8%;次级文库库容量约为1.73×10~7CFU,cDNA插入片段主要分布在400~2 000bp,重组率为100%;Y187酵母菌株的白背飞虱酵母双杂交cDNA文库库容量约5.09×10~7CFU,插入片段大小在750~2 000 bp,重组率100%,再随机挑选36个单克隆进行测序分析,所得结果与Gen Bank数据库比对显示36个克隆中含有22个不同的基因,长度在750~2 000 bp,这些分析表明,该文库可以用于酵母双杂交的后续筛选,为研究白背飞虱与SRBSDV之间的互作奠定了基础。 展开更多

关键词 白背飞虱 南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV) GATEWAY技术 酵母双杂交 CDNA文库

在线阅读 下载PDF 职称材料

中国小麦花叶病毒(CWMV)侵染条件下小麦内参基因的选择 被引量：4

7

作者 吴讷 陈炫 +5 位作者 姜瑶瑶 张天烨 羊健 朱统泉 张恒木 陈剑平 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期1182-1187,共6页

实时定量PCR(qRT-PCR)是分析功能基因表达水平的常用方法之一,qRT-PCR数据统计分析离不开合适内参基因的选择。为了选择中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)侵染条件下的小麦内参基因,本实验通过PCR扩增效率和扩增特异... 实时定量PCR(qRT-PCR)是分析功能基因表达水平的常用方法之一,qRT-PCR数据统计分析离不开合适内参基因的选择。为了选择中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)侵染条件下的小麦内参基因,本实验通过PCR扩增效率和扩增特异性分析,从10个持家基因中选择8个候选基因,然后以接种CWMV的小麦样品为材料,利用qRT-PCR技术进一步检测上述8个基因在CWMV侵染条件下小麦样品中的时空表达特性。基于这些数据,通过ge Norm、Norm Finder程序分析,结果表明,2个小麦基因(即26S和CDC)在CWMV侵染前后以及不同组织中表达最为稳定,26S和CDC组合可选作CWMV与小麦互作过程中功能基因表达分析的内参基因。 展开更多

关键词 内参基因 小麦 中国小麦花叶病毒 QRT-PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

提高转基因植物安全性的策略 被引量：3

8

作者 应丹平 张恒木 +1 位作者 陈剑平 曹明富 《浙江农业学报》 CSCD 2007年第2期130-134,共5页

随着转基因植物商业化,转基因植物的安全性,尤其是转基因植物中的抗性标记基因,受到了越来越多的关注,因为人们担心这些抗性标记基因能够潜在地流向杂草、微生物或相关的植物并产生超级杂草、超级微生物或使一些相关的植物产生意外的性... 随着转基因植物商业化,转基因植物的安全性,尤其是转基因植物中的抗性标记基因,受到了越来越多的关注,因为人们担心这些抗性标记基因能够潜在地流向杂草、微生物或相关的植物并产生超级杂草、超级微生物或使一些相关的植物产生意外的性状,从而引发食品或生态安全问题。尽管这些担忧尚未有明确的科学根据,但培育无抗性标记基因的工程植株或使用安全性标记基因无疑会提高转基因植物的生物安全性,并有助于公众对转基因植物的认同和接受。为此,近年来已发展了多种提高植物转基因安全性的策略,该文即对这几种策略进行了综述和评价。 展开更多

关键词 转基因植物 无标记基因 生物安全性

在线阅读 下载PDF 职称材料

一个植物半胱氨酸蛋白酶多克隆抗体的制备及其应用 被引量：1

9

作者 彭琪琪 羊健 +1 位作者 廖乾生 张恒木 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期881-885,共5页

半胱氨酸蛋白酶(cysteine proteinase,Cys P)是一类重要的蛋白酶家族,广泛参与植物多种生理过程。为了分析植物Cys P的特性,本实验首先通过RT-PCR技术从本氏烟中扩增获得了一个编码Cys P的基因(NbCys P)序列并连接至p EASYTM-T5 Zero载... 半胱氨酸蛋白酶(cysteine proteinase,Cys P)是一类重要的蛋白酶家族,广泛参与植物多种生理过程。为了分析植物Cys P的特性,本实验首先通过RT-PCR技术从本氏烟中扩增获得了一个编码Cys P的基因(NbCys P)序列并连接至p EASYTM-T5 Zero载体,测序验证后亚克隆至原核表达载体p GEX-6P1,命名为p GEXNb Cys P;将其导入大肠埃希菌BL21plys S中诱导表达;重组表达的Nb Cys P融合蛋白经过亲和层析纯化,免疫兔子制备多克隆抗体,Western印迹分析显示,该抗体能和重组Nb Cys P蛋白发生强烈的免疫学反应且条带单一,表明所获得的Cys P抗体具有良好的特异性。上述结果为进一步鉴定植物Cys P的功能特性奠定了基础。 展开更多

关键词 半胱氨酸蛋白酶 原核表达 多克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

小麦TaeEF1β基因的克隆、同源性及表达分析 被引量：1

10

作者 陈炫 张天烨 +2 位作者 羊健 张恒木 陈剑平 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期98-103,共6页

真核翻译延伸因子(eukaryotic translation elongation factor,e EFs)是一种重要的多功能调控蛋白,eEF1β是eEF1的组成部分,在蛋白质生物合成过程中发挥着重要的作用。本文通过RT-PCR扩增克隆小麦(Triticum aestivum L.)的e EF1β基因,... 真核翻译延伸因子(eukaryotic translation elongation factor,e EFs)是一种重要的多功能调控蛋白,eEF1β是eEF1的组成部分,在蛋白质生物合成过程中发挥着重要的作用。本文通过RT-PCR扩增克隆小麦(Triticum aestivum L.)的e EF1β基因,并命名为TaeEF1β。氨基酸同源性分析发现,TaeEF1β具有高度保守性,且其保守结构域位于137～226 aa处。q RT-PCR结果表明,中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)侵染小麦植株后,可以诱导TaeEF1β基因转录水平的上调表达。另外,本文也进一步分析了TaeEF1β基因在小麦根、茎、叶的表达水平和CWMV侵染不同时间点的表达情况。 展开更多

关键词 真核翻译延伸因子 中国小麦花叶病毒 同源性分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

免疫胶体金标记法研究筛管特异质体中微丝来源的细胞骨架成分 被引量：1

11

作者 宋西娇 廖珍凤 +2 位作者 谢礼 张恒木 洪健 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期376-380,共5页

叶绿体等细胞器在细胞内的位置维持和运动受细胞骨架的调控。筛管特异质体是筛管细胞内的特征性细胞器,其发生与叶绿体同源。研究利用免疫胶体金标记法结合商品化的微丝蛋白抗体,发现微丝蛋白actin和myosin除了能被标记到叶绿体上,还能... 叶绿体等细胞器在细胞内的位置维持和运动受细胞骨架的调控。筛管特异质体是筛管细胞内的特征性细胞器,其发生与叶绿体同源。研究利用免疫胶体金标记法结合商品化的微丝蛋白抗体,发现微丝蛋白actin和myosin除了能被标记到叶绿体上,还能被标记到筛管特异质体上。该结果暗示了微丝蛋白可能也参与了筛管特异质体在筛管细胞中的位置维持和运动,为细胞器运动的研究提供了新线索。 展开更多

关键词 筛管特异质体 微丝 蛋白成分 免疫胶体金标记法

在线阅读 下载PDF 职称材料

中国小麦花叶病毒富含半胱氨酸蛋白多克隆抗体的制备与应用

12

作者 戴远兴 郭留明 +6 位作者 何婧 沈峥嵘 耿艳飞 吕明芳 袁正杰 李静 张恒木 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期677-686,共10页

中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是小麦花叶病的重要病原体之一,长期威胁小麦的产量和品质;CWMV富含半胱氨酸蛋白(cysteine-rich protein,CRP)在病毒侵染过程中具有重要而复杂的功能。为了深入研究CRP的功能和CWMV... 中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是小麦花叶病的重要病原体之一,长期威胁小麦的产量和品质;CWMV富含半胱氨酸蛋白(cysteine-rich protein,CRP)在病毒侵染过程中具有重要而复杂的功能。为了深入研究CRP的功能和CWMV侵染机制,本研究采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)从CWMV侵染的小麦叶片中获得CRP基因编码区,将其克隆至原核表达载体pET-32a上,并将重组质粒pET-CRP转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达;通过镍柱亲和层析法纯化CRP重组蛋白,并用作抗原免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体。蛋白质印迹法、间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和斑点ELISA分析结果显示:纯化的CRP抗体不仅具有高度的特异性,而且效价高达1∶4096000,是未纯化抗体效价的4倍;该抗体能识别0.5 ng抗原,显示出较高的灵敏度;在1∶120000稀释条件下,该抗体能特异且灵敏地识别天然CRP。综上所述,本研究所制备的CRP抗体不但可用于田间CWMV病株样品的精准诊断,还可用于植物体内瞬时表达CRP的检测分析,为后续CRP检测、定量分析及其亚细胞定位等研究提供了依据。 展开更多

关键词 中国小麦花叶病毒 富含半胱氨酸蛋白 原核表达 蛋白质纯化 多克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

一个植物原纤维蛋白基因的克隆及其表达特性分析

13

作者 姜瑶瑶 李静 +2 位作者 蔡年俊 陈剑平 张恒木 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第9期1399-1404,共6页

植物原纤维蛋白(fibrillin, FBN)作为一大类保守的蛋白,广泛分布于植物界,但其在本氏烟( Nicotiana benthamiana )中的生物学特性和功能迄今尚不清楚。为了分析其表达特性和功能,采用RT-PCR技术从本氏烟中扩增并克隆了1个 FBN 基因( NbF... 植物原纤维蛋白(fibrillin, FBN)作为一大类保守的蛋白,广泛分布于植物界,但其在本氏烟( Nicotiana benthamiana )中的生物学特性和功能迄今尚不清楚。为了分析其表达特性和功能,采用RT-PCR技术从本氏烟中扩增并克隆了1个 FBN 基因( NbFBN )。进化树分析显示, NbFBN 和拟南芥 FBN1a 、 FBN1b 的亲缘关系较近;同源分析表明,它与不同植物来源的 FBN 基因高度同源,其C-端部分尤为保守。定量分析发现, NbPAP 在叶片和花中的表达水平较高,同时发现该基因受到干旱胁迫和激素ABA的诱导,表明该基因可能参与非生物逆境响应过程。 展开更多

关键词 植物原纤维蛋白 同源性分析 定量PCR 非生物逆境

在线阅读 下载PDF 职称材料