顶复门原虫钙依赖蛋白激酶的研究进展 被引量：5

1

作者 张念章 陈佳 +2 位作者 王萌 朱兴全 黄思扬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-6,共6页

钙依赖蛋白激酶(Calcium-dependent protein kinases,CDPKs)是一类大的蛋白激酶家族,属于丝氨酸/苏氨酸类蛋白激酶,广泛存在于各种植物和原生动物中,参与多种生命活动的调控。随着生物信息学、分子生物学及基因工程的迅速发展,对顶复门... 钙依赖蛋白激酶(Calcium-dependent protein kinases,CDPKs)是一类大的蛋白激酶家族,属于丝氨酸/苏氨酸类蛋白激酶,广泛存在于各种植物和原生动物中,参与多种生命活动的调控。随着生物信息学、分子生物学及基因工程的迅速发展,对顶复门原虫CDPKs的研究日益增多。研究结果表明,这类蛋白家族成员参与调控寄生虫入侵、外出宿主细胞、配子形成、宿主体内移行等顶复门原虫生活史的多个重要时期,其特殊的分子结构或可成为研究抗寄生虫疫苗或药物的候选靶标。本文以疟原虫、弓形虫和艾美耳球虫CDPKs为重点,综述了顶复门原虫CD-PKs的结构、功能及生物学意义,展望了顶复门原虫CDPKs的研究和应用前景,以期为研究顶复门原虫的致病机理及研发抗原虫生物制剂提供参考。 展开更多

关键词 顶复门原虫 钙依赖蛋白激酶 致病抗理

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梅迪-维斯纳病毒研究进展 被引量：1

2

作者 张念章 储岳峰 +3 位作者 赵萍 高鹏程 贺英 逯忠新 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第3期104-107,共4页

梅迪-维斯纳病毒又称绵羊进行性肺炎病毒,是绵羊进行性肺炎的病原,属于逆转录病毒科、慢病毒属。其致病过程与人类免疫缺陷病毒(HIV)相似,因此可以作为HIV感染的动物的研究模型。论文综述了梅迪-维斯纳病毒的病原学,阐述了致病机理、免... 梅迪-维斯纳病毒又称绵羊进行性肺炎病毒,是绵羊进行性肺炎的病原,属于逆转录病毒科、慢病毒属。其致病过程与人类免疫缺陷病毒(HIV)相似,因此可以作为HIV感染的动物的研究模型。论文综述了梅迪-维斯纳病毒的病原学,阐述了致病机理、免疫逃避机理及引起宿主的免疫反应,并对未来的防控研究工作进行展望。 展开更多

关键词 梅迪-维斯纳病毒 病原学 致病机理 免疫学

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山羊支原体山羊肺炎亚种湖北株的鉴定及其外膜蛋白的免疫原性研究 被引量：12

3

作者 赵萍 郭晗 +3 位作者 贺英 高鹏程 张念章 逯忠新 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期593-599,共7页

从湖北某地山羊肺脏中分离支原体,经多次克隆纯化后进行生化试验、显微镜观察、PCR及酶切分析、基因特征鉴定以及用动物致病性试验对该菌株进行了鉴定,命名为GH2,进一步通过免疫印迹对GH2株外膜蛋白及GH2株全菌蛋白免疫原性进行分析,并... 从湖北某地山羊肺脏中分离支原体,经多次克隆纯化后进行生化试验、显微镜观察、PCR及酶切分析、基因特征鉴定以及用动物致病性试验对该菌株进行了鉴定,命名为GH2,进一步通过免疫印迹对GH2株外膜蛋白及GH2株全菌蛋白免疫原性进行分析,并用抗Y98血清和抗PG3血清进行比较,筛选GH2株特异性的外膜蛋白,结果表明GH2株为山羊支原体山羊肺炎亚种,存在于GH2外膜蛋白中的相对分子质量大约为60和49.7ku的蛋白可能是其主要的免疫原性蛋白,也是GH2株区别于丝状支原体山羊亚种标准株PG3和绵羊肺炎支原体标准株的主要特异性抗原。这一结果为山羊支原体山羊肺炎亚种的诊断和疫苗研制提供了良好的理论基础。 展开更多

关键词 山羊支原体山羊肺炎亚种 鉴定 外膜蛋白 免疫原性

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弓形虫DOC2基因C-端的克隆及序列分析 被引量：5

4

作者 高琦 张念章 +3 位作者 胡玲英 周东辉 朱兴全 翁亚彪 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第8期56-60,共5页

为研究弓形虫DOC2基因作为弓形虫疫苗候选抗原分子的可行性,本试验用RT-PCR技术扩增DOC2基因编码区的C-端并测序。将该基因片段用生物信息学软件翻译为氨基酸序列后,预测弓形虫DOC2蛋白C-端的生物学特性、高级结构和B细胞抗原表位。结... 为研究弓形虫DOC2基因作为弓形虫疫苗候选抗原分子的可行性,本试验用RT-PCR技术扩增DOC2基因编码区的C-端并测序。将该基因片段用生物信息学软件翻译为氨基酸序列后,预测弓形虫DOC2蛋白C-端的生物学特性、高级结构和B细胞抗原表位。结果表明,DOC2基因C-端片段长度为1887bp。将其翻译成氨基酸序列后预测含有11个亲水区域和7个跨膜区。二级结构中含有19个α-螺旋、1个β-转角和17个无规则卷曲。结合柔性区域等分析,DOC2蛋白C-端共含有12个线性B细胞抗原表位。结果表明DOC2蛋白C-端可作为弓形虫疫苗候选分子,为研制新型弓形虫DNA疫苗或表位肽疫苗提供理论基础。 展开更多

关键词 弓形虫 DOC2基因 克隆 生物信息学分析

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青海省山羊支原体山羊肺炎亚种抗体检测 被引量：5

5

作者 赵萍 贺英 +4 位作者 储岳峰 高鹏程 张念章 赵海燕 逯忠新 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第35期20096-20096,20107,共2页

[目的]调查山羊传染性胸膜肺炎在青海省的流行状况。[方法]利用山羊支原体山羊肺炎亚种抗体检测间接血凝试剂盒对青海各地区的208份山羊血清进行检测。[结果]山羊血清阳性率为16.3%,不同地区山羊的阳性率范围为6.7%～24.3%。[结论]青海... [目的]调查山羊传染性胸膜肺炎在青海省的流行状况。[方法]利用山羊支原体山羊肺炎亚种抗体检测间接血凝试剂盒对青海各地区的208份山羊血清进行检测。[结果]山羊血清阳性率为16.3%,不同地区山羊的阳性率范围为6.7%～24.3%。[结论]青海地区的山羊支原体山羊肺炎亚种的感染率较高,应该加强对该病的防控。 展开更多

关键词 山羊支原体山羊肺炎亚种 抗体检测 青海省

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弓形虫强免疫原性排泄分泌抗原组分的鉴定 被引量：2

6

作者 叶强 王萌 +2 位作者 张念章 殷宏 张德林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2063-2068,共6页

旨在筛选弓形虫排泄分泌抗原(ESA)中具有强抗原性的蛋白质组分。通过双向电泳和免疫印迹技术,对弓形虫ESA进行分析。结果共筛选到了18个免疫显性蛋白质点,并成功对其中6个具有代表性的蛋白质点进行了质谱鉴定,显示为微线体蛋白1、微线... 旨在筛选弓形虫排泄分泌抗原(ESA)中具有强抗原性的蛋白质组分。通过双向电泳和免疫印迹技术,对弓形虫ESA进行分析。结果共筛选到了18个免疫显性蛋白质点,并成功对其中6个具有代表性的蛋白质点进行了质谱鉴定,显示为微线体蛋白1、微线体蛋白4、包囊基质蛋白和14-3-3蛋白,共4种。本研究进一步为弓形虫病的诊断和疫苗研究提供新的实验依据。 展开更多

关键词 弓形虫 排泄分泌抗原 双向电泳 免疫印迹 质谱

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线粒体nad5基因在隐藏管状线虫及四翼无刺线虫的序列变异研究 被引量：2

7

作者 杨言川 李作磊 +3 位作者 张念章 刘光学 朱兴全 孙晓林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第6期42-45,共4页

本试验首次研究了小鼠隐藏管状线虫及四翼无刺线虫在线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位5基因(nad5)部分序列(pnad5)的种间及种内变异。通过对甘肃兰州地区实验小鼠体内分离的蛲虫样品(LY1-20、LS1-22)nad5基因pnad5进行PCR... 本试验首次研究了小鼠隐藏管状线虫及四翼无刺线虫在线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位5基因(nad5)部分序列(pnad5)的种间及种内变异。通过对甘肃兰州地区实验小鼠体内分离的蛲虫样品(LY1-20、LS1-22)nad5基因pnad5进行PCR扩增、克隆及测序分析,研究其遗传变异情况。结果表明,获得隐藏管状线虫pnad5有效序列753bp,通过序列比对发现来自LY和LS 2家实验动物中心的22个隐藏管状线虫样品之间只存在3个碱基的差异,序列相似性99.60%。获得四翼无刺线虫pnad5有效序列865bp,2大动物中心20个四翼无刺线虫样品之间没有碱基的差异,序列相似性100%。用软件ClustalX 1.83截取2种鼠蛲虫nad5基因长度共同的序列,通过比对发现2种鼠蛲虫种间差异为53.64%,种间差异显著。研究结果表明,线粒体nad5基因在鼠蛲虫种内相对保守,但种间有着较高的突变率,可作为鼠蛲虫种间鉴定、诊断的遗传标记。 展开更多

关键词 蛲虫 线粒体DNA nad5基因 PCR 序列分析

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弓形虫细胞核因子3基因的克隆及序列分析 被引量：2

8

作者 胡玲英 张念章 +2 位作者 高琦 朱兴全 王寿昆 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第2期270-274,共5页

为预测弓形虫细胞核因子3(TgNF3)基因作为抗弓形虫疫苗候选抗原的可能性,本试验以弓形虫RH株的总RNA为模板,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增TgNF3基因并连接至pMD18-T载体。筛选阳性克隆后,测序鉴定。将测序结果正确的核苷酸序... 为预测弓形虫细胞核因子3(TgNF3)基因作为抗弓形虫疫苗候选抗原的可能性,本试验以弓形虫RH株的总RNA为模板,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增TgNF3基因并连接至pMD18-T载体。筛选阳性克隆后,测序鉴定。将测序结果正确的核苷酸序列翻译成氨基酸序列,运用生物信息学软件分析TgNF3蛋白的结构,预测抗原表位。结果显示,TgNF3基因长约950bp。TgNF3蛋白中包含1个跨膜结构域,9个α-螺旋区,4个β-折叠区,8个亲水区域和10个柔性区域,并预测含有9个线性B细胞抗原表位。结果表明,TgNF3蛋白可能具有良好的免疫原性,为研制以TgNF3为抗原的弓形虫亚单位疫苗及表位疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 弓形虫 弓形虫细胞核因子3基因 克隆 生物信息学分析

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多头带绦虫蛋白激酶A催化亚基基因的克隆及原核表达 被引量：2

9

作者 杨洋 李文卉 +5 位作者 张念章 李婷婷 李立 闫鸿斌 贾万忠 付宝权 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期2858-2864,共7页

为鉴定多头带绦虫蛋白激酶A催化亚基(Tm PKA-C)基因作为诊断抗原的潜能,本试验以多头带绦虫成虫RNA为模板,利用RT-PCR扩增Tm PKA-C基因。将Tm PKA-C基因片段连接至p ET-30a原核表达载体进行原核表达,然后利用Western blotting和间接ELIS... 为鉴定多头带绦虫蛋白激酶A催化亚基(Tm PKA-C)基因作为诊断抗原的潜能,本试验以多头带绦虫成虫RNA为模板,利用RT-PCR扩增Tm PKA-C基因。将Tm PKA-C基因片段连接至p ET-30a原核表达载体进行原核表达,然后利用Western blotting和间接ELISA分析该蛋白的反应原性。结果表明,Tm PKA-C基因开放阅读框的长度为1 032 bp,可编码343个氨基酸。Tm PKA-C基因的表达产物主要以包涵体的形式存在,重组蛋白的分子质量大小约42 ku。Western blotting结果表明,该重组蛋白既能与自然感染脑多头蚴的绵羊血清发生特异性反应,又能与人工感染脑多头蚴不同时间段的绵羊血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的反应原性。间接ELISA分析结果表明,脑多头蚴绵羊血清能与重组蛋白发生特异性反应,进一步证明该重组蛋白的反应原性良好。本研究为筛选脑多头蚴病诊断新抗原奠定了基础。 展开更多

关键词 多头带绦虫 TmPKA-C 原核表达 反应原性

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刚地弓形虫GRA25基因的克隆及序列分析 被引量：1

10

作者 徐晓佩 刘文阁 +4 位作者 张念章 陈佳 周东辉 朱兴全 徐前明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第3期650-655,共6页

本研究旨在对来源于不同宿主和地理分布的22株弓形虫的GRA25基因进行PCR扩增并测序,对获得的GRA25基因序列进行比对,利用MP和ML两种方法对不同分离株的GRA25基因构建系统进化树。利用生物信息学软件将弓形虫RH株的GRA25基因翻译成氨基... 本研究旨在对来源于不同宿主和地理分布的22株弓形虫的GRA25基因进行PCR扩增并测序,对获得的GRA25基因序列进行比对,利用MP和ML两种方法对不同分离株的GRA25基因构建系统进化树。利用生物信息学软件将弓形虫RH株的GRA25基因翻译成氨基酸序列,对其编码蛋白的生物学特征进行分析。结果显示,弓形虫GRA25基因序列有2种长度,分别为939和948bp。序列比对结果显示,GRA25基因在不同虫株间有82个核苷酸变异位点,变异率为0～4.4%。进化分析结果显示,用GRA25基因不能区分弓形虫基因Ⅰ型和Ⅱ型虫株。生物信息学分析预测弓形虫GRA25蛋白含有7个亲水区域,10个α-螺旋,3个β-折叠,8个无规则卷曲和8个潜在的线性B淋巴细胞抗原表位。本研究结果表明,GRA25基因不能作为标记分子区分不同基因型的弓形虫虫株,但可能作为疫苗候选分子研制新型抗弓形虫基因疫苗或表位肽疫苗。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 GRA25基因 序列分析 生物信息学分析

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弓形虫胚层发育相关蛋白的原核表达及免疫原性研究 被引量：2

11

作者 田维鹏 张念章 +3 位作者 高琦 鲁力 朱兴全 宋铭忻 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期27-31,共5页

试验旨在研究弓形虫胚层发育相关蛋白(TgERP)的免疫原性,以弓形虫RH株的基因组DNA为模板,扩增TgERP基因,将其连接于表达载体pET-30a(+)后,转化至Escherichia coli BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,应用Western blotting对重组蛋白... 试验旨在研究弓形虫胚层发育相关蛋白(TgERP)的免疫原性,以弓形虫RH株的基因组DNA为模板,扩增TgERP基因,将其连接于表达载体pET-30a(+)后,转化至Escherichia coli BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,应用Western blotting对重组蛋白的反应原性进行分析,并用纯化后的TgERP蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果显示,在37℃条件下用1.0mmol/L IPTG诱导6h表达可溶性TgERP蛋白的量最大。SDS-PAGE结果显示,目的蛋白分子质量为16.7ku,以可溶形式表达,纯化后蛋白条带单一。经Western blotting分析,TgERP蛋白有较好的反应原性;制备的多克隆抗体效价较高,可达1∶51200,表明该蛋白具有较好免疫原性。提示,TgERP蛋白可作为血清学诊断方法的候选抗原和弓形虫病疫苗的候选分子,为建立弓形虫新型诊断方法和研制新型弓形虫疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 弓形虫 弓形虫胚层发育相关蛋白基因 原核表达 免疫原性

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人工感染细粒棘球蚴犬粪中蛋白质组的分析 被引量：1

12

作者 李双男 闫鸿斌 +7 位作者 李立 姚刚 田文俊 李文卉 张念章 吴燕涛 付宝权 贾万忠 《动物医学进展》 北大核心 2018年第1期7-15,共9页

收集感染细粒棘绦虫原头蚴后不同时间的犬粪,分离和提取蛋白质,对蛋白质在胶内酶切后,依次进行质谱分析、生物信息学和蛋白质功能富集分析。结果发现,在犬粪中共鉴定出蛋白质3 242个,其中宿主(犬)蛋白有3 107个、细粒棘球绦虫蛋白有135... 收集感染细粒棘绦虫原头蚴后不同时间的犬粪,分离和提取蛋白质,对蛋白质在胶内酶切后,依次进行质谱分析、生物信息学和蛋白质功能富集分析。结果发现,在犬粪中共鉴定出蛋白质3 242个,其中宿主(犬)蛋白有3 107个、细粒棘球绦虫蛋白有135个。蛋白质功能富集结果显示,犬感染细粒棘球绦虫后,寄生虫与宿主相互作用,虫体在不同时间分泌特定蛋白,而蛋白质的分子生物学功能存在一定差异。研究结果对建立粪抗原诊断方法和研究细粒棘球绦虫感染宿主后的代谢途径及其生活机制提供了重要依据。 展开更多

关键词 细粒棘球绦虫 犬粪 不同时间 蛋白质组 生物信息学分析

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弓形虫棒状蛋白17基因的克隆与序列分析

13

作者 聂子雄 张念章 +5 位作者 胡钱江 陈锐钊 周东辉 袁子国 林瑞庆 朱兴全 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第4期13-17,共5页

为研究弓形虫棒状体蛋白17(ROP17)基因的遗传变异,本研究以弓形虫RH株、PRU株和TgC7株为研究对象,首次PCR扩增了其ROP17基因部分序列,将PCR产物纯化后克隆到pMD18-T并测序。将测定的序列与网上下载的弓形虫VEG株、GT1株和ME49株相应序... 为研究弓形虫棒状体蛋白17(ROP17)基因的遗传变异,本研究以弓形虫RH株、PRU株和TgC7株为研究对象,首次PCR扩增了其ROP17基因部分序列,将PCR产物纯化后克隆到pMD18-T并测序。将测定的序列与网上下载的弓形虫VEG株、GT1株和ME49株相应序列进行比对,然后用Mega 5.0程序的NJ法和Puzzle 5.2程序的ML法构建系统发育树。结果表明,3株弓形虫分离株的ROP17基因部分序列长度均为1375bp,A+T含量在49.53%～50.04%之间,3个虫株相应序列的变异碱基数皆小于20个,其变异率为2.3%,氨基酸序列变异率在0～6.11%之间。系统发育结果显示,ROP17基因部分序列能区分弓形虫基因Ⅰ型和Ⅱ型的虫株。本研究结果为进一步研究弓形虫ROP17基因的变异及研制弓形虫ROP17基因的亚单位疫苗提供了理论依据。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 ROP17基因 克隆 序列分析

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6种活性化合物对旋毛虫各期虫体的体外杀伤作用

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作者 徐媛滨 张念章 +5 位作者 李文卉 刘垠鞠 牛栋玉 陈卫刚 付宝权 孙晓林 《动物医学进展》 北大核心 2023年第8期53-58,共6页

为了筛选有效活性化合物对旋毛虫不同发育时期虫体的体外杀伤作用,采用体外培养的方式测定三氯生等6种活性化合物对旋毛虫的体外杀伤效果,用倒置显微镜观察旋毛虫形态并计数。结果显示,三氯生对旋毛虫肌幼虫、成虫、新生幼虫均有明显杀... 为了筛选有效活性化合物对旋毛虫不同发育时期虫体的体外杀伤作用,采用体外培养的方式测定三氯生等6种活性化合物对旋毛虫的体外杀伤效果,用倒置显微镜观察旋毛虫形态并计数。结果显示,三氯生对旋毛虫肌幼虫、成虫、新生幼虫均有明显杀伤作用(P<0.01),没食子酸辛酯对旋毛虫成虫和新生幼虫有明显杀伤作用(P<0.01),吡咯-2-羧酸、邻羟基苯乙酸、亚精胺盐酸盐、1,5-戊二胺仅对旋毛虫新生幼虫有杀伤作用(P<0.05)。亚精胺盐酸盐在高浓度下对肌幼虫有杀伤作用但效果不佳。结果表明,这6种活性化合物对旋毛虫各时期有虽有不同程度的杀伤作用,但只有三氯生对旋毛虫3个时期均具有明显的杀伤效果,该筛选结果为进一步开展体内试验研究提供了依据。 展开更多

关键词 活性化合物 旋毛虫 三氯生 体外试验 杀伤作用

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寄生虫水孔蛋白研究进展

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作者 崔建敏 张念章 付宝权 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期689-695,共7页

水孔蛋白(AQP)是主要内在蛋白(MIP)家族重要的组成成员之一。研究发现,寄生虫水孔蛋白不仅能够调节虫体的渗透稳态、参与营养物质的转运、排出代谢产物,还可以使抗寄生虫药物进入虫体,因而成为研制新型寄生虫疫苗和抗寄生虫药物的潜在... 水孔蛋白(AQP)是主要内在蛋白(MIP)家族重要的组成成员之一。研究发现,寄生虫水孔蛋白不仅能够调节虫体的渗透稳态、参与营养物质的转运、排出代谢产物,还可以使抗寄生虫药物进入虫体,因而成为研制新型寄生虫疫苗和抗寄生虫药物的潜在靶点。因此,研究水孔蛋白的结构与功能对寄生虫病防治具有重大意义。作者通过综述寄生虫水孔蛋白的作用机制和结构特征,以期为抗寄生虫生物制剂的研发提供参考。 展开更多

关键词 寄生虫 水孔蛋白 结构与功能

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