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CD83重组蛋白的原核表达、复性纯化及多克隆抗体制备
1
作者
马宁
李兴杰
+3 位作者
姜鸿宇
徐国锋
王星
张
宗德
(
指导
)
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第20期2506-2511,共6页
目的:利用原核表达系统表达、纯化CD83蛋白,制备CD83多克隆抗体。方法:构建CD83胞外结构域的原核表达质粒,利用TOP10F’菌株表达,使用IPTG诱导并寻找最佳条件;采用0.3%SKL将包涵体溶解变性,透析复性后通过GST亲和层析纯化GST-CD83蛋白;...
目的:利用原核表达系统表达、纯化CD83蛋白,制备CD83多克隆抗体。方法:构建CD83胞外结构域的原核表达质粒,利用TOP10F’菌株表达,使用IPTG诱导并寻找最佳条件;采用0.3%SKL将包涵体溶解变性,透析复性后通过GST亲和层析纯化GST-CD83蛋白;通过QuickAntibody免疫佐剂免疫SD大鼠制备CD83多克隆抗体,ELISA分析抗体的反应活性和特异性。结果:成功构建重组质粒pGEX-2T-CD83(Met1-Arg133),获得最佳诱导条件:0.2 mmol/L IPTG、25℃、O/N。成功获得CD83重组蛋白,免疫大鼠后获得了特异性及活性较高且效价为1∶104~1∶105的多克隆抗体。结论:获得的CD83重组蛋白及多克隆抗体,为后期深入开展CD83蛋白及CD83抗体的免疫抑制特性研究提供支持。
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关键词
CD83重组蛋白
原核表达
包涵体复性
多克隆抗体
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题名
CD83重组蛋白的原核表达、复性纯化及多克隆抗体制备
1
作者
马宁
李兴杰
姜鸿宇
徐国锋
王星
张
宗德
(
指导
)
机构
西南医科大学附属医院炎症与变态反应实验室
西南医科大学基础医学院
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第20期2506-2511,共6页
基金
国家自然科学基金项目(82000016)
泸州市人民政府-西南医科大学科技战略合作项目(00022690)
西南医科大学自然科学基金项目(00031586,00031294)资助。
文摘
目的:利用原核表达系统表达、纯化CD83蛋白,制备CD83多克隆抗体。方法:构建CD83胞外结构域的原核表达质粒,利用TOP10F’菌株表达,使用IPTG诱导并寻找最佳条件;采用0.3%SKL将包涵体溶解变性,透析复性后通过GST亲和层析纯化GST-CD83蛋白;通过QuickAntibody免疫佐剂免疫SD大鼠制备CD83多克隆抗体,ELISA分析抗体的反应活性和特异性。结果:成功构建重组质粒pGEX-2T-CD83(Met1-Arg133),获得最佳诱导条件:0.2 mmol/L IPTG、25℃、O/N。成功获得CD83重组蛋白,免疫大鼠后获得了特异性及活性较高且效价为1∶104~1∶105的多克隆抗体。结论:获得的CD83重组蛋白及多克隆抗体,为后期深入开展CD83蛋白及CD83抗体的免疫抑制特性研究提供支持。
关键词
CD83重组蛋白
原核表达
包涵体复性
多克隆抗体
Keywords
Recombinant CD83
Prokaryotic expression
Inclusion body renaturation
Polyclonal antibody
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
CD83重组蛋白的原核表达、复性纯化及多克隆抗体制备
马宁
李兴杰
姜鸿宇
徐国锋
王星
张
宗德
(
指导
)
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
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