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重叠PCR法构建PTEN基因3位点的融合重组载体
被引量:
1
1
作者
龚咏晴
彭华
+2 位作者
周晶
张宏全
郭紫芬
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2016年第10期788-790,共3页
目的构建包含与子宫内膜癌相关的PTEN基因3位点的重组p MD19-exon 5-exon 8载体。方法以健康人全基因组DNA为模板,设计2对有重叠区的特异性引物分别扩增PTEN基因的exon 5和exon 8片段,利用重叠PCR技术,将exon 5和exon 8片段进行连接,再...
目的构建包含与子宫内膜癌相关的PTEN基因3位点的重组p MD19-exon 5-exon 8载体。方法以健康人全基因组DNA为模板,设计2对有重叠区的特异性引物分别扩增PTEN基因的exon 5和exon 8片段,利用重叠PCR技术,将exon 5和exon 8片段进行连接,再将连接产物exon 5-exon 8片段插入p MD19-T质粒,构建成重组p MD19-exon 5-exon 8载体,转化入大肠埃希菌感受态细胞DH5α进行表达,利用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。结果 exon 5-exon 8片段经凝胶电泳检测,可在1 253 bp处见一清晰的目的条带,PTEN基因融合重组质粒经菌液PCR及测序结果鉴定,均与预期结果一致。结论应用重叠PCR法将exon 5和exon 8片段进行融合,并成功构建了PTEN基因融合重组表达载体。
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关键词
PTEN基因
重叠PCR
子宫内膜癌
载体构建
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职称材料
重叠PCR法构建宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M融合重组载体
被引量:
3
2
作者
董巍檑
向花花
+4 位作者
彭华
龚咏晴
周晶
张宏全
郭紫芬
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2018年第2期139-141,147,共4页
目的构建包含与宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M位点重组p MD19-exon18-exon20载体,为制备突变型EGFR基因重组载体提供模板。方法以健康人全血基因组DNA作为模板,设计2对有重叠互补区的特异性引物,对EGFR基因的exon18和exon20两片段...
目的构建包含与宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M位点重组p MD19-exon18-exon20载体,为制备突变型EGFR基因重组载体提供模板。方法以健康人全血基因组DNA作为模板,设计2对有重叠互补区的特异性引物,对EGFR基因的exon18和exon20两片段分别进行扩增,用重叠PCR技术将exon18和exon20片段进行连接,再将连接产物exon18-exon20片段插入p MD19-T质粒,构建成野生型p MD19-exon18-exon20载体,转入至大肠埃希菌感受态细胞DH5α中进行表达,利用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,exon18和exon20两位点扩增片段在778 bp和596 bp处有清晰的目的条带,两片段的融合产物exon18-exon20片段可在1 374 bp处见一清晰目的条带;经菌液PCR和基因组测序结果鉴定,EGFR基因融合重组质粒均与预期结果一致。结论利用重叠PCR法将exon18和exon20片段进行融合,且成功构建了EGFR基因重组表达载体。
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关键词
EGFR基因
载体构建
宫颈癌
重叠PCR
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职称材料
EGFR基因G719S和T790M突变载体的构建及临床应用研究
被引量:
1
3
作者
周晶
向花花
+3 位作者
肖正午
彭华
张宏全
郭紫芬
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2018年第5期380-383,共4页
目的构建与宫颈癌组织表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因G719S和T790M位点突变型重组载体,利用其建立分子开关平台检测宫颈癌EGFR基因突变。方法以野生型重组质粒为模板,利用重叠PCR技术,得到突变型融合目的...
目的构建与宫颈癌组织表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因G719S和T790M位点突变型重组载体,利用其建立分子开关平台检测宫颈癌EGFR基因突变。方法以野生型重组质粒为模板,利用重叠PCR技术,得到突变型融合目的 DNA片段,再将此目的片段连接入p MD19-T质粒中,构建成突变型重组载体,将其转化入大肠埃希菌E.coli DH5α感受态细胞进行表达,用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。设计特异性检测引物,建立分子开关检测平台用于临床宫颈癌样本的检测。结果通过基因组测序证实G719S和T790M突变位点成功引入,定点突变载体构建成功。成功建立了分子开关检测平台用于宫颈癌组织DNA的检测。结论利用重叠PCR技术简便、高效地构建了EGFR基因突变重组载体,并建立了分子开关检测平台,为基因定点突变及临床上检测EGFR基因突变提供了新的技术手段。
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关键词
宫颈癌
表皮生长因子受体基因
定点突变
重叠PCR
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职称材料
天津现代城模块化低位顶升钢平台模架体系设计
被引量:
6
4
作者
崔健
闵伟江
+2 位作者
王优
张宏全
杨磊
《施工技术》
CAS
北大核心
2013年第5期20-24,96,共6页
在天津现代城项目中,写字楼塔楼核心筒结构采用模块化低位顶升钢平台模架体系进行施工,首先介绍了项目概况及核心筒特点,然后重点从模块化钢平台系统、支撑顶升系统、挂架防护系统、模板系统及各系统连接设计5个方面介绍了体系设计情况...
在天津现代城项目中,写字楼塔楼核心筒结构采用模块化低位顶升钢平台模架体系进行施工,首先介绍了项目概况及核心筒特点,然后重点从模块化钢平台系统、支撑顶升系统、挂架防护系统、模板系统及各系统连接设计5个方面介绍了体系设计情况,此后对体系设计情况进行总结,提出改进方案。此次设计进一步实现了体系模块化、标准化,提高了体系周转率,并解决了顶升系统抗弯问题。
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关键词
模板
模块化
高层建筑
钢平台
支撑
顶升系统
挂架
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职称材料
少计电量、电费能否依法全额追回
5
作者
张宏全
《农电管理》
2015年第3期48-48,共1页
案例 2005年2月25日,某供电局将A公司的300/5的电流互感器更换为400/5的电流互感器后,工作人员未在营销档案中做相应变更,导致对该公司电量计量产生少计。2011年6月1日,供电局检查时发现这一问题,后多次要求A公司补交电费,但A...
案例 2005年2月25日,某供电局将A公司的300/5的电流互感器更换为400/5的电流互感器后,工作人员未在营销档案中做相应变更,导致对该公司电量计量产生少计。2011年6月1日,供电局检查时发现这一问题,后多次要求A公司补交电费,但A公司一直推逶拖延,某供电局遂将其诉至人民法院,要求补交近6年来少交的电费。
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关键词
电量计量
电费
电流互感器
供电局
工作人员
人民法院
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职称材料
深基坑内支撑及型钢支撑的受力分析
被引量:
1
6
作者
王三港
郑玲
+3 位作者
范树山
张宏全
孟庆涛
乔伟
《施工技术》
CAS
北大核心
2015年第S1期1-5,共5页
随着社会经济的快速发展和城市土地资源的短缺,深基坑工程已成为现代建筑的一种发展趋势,基坑本身的稳定和周边环境的安全自然成为各方关注的焦点。以天津现代城B区项目为例,从获得的监测数据等方面着手,对深基坑地下连续墙的位移情况...
随着社会经济的快速发展和城市土地资源的短缺,深基坑工程已成为现代建筑的一种发展趋势,基坑本身的稳定和周边环境的安全自然成为各方关注的焦点。以天津现代城B区项目为例,从获得的监测数据等方面着手,对深基坑地下连续墙的位移情况、内支撑及型钢支撑的受力情况进行了初步研究。
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关键词
地下连续墙
临时内支撑
型钢支撑
模拟计算
内力监测
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职称材料
题名
重叠PCR法构建PTEN基因3位点的融合重组载体
被引量:
1
1
作者
龚咏晴
彭华
周晶
张宏全
郭紫芬
机构
南华大学药物药理研究所
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2016年第10期788-790,共3页
基金
国家自然科学基金(81102516)
南华大学研究生创新项目(2016XCX36)
湖南省医药卫生科研计划项目(C2016083)
文摘
目的构建包含与子宫内膜癌相关的PTEN基因3位点的重组p MD19-exon 5-exon 8载体。方法以健康人全基因组DNA为模板,设计2对有重叠区的特异性引物分别扩增PTEN基因的exon 5和exon 8片段,利用重叠PCR技术,将exon 5和exon 8片段进行连接,再将连接产物exon 5-exon 8片段插入p MD19-T质粒,构建成重组p MD19-exon 5-exon 8载体,转化入大肠埃希菌感受态细胞DH5α进行表达,利用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。结果 exon 5-exon 8片段经凝胶电泳检测,可在1 253 bp处见一清晰的目的条带,PTEN基因融合重组质粒经菌液PCR及测序结果鉴定,均与预期结果一致。结论应用重叠PCR法将exon 5和exon 8片段进行融合,并成功构建了PTEN基因融合重组表达载体。
关键词
PTEN基因
重叠PCR
子宫内膜癌
载体构建
Keywords
PTEN gene
overlap PCR
endometrial cancer
vector construction
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
重叠PCR法构建宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M融合重组载体
被引量:
3
2
作者
董巍檑
向花花
彭华
龚咏晴
周晶
张宏全
郭紫芬
机构
南华大学附属第一医院妇产科
南华大学药物药理研究所
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2018年第2期139-141,147,共4页
基金
湖南省卫计委科研计划课题(C2016083)
文摘
目的构建包含与宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M位点重组p MD19-exon18-exon20载体,为制备突变型EGFR基因重组载体提供模板。方法以健康人全血基因组DNA作为模板,设计2对有重叠互补区的特异性引物,对EGFR基因的exon18和exon20两片段分别进行扩增,用重叠PCR技术将exon18和exon20片段进行连接,再将连接产物exon18-exon20片段插入p MD19-T质粒,构建成野生型p MD19-exon18-exon20载体,转入至大肠埃希菌感受态细胞DH5α中进行表达,利用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,exon18和exon20两位点扩增片段在778 bp和596 bp处有清晰的目的条带,两片段的融合产物exon18-exon20片段可在1 374 bp处见一清晰目的条带;经菌液PCR和基因组测序结果鉴定,EGFR基因融合重组质粒均与预期结果一致。结论利用重叠PCR法将exon18和exon20片段进行融合,且成功构建了EGFR基因重组表达载体。
关键词
EGFR基因
载体构建
宫颈癌
重叠PCR
Keywords
EGFR gene
vector construction
cervical cancer
overlap PCR
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
EGFR基因G719S和T790M突变载体的构建及临床应用研究
被引量:
1
3
作者
周晶
向花花
肖正午
彭华
张宏全
郭紫芬
机构
南华大学药物药理研究所湖南省分子靶标新药研究协同创新中心
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2018年第5期380-383,共4页
基金
湖南省自然科学基金(2018JJ2350)
文摘
目的构建与宫颈癌组织表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因G719S和T790M位点突变型重组载体,利用其建立分子开关平台检测宫颈癌EGFR基因突变。方法以野生型重组质粒为模板,利用重叠PCR技术,得到突变型融合目的 DNA片段,再将此目的片段连接入p MD19-T质粒中,构建成突变型重组载体,将其转化入大肠埃希菌E.coli DH5α感受态细胞进行表达,用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。设计特异性检测引物,建立分子开关检测平台用于临床宫颈癌样本的检测。结果通过基因组测序证实G719S和T790M突变位点成功引入,定点突变载体构建成功。成功建立了分子开关检测平台用于宫颈癌组织DNA的检测。结论利用重叠PCR技术简便、高效地构建了EGFR基因突变重组载体,并建立了分子开关检测平台,为基因定点突变及临床上检测EGFR基因突变提供了新的技术手段。
关键词
宫颈癌
表皮生长因子受体基因
定点突变
重叠PCR
Keywords
cervical cancer
epidermal growth factor receptor gene
site-directed mutagenesis
overlap PCR
分类号
R711.74 [医药卫生—妇产科学]
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职称材料
题名
天津现代城模块化低位顶升钢平台模架体系设计
被引量:
6
4
作者
崔健
闵伟江
王优
张宏全
杨磊
机构
中建三局建设工程股份有限公司
中建三局建设工程股份有限公司(北京)
出处
《施工技术》
CAS
北大核心
2013年第5期20-24,96,共6页
基金
中建三局建设股份有限公司课题(CSCEC3B-2010-35)
文摘
在天津现代城项目中,写字楼塔楼核心筒结构采用模块化低位顶升钢平台模架体系进行施工,首先介绍了项目概况及核心筒特点,然后重点从模块化钢平台系统、支撑顶升系统、挂架防护系统、模板系统及各系统连接设计5个方面介绍了体系设计情况,此后对体系设计情况进行总结,提出改进方案。此次设计进一步实现了体系模块化、标准化,提高了体系周转率,并解决了顶升系统抗弯问题。
关键词
模板
模块化
高层建筑
钢平台
支撑
顶升系统
挂架
Keywords
formwork
modularization
tall buildings
steel truss platform
supports
jacking system
hanging rack
分类号
TU755.2 [建筑科学—建筑技术科学]
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职称材料
题名
少计电量、电费能否依法全额追回
5
作者
张宏全
机构
广东电网东莞供电局
出处
《农电管理》
2015年第3期48-48,共1页
文摘
案例 2005年2月25日,某供电局将A公司的300/5的电流互感器更换为400/5的电流互感器后,工作人员未在营销档案中做相应变更,导致对该公司电量计量产生少计。2011年6月1日,供电局检查时发现这一问题,后多次要求A公司补交电费,但A公司一直推逶拖延,某供电局遂将其诉至人民法院,要求补交近6年来少交的电费。
关键词
电量计量
电费
电流互感器
供电局
工作人员
人民法院
分类号
TM933.4 [电气工程—电力电子与电力传动]
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职称材料
题名
深基坑内支撑及型钢支撑的受力分析
被引量:
1
6
作者
王三港
郑玲
范树山
张宏全
孟庆涛
乔伟
机构
中建三局集团有限公司(北京)
出处
《施工技术》
CAS
北大核心
2015年第S1期1-5,共5页
文摘
随着社会经济的快速发展和城市土地资源的短缺,深基坑工程已成为现代建筑的一种发展趋势,基坑本身的稳定和周边环境的安全自然成为各方关注的焦点。以天津现代城B区项目为例,从获得的监测数据等方面着手,对深基坑地下连续墙的位移情况、内支撑及型钢支撑的受力情况进行了初步研究。
关键词
地下连续墙
临时内支撑
型钢支撑
模拟计算
内力监测
Keywords
diaphragm wall
temporary internal support
structural steel support
simulation calculation
internal force monitoring
分类号
TU753 [建筑科学—建筑技术科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重叠PCR法构建PTEN基因3位点的融合重组载体
龚咏晴
彭华
周晶
张宏全
郭紫芬
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2016
1
在线阅读
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职称材料
2
重叠PCR法构建宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M融合重组载体
董巍檑
向花花
彭华
龚咏晴
周晶
张宏全
郭紫芬
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2018
3
在线阅读
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职称材料
3
EGFR基因G719S和T790M突变载体的构建及临床应用研究
周晶
向花花
肖正午
彭华
张宏全
郭紫芬
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
2018
1
在线阅读
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职称材料
4
天津现代城模块化低位顶升钢平台模架体系设计
崔健
闵伟江
王优
张宏全
杨磊
《施工技术》
CAS
北大核心
2013
6
在线阅读
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职称材料
5
少计电量、电费能否依法全额追回
张宏全
《农电管理》
2015
0
在线阅读
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职称材料
6
深基坑内支撑及型钢支撑的受力分析
王三港
郑玲
范树山
张宏全
孟庆涛
乔伟
《施工技术》
CAS
北大核心
2015
1
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职称材料
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