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重叠PCR法构建PTEN基因3位点的融合重组载体 被引量:1
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作者 龚咏晴 彭华 +2 位作者 周晶 张宏全 郭紫芬 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第10期788-790,共3页
目的构建包含与子宫内膜癌相关的PTEN基因3位点的重组p MD19-exon 5-exon 8载体。方法以健康人全基因组DNA为模板,设计2对有重叠区的特异性引物分别扩增PTEN基因的exon 5和exon 8片段,利用重叠PCR技术,将exon 5和exon 8片段进行连接,再... 目的构建包含与子宫内膜癌相关的PTEN基因3位点的重组p MD19-exon 5-exon 8载体。方法以健康人全基因组DNA为模板,设计2对有重叠区的特异性引物分别扩增PTEN基因的exon 5和exon 8片段,利用重叠PCR技术,将exon 5和exon 8片段进行连接,再将连接产物exon 5-exon 8片段插入p MD19-T质粒,构建成重组p MD19-exon 5-exon 8载体,转化入大肠埃希菌感受态细胞DH5α进行表达,利用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。结果 exon 5-exon 8片段经凝胶电泳检测,可在1 253 bp处见一清晰的目的条带,PTEN基因融合重组质粒经菌液PCR及测序结果鉴定,均与预期结果一致。结论应用重叠PCR法将exon 5和exon 8片段进行融合,并成功构建了PTEN基因融合重组表达载体。 展开更多
关键词 PTEN基因 重叠PCR 子宫内膜癌 载体构建
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重叠PCR法构建宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M融合重组载体 被引量:3
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作者 董巍檑 向花花 +4 位作者 彭华 龚咏晴 周晶 张宏全 郭紫芬 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2018年第2期139-141,147,共4页
目的构建包含与宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M位点重组p MD19-exon18-exon20载体,为制备突变型EGFR基因重组载体提供模板。方法以健康人全血基因组DNA作为模板,设计2对有重叠互补区的特异性引物,对EGFR基因的exon18和exon20两片段... 目的构建包含与宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M位点重组p MD19-exon18-exon20载体,为制备突变型EGFR基因重组载体提供模板。方法以健康人全血基因组DNA作为模板,设计2对有重叠互补区的特异性引物,对EGFR基因的exon18和exon20两片段分别进行扩增,用重叠PCR技术将exon18和exon20片段进行连接,再将连接产物exon18-exon20片段插入p MD19-T质粒,构建成野生型p MD19-exon18-exon20载体,转入至大肠埃希菌感受态细胞DH5α中进行表达,利用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,exon18和exon20两位点扩增片段在778 bp和596 bp处有清晰的目的条带,两片段的融合产物exon18-exon20片段可在1 374 bp处见一清晰目的条带;经菌液PCR和基因组测序结果鉴定,EGFR基因融合重组质粒均与预期结果一致。结论利用重叠PCR法将exon18和exon20片段进行融合,且成功构建了EGFR基因重组表达载体。 展开更多
关键词 EGFR基因 载体构建 宫颈癌 重叠PCR
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EGFR基因G719S和T790M突变载体的构建及临床应用研究 被引量:1
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作者 周晶 向花花 +3 位作者 肖正午 彭华 张宏全 郭紫芬 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2018年第5期380-383,共4页
目的构建与宫颈癌组织表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因G719S和T790M位点突变型重组载体,利用其建立分子开关平台检测宫颈癌EGFR基因突变。方法以野生型重组质粒为模板,利用重叠PCR技术,得到突变型融合目的... 目的构建与宫颈癌组织表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因G719S和T790M位点突变型重组载体,利用其建立分子开关平台检测宫颈癌EGFR基因突变。方法以野生型重组质粒为模板,利用重叠PCR技术,得到突变型融合目的 DNA片段,再将此目的片段连接入p MD19-T质粒中,构建成突变型重组载体,将其转化入大肠埃希菌E.coli DH5α感受态细胞进行表达,用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。设计特异性检测引物,建立分子开关检测平台用于临床宫颈癌样本的检测。结果通过基因组测序证实G719S和T790M突变位点成功引入,定点突变载体构建成功。成功建立了分子开关检测平台用于宫颈癌组织DNA的检测。结论利用重叠PCR技术简便、高效地构建了EGFR基因突变重组载体,并建立了分子开关检测平台,为基因定点突变及临床上检测EGFR基因突变提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 宫颈癌 表皮生长因子受体基因 定点突变 重叠PCR
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天津现代城模块化低位顶升钢平台模架体系设计 被引量:6
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作者 崔健 闵伟江 +2 位作者 王优 张宏全 杨磊 《施工技术》 CAS 北大核心 2013年第5期20-24,96,共6页
在天津现代城项目中,写字楼塔楼核心筒结构采用模块化低位顶升钢平台模架体系进行施工,首先介绍了项目概况及核心筒特点,然后重点从模块化钢平台系统、支撑顶升系统、挂架防护系统、模板系统及各系统连接设计5个方面介绍了体系设计情况... 在天津现代城项目中,写字楼塔楼核心筒结构采用模块化低位顶升钢平台模架体系进行施工,首先介绍了项目概况及核心筒特点,然后重点从模块化钢平台系统、支撑顶升系统、挂架防护系统、模板系统及各系统连接设计5个方面介绍了体系设计情况,此后对体系设计情况进行总结,提出改进方案。此次设计进一步实现了体系模块化、标准化,提高了体系周转率,并解决了顶升系统抗弯问题。 展开更多
关键词 模板 模块化 高层建筑 钢平台 支撑 顶升系统 挂架
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少计电量、电费能否依法全额追回
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作者 张宏全 《农电管理》 2015年第3期48-48,共1页
案例 2005年2月25日,某供电局将A公司的300/5的电流互感器更换为400/5的电流互感器后,工作人员未在营销档案中做相应变更,导致对该公司电量计量产生少计。2011年6月1日,供电局检查时发现这一问题,后多次要求A公司补交电费,但A... 案例 2005年2月25日,某供电局将A公司的300/5的电流互感器更换为400/5的电流互感器后,工作人员未在营销档案中做相应变更,导致对该公司电量计量产生少计。2011年6月1日,供电局检查时发现这一问题,后多次要求A公司补交电费,但A公司一直推逶拖延,某供电局遂将其诉至人民法院,要求补交近6年来少交的电费。 展开更多
关键词 电量计量 电费 电流互感器 供电局 工作人员 人民法院
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深基坑内支撑及型钢支撑的受力分析 被引量:1
6
作者 王三港 郑玲 +3 位作者 范树山 张宏全 孟庆涛 乔伟 《施工技术》 CAS 北大核心 2015年第S1期1-5,共5页
随着社会经济的快速发展和城市土地资源的短缺,深基坑工程已成为现代建筑的一种发展趋势,基坑本身的稳定和周边环境的安全自然成为各方关注的焦点。以天津现代城B区项目为例,从获得的监测数据等方面着手,对深基坑地下连续墙的位移情况... 随着社会经济的快速发展和城市土地资源的短缺,深基坑工程已成为现代建筑的一种发展趋势,基坑本身的稳定和周边环境的安全自然成为各方关注的焦点。以天津现代城B区项目为例,从获得的监测数据等方面着手,对深基坑地下连续墙的位移情况、内支撑及型钢支撑的受力情况进行了初步研究。 展开更多
关键词 地下连续墙 临时内支撑 型钢支撑 模拟计算 内力监测
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