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猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州株GZ-RNSP2基因的克隆与遗传变异分析 被引量:5
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作者 张喜懿 温贵兰 +3 位作者 管国丹 陈广 田浪 杨佰启 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第11期3659-3666,共8页
为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)贵州株GZ-R的遗传变异情况及其NSP2基因的特征,本试验基于NSP2基因设计了2对特异性引物对目的基因进行巢式RT-PCR、克隆和序列分析。结果显示,第二轮巢式PCR除扩增出约3000 bp的预期条带外,还扩增... 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)贵州株GZ-R的遗传变异情况及其NSP2基因的特征,本试验基于NSP2基因设计了2对特异性引物对目的基因进行巢式RT-PCR、克隆和序列分析。结果显示,第二轮巢式PCR除扩增出约3000 bp的预期条带外,还扩增出另一条约1200 bp的条带;将两DNA片段克隆至pMD19-T载体后经测序得到两条片段,大片段长2980 bp,命名为GZR-NSP2-L;小片段长1131 bp,命名为,GZR-NSP2-S;两片段同源性比对发现,GZR-NSP2-S具有GZR-NSP2-L N端第1-945位核苷酸与C端第2795-2980位核苷酸,缺失GZR-NSP2-L第946-2794位之间的核苷酸;GZR-NSP2-L与VR-2332株、Lelystad virus株的核苷酸同源性分别为81.2%、48.6%;编码氨基酸同源性比对结果与核苷酸同源性结果一致,揭示PRRSV GZ-R株属于美洲型毒株;氨基酸缺失位点比对发现,GZ-R NSP2在其第481位、第533-561位存在30个不连续氨基酸的缺失,缺失位点与PRRSV高致病性毒株一致。综上所述,可鉴定PRRSV GZ-R株为美洲型高致病性毒株。试验结果可为进一步探索PRRSV在贵州省的流行趋势以及NSP2在PRRSV复制过程中的作用机制提供一定的参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) NSP2 遗传变异分析
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1株罗曼粉鸡源申氏不动杆菌的分离鉴定及耐药性分析 被引量:1
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作者 张喜懿 温贵兰 +2 位作者 陈广 田浪 杨佰启 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第7期2304-2311,共8页
为了解贵州省某养殖场罗曼粉鸡发病病原的特征及其耐药性,本试验从病死鸡中分离出一株革兰氏阴性菌,命名为GZ2019,并对其进行纯化培养、生化试验、16S rRNA序列分析、药敏试验及动物回归试验。分离菌在普通琼脂培养基上呈圆形凸起、表... 为了解贵州省某养殖场罗曼粉鸡发病病原的特征及其耐药性,本试验从病死鸡中分离出一株革兰氏阴性菌,命名为GZ2019,并对其进行纯化培养、生化试验、16S rRNA序列分析、药敏试验及动物回归试验。分离菌在普通琼脂培养基上呈圆形凸起、表面光滑、半透明的灰白色小菌落,鲜血营养琼脂培养基上菌落形态与普通琼脂培养基上的一致,但不溶血;革兰氏染色结果镜检显示,分离菌为成双排列的阴性球杆菌,偶见单个存在或链状排列;生化试验结果显示,分离菌枸橼酸盐利用、过氧化氢酶反应为阳性,硝酸还原、氧化酶、葡萄糖发酵等反应为阴性,无运动性;16S rRNA序列分析结果显示,分离株与不动杆菌的核苷酸同源性在72.6%~99.9%之间,与申氏不动杆菌LUH 4760株(GenBank登录号:AJ275041)、SNSK 752株(GenBank登录号:MG584984)、MCDA01株(GenBank登录号:KY385627)及RP1株(GenBank登录号:MG461636)的核苷酸同源性高达99.9%;药敏试验结果显示,分离菌对头孢曲松和痢特灵敏感,对头孢哌酮、头孢呋辛、头孢他啶等5种药物中度敏感,对新霉素、环丙沙星、羧苄西林等17种药物耐药;动物回归试验结果显示,试验组小鼠隔离饲养1周仅死亡1只,死亡率为20%,表明该分离菌致病性较弱。本试验成功分离出1株低致病性申氏不动杆菌GZ2019,可为鸡源申氏不动杆菌病的预防和治疗提供一定的参考依据。 展开更多
关键词 罗曼粉鸡 申氏不动杆菌 耐药性分析
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GZZJ201711株全基因组序列分析 被引量:2
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作者 陈广 张升波 +8 位作者 温贵兰 李昌红 徐丽 田浪 张喜懿 龚新勇 陈彦希 文明 王开功 《动物医学进展》 北大核心 2020年第1期20-26,共7页
为了解贵州省毕节地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因变异情况,于2017年从贵州毕节地区某疑似感染PRRSV猪群分离到1株PRRSV,将其命名为GZZJ201711毒株。采用RT-PCR分段扩增出PRRSV GZZJ201711株13个基因片段,分别连接到pMD19-T载体... 为了解贵州省毕节地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因变异情况,于2017年从贵州毕节地区某疑似感染PRRSV猪群分离到1株PRRSV,将其命名为GZZJ201711毒株。采用RT-PCR分段扩增出PRRSV GZZJ201711株13个基因片段,分别连接到pMD19-T载体上进行测序,拼接后得到PRRSV GZZJ201711株全基因组长15 322 bp (去除polyA尾),包括5’UTR、ORFla-ORF7、3’UTR。序列分析表明,GZZJ201711株与欧洲型Lelystad virus(LV)株核苷酸同源性为60.3%,与美洲型毒株代表株ATCC VR-2332核苷酸同源性为89.2%,与HP-PRRSV(HUN4、JXA1、TJ)等毒株同源性在98.8%~98.9%之间。GZZJ201711株与高致病性毒株JXA1、HUN4、TJ属于同一小分支,其中与XJu-1、GDHY毒株遗传关系最近。GZZJ201711毒株的NSP2基因有30个氨基酸缺失,与JXA1、HUN4、TJ等HP-PRRSV毒株缺失位置一致。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 全基因组 序列分析
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禽源产色葡萄球菌的分离鉴定及其耐药性分析 被引量:10
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作者 陈广 温贵兰 +2 位作者 张喜懿 田浪 杨佰启 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第7期2215-2222,共8页
为了解禽源产色葡萄球菌的耐药性,本研究从发病金陵花鸡中分离到1株产色葡萄球菌GZQX2019,并进行细菌分离培养、革兰氏染色镜检、生化试验、16S rDNA序列分析、药敏试验、部分耐药与肠毒素基因检测和动物回归试验。结果显示,分离菌在鲜... 为了解禽源产色葡萄球菌的耐药性,本研究从发病金陵花鸡中分离到1株产色葡萄球菌GZQX2019,并进行细菌分离培养、革兰氏染色镜检、生化试验、16S rDNA序列分析、药敏试验、部分耐药与肠毒素基因检测和动物回归试验。结果显示,分离菌在鲜血琼脂培养基上长出表面凸起、边缘整齐的溶血现象白色菌落;革兰氏染色镜检呈葡萄串状球菌。生化试验结果显示,分离菌蔗糖、精氨酸水解酶、木糖等反应阳性,尿素、木糖醇、麦芽糖等反应阴性。系统进化树显示,分离菌与产色葡萄球菌处于同一分支;药敏试验结果显示,分离菌对红霉素、头孢他啶、多西环素等6种抗菌药耐药,对头孢呋辛、头孢哌酮、新霉素等11种抗菌药敏感。耐药与肠毒素基因检测结果显示,分离菌能检测出热敏感细胞肠毒素基因Alt,耐大环内酯类基因ermB,β-内酰胺类基因VIM、TEM,四环素类基因tetB。动物回归试验结果显示,分离菌对小鼠和雏鸡致病能力不强或者没有致病力。试验成功分离到1株禽源产色葡萄球菌,丰富了禽源产色葡萄球菌的认知。 展开更多
关键词 金陵花鸡 产色葡萄球菌 耐药基因 毒力基因
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小反刍兽疫的流行病学及防治措施 被引量:11
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作者 刘蔓蔓 温贵兰 +4 位作者 张喜懿 陈广 张小波 胡璇 孙芸 《中国畜禽种业》 2021年第5期37-38,共2页
小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性、传染性、病毒性疾病。临床以体温升高、眼鼻分泌物增多、肺炎等为特征。本文从小反刍兽疫的病原学特征、流行病学、临床症状、剖解病理变化、预防措施等方面进行论述,以期为临床上防控该... 小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性、传染性、病毒性疾病。临床以体温升高、眼鼻分泌物增多、肺炎等为特征。本文从小反刍兽疫的病原学特征、流行病学、临床症状、剖解病理变化、预防措施等方面进行论述,以期为临床上防控该病提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 小反刍兽疫 流行病学 临床症状 防治措施
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GZAS20200701分离毒株gp85基因克隆与序列分析 被引量:1
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作者 马燕 温贵兰 +5 位作者 陈广 张喜懿 张小波 巩雪竹 韦秒粘 王兴明 《中国畜禽种业》 2021年第12期45-48,共4页
为了解贵州高脚鸡源的禽白血病病毒的gp85基因变异情况,试验采用ALV p27抗原ELISA试剂盒对贵州省高脚鸡的26份血样进行检测;并采用RT-PCR方法对其中一份血样进行ALV-A/B/J亚型鉴定,然后用gp85基因引物进行RTPCR扩增、克隆及测序分析。... 为了解贵州高脚鸡源的禽白血病病毒的gp85基因变异情况,试验采用ALV p27抗原ELISA试剂盒对贵州省高脚鸡的26份血样进行检测;并采用RT-PCR方法对其中一份血样进行ALV-A/B/J亚型鉴定,然后用gp85基因引物进行RTPCR扩增、克隆及测序分析。结果表明,26份高脚鸡血样ALV p27抗原ELISA检测阳性率为0(0/26);ALV-A/B/J引物RT-PCR扩增的条带为422 bp,与ALV-J目的大小相符;以ALV-J阳性样品为模板,用ALV-J-gp85引物扩增出大小为931 bp左右的产物,命名为GZAS20200701。经克隆测序后与ALV参考株进行比对分析,同源性分析中GZAS20200701与ALV-J亚型中的LYJ195株同源性最高,达99.5%,与ALV-B亚型中的GD08株同源性最低,为48.5%,与A、B、C、D、E、K亚型的同源性为48.5%~50.8%。系统进化树中GZAS20200701与ALV-J中的LYJ15株属于同一个分支,亲缘关系最近,说明GZAS20200701属于ALV-J。试验为贵州高脚鸡ALV-J-gp85基因的遗传变异情况提供数据,丰富了贵州地方品种鸡ALV-J-gp85的资料。 展开更多
关键词 贵州高脚鸡 J亚型禽白血病病毒 GP85基因 序列分析
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一例鸭圆环病毒病的诊断
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作者 蒋灵 温贵兰 张喜懿 《现代畜牧科技》 2021年第5期12-13,共2页
为确定贵州省某养殖场花边鸭的发病原因和死亡原因,本试验通过病毒核酸检测进行病原鉴定。结果显示,仅鸭圆环病毒为阳性。试验结果将为鸭圆环病毒病的防治提供一定的参考依据。
关键词 圆环病毒病 感染 诊断
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