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腺病毒滴度不同测定方法比较被引量：21: 1; 作者孙鹏宇张艳玲 +6 位作者荆玉明张信基张哲欢黎诚耀陈白虹谭万龙李红卫《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期234-238,共5页; 目的将目前测定腺病毒滴度常用的OD260法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变(CPE)法进行比较研究,分析和讨论各种方法的优缺点。方法 4种重组腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad–CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CB... 展开更多; 关键词腺病毒病毒滴度测定壳蛋白免疫法绿色荧光蛋白荧光定量PCR 细胞病变法; 在线阅读下载PDF 职称材料

计算机辅助精液分析精子运动参数在体外受精中的应用被引量：13: 2; 作者袁平庆张哲欢 +3 位作者罗琛全松褚庆军赵善超《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期448-450,共3页; 目的探讨计算机辅助精液分析(CASA)相关运动参数与行IVF治疗后正常受精率、卵裂率及优良胚胎率的关系。方法288例患者按受精情况分为正常受精率≥50%组,正常受精率<50%组;根据卵裂情况分为卵裂率≥90%组及卵裂率<90%组;根据优良... 展开更多; 关键词计算机辅助精液分析试管婴儿正常受精率卵裂率优良胚胎形成率; 在线阅读下载PDF 职称材料

采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库被引量：9: 3; 作者陈振瑞李长征 +5 位作者贺微周烨张哲欢刘叔文谭万龙周辰《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1059-1062,1065,共5页; 目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库。方法分离肾癌患者的外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长Kappa型轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,分别插入载体pDGB-HC-TM,电击转化感... 展开更多; 关键词哺乳动物细胞表面展示肾癌抗体基因库全长人源抗体流式细胞仪; 在线阅读下载PDF 职称材料

哺乳动物细胞表面展示全长类风湿关节炎抗体库的构建被引量：4: 4; 作者周烨陈振瑞 +7 位作者贺微娄海波张哲欢刘叔文姜世勃吴曙光李长征周辰《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1369-1373,共5页; 目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源类风湿关节炎抗体库。方法分离类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长轻链基因和重链可变区基因,分别插入哺乳动物细胞表达载体pDGB-HC-TM,电击转化... 展开更多; 关键词哺乳动物细胞表面展示类风湿关节炎抗体基因库全长人源抗体流式细胞仪; 在线阅读下载PDF 职称材料

Gluc-Fluc双荧光素酶质粒转染MB49细胞后荧光表达特性被引量：3: 5; 作者张信基石小军 +3 位作者孙鹏宇张哲欢付昕阳谭万龙《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期499-503,共5页; 目的利用生物发光成像技术对Gluc-Fluc双荧光素酶质粒转染MB49膀胱癌细胞后双荧光表达量变化特性进行研究。方法用pAAV2neo-Gluc和pAAV2neoCAG-Gluc-2A-Fluc分别转染MB49细胞,利用荧光照度计来研究双荧光素酶质粒中Gluc、Fluc的特性;利... 展开更多; 关键词双荧光素酶转染活体成像膀胱癌; 在线阅读下载PDF 职称材料

采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源膀胱癌特异性抗体基因库被引量：2: 6; 作者蓝开健张哲欢 +7 位作者梁中锟王俊洁娄海波周元平刘叔文李长征谭万龙周辰《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期684-691,共8页; 目的构建大容量且能高效展示于哺乳动物细胞表面的全长人源膀胱癌特异性抗体基因库。方法分离膀胱癌患者的外周血单核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,用RT-PCR方法扩增全套IgG1重链可变区(VH)和Kappa型轻链全长(LCκ)基因,经过相应的限制... 展开更多; 关键词膀胱癌哺乳动物细胞表面展示全长人源抗体流式细胞仪检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名腺病毒滴度不同测定方法比较被引量：21: 1; 作者孙鹏宇张艳玲荆玉明张信基张哲欢黎诚耀陈白虹谭万龙李红卫; 机构南方医科大学南方医院泌尿外科南方医科大学生物技术学院; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期234-238,共5页; 基金国家自然科学基金(81072113) 有害生物控制与资源利用国家重点实验室开放课题(SKLBC2010K05)~~; 文摘目的将目前测定腺病毒滴度常用的OD260法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变(CPE)法进行比较研究,分析和讨论各种方法的优缺点。方法 4种重组腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad–CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CBA-GFP)扩增、纯化后,同时分别用OD260值法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法及CPE法测定病毒滴度,并以壳蛋白免疫法测定结果作为标准,对各种方法所得结果进行比较研究。结果绿色荧光蛋白标记法、CPE法与壳蛋白免疫法同时测定4种腺病毒滴度,其结果无统计学差异(P>0.1)。荧光定量PCR法测定值明显高于壳蛋白免疫法(P<0.05),但与该法测定结果间存在良好的相关性(r=0.965),约为壳蛋白免疫法所测得结果的10倍。OD260法测得结果与壳蛋白免疫法测得结果间则无相关性。结论绿色荧光蛋白标记法与壳蛋白免疫法是测定腺病毒感染性滴度最为快速有效的方法,其结果客观可靠,能真实地反映病毒的实际感染力。荧光定量PCR法测定结果反映的是完整的病毒颗粒数,能够间接反映病毒的感染力,且该方法操作简单,耗时短,同样有较高的实用性。; 关键词腺病毒病毒滴度测定壳蛋白免疫法绿色荧光蛋白荧光定量PCR 细胞病变法; Keywords adenovirus titer immunoassay green fluorescent protein real-time PCR cytopathic effect; 分类号 R373.9 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名计算机辅助精液分析精子运动参数在体外受精中的应用被引量：13: 2; 作者袁平庆张哲欢罗琛全松褚庆军赵善超; 机构南方医科大学南方医院泌尿外科汕头市中心医院生殖医学中心南方医科大学南方医院生殖医学中心; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期448-450,共3页; 基金广东省自然科学基金(10451051501005741) 广东省人口和计划生育委员会资助科研项目(2010240); 文摘目的探讨计算机辅助精液分析(CASA)相关运动参数与行IVF治疗后正常受精率、卵裂率及优良胚胎率的关系。方法288例患者按受精情况分为正常受精率≥50%组,正常受精率<50%组;根据卵裂情况分为卵裂率≥90%组及卵裂率<90%组;根据优良胚胎形成情况分为优良胚胎形成率≥50%组,优良胚胎形成率<50%组,记录取卵前男方2次精液检查精子运动相关参数的均值,用t检验法确定各组间相关参数的均值是否存在统计学差异,从而判定与试管婴儿正常受精率、卵裂率及优良胚胎形成率相关的精子运动参数。结果正常受精率≥50%组VCL、VAP、ALH值明显高于正常受精率<50%组,差异具有统计学意义(P<0.05);卵裂率≥90%组VCL、VAP值明显高于卵裂率<90%组,差异具有统计学意义(P<0.05);优良胚胎形成率≥50%组与优良胚胎形成率<50%组间VCL、VSL、VAP、LIN、STR、WOB、ALH、BCF均无统计学差异(P>0.05)。结论正常受精率、卵裂率与精子运动能力有关;试管婴儿优良胚胎形成率的大小与精子运动参数无关。; 关键词计算机辅助精液分析试管婴儿正常受精率卵裂率优良胚胎形成率; Keywords computer-assisted sperm analysis in vitro fertilization normal fertilization rate cleavage rate excellent embryo rate; 分类号 TP391.77 [自动化与计算机技术—计算机应用技术] R714.8 [医药卫生—妇产科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库被引量：9: 3; 作者陈振瑞李长征贺微周烨张哲欢刘叔文谭万龙周辰; 机构南方医科大学南方医院泌尿外科南方医科大学基因工程研究所南方医科大学药学院抗病毒中心香港Dgen生物技术有限公司; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1059-1062,1065,共5页; 基金香港Dgen Biotech Ltd科研基金; 文摘目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库。方法分离肾癌患者的外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长Kappa型轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,分别插入载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOPO10,构建轻、重链抗体基因库,然后将轻、重链抗体基因库联合转染293T细胞,流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达。结果成功构建IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库,随机挑选的克隆经DNA序列分析显示轻、重链库的序列正确性达90%(9/10)和80%(8/10),流式细胞仪分析显示来自轻、重链库的上述克隆各有7个可检测到相应基因在293T细胞表面的表达,可表达抗体库库容量高达7.5×1010。结论 IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,抗体的多样性为下一步筛选特异性抗体奠定良好的基础。; 关键词哺乳动物细胞表面展示肾癌抗体基因库全长人源抗体流式细胞仪; Keywords mammalian display renal cell carcinoma antibody library full-length fully human antibody flow cytometry; 分类号 R737.11 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名哺乳动物细胞表面展示全长类风湿关节炎抗体库的构建被引量：4: 4; 作者周烨陈振瑞贺微娄海波张哲欢刘叔文姜世勃吴曙光李长征周辰; 机构南方医科大学基因工程研究所南方医院药学院中医药学院复旦大学上海医学院分子病毒学教育部/卫生部重点实验室香港Dgen生物技术有限公司; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1369-1373,共5页; 基金香港Dgen Biotech Ltd科研基金广东省医学科研基金(A2011363); 文摘目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源类风湿关节炎抗体库。方法分离类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长轻链基因和重链可变区基因,分别插入哺乳动物细胞表达载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOPO-10,分别构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,然后将抗体轻链、重链基因库联合转染293T细胞,用流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达。结果成功构建了类风湿关节炎患者来源的IgG1-Kappa型抗体基因库,随机挑选单克隆经DNA序列分析显示轻链库、重链库的序列正确率分别为80%和60%,可表达的抗体库多样性为6.13×1010。结论类风湿关节炎抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,所展示的抗体库具有良好的多样性,能够为下一步筛选特异性抗体奠定基础。; 关键词哺乳动物细胞表面展示类风湿关节炎抗体基因库全长人源抗体流式细胞仪; Keywords mammalian display rheumatoid arthritis antibody library full-length fully human antibody flow cytometry; 分类号 R593.22 [医药卫生—内科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Gluc-Fluc双荧光素酶质粒转染MB49细胞后荧光表达特性被引量：3: 5; 作者张信基石小军孙鹏宇张哲欢付昕阳谭万龙; 机构南方医科大学南方医院泌尿外科; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期499-503,共5页; 基金广东省自然科学基金(9151051501000030); 文摘目的利用生物发光成像技术对Gluc-Fluc双荧光素酶质粒转染MB49膀胱癌细胞后双荧光表达量变化特性进行研究。方法用pAAV2neo-Gluc和pAAV2neoCAG-Gluc-2A-Fluc分别转染MB49细胞,利用荧光照度计来研究双荧光素酶质粒中Gluc、Fluc的特性;利用体外活体成像系统对双荧光素酶质粒Gluc-Fluc转染MB49膀胱癌细胞后荧光表达情况的检测。结果荧光照度计检测结果显示:Gluc随着细胞数的增多或时间的延长,荧光表达量呈相应的增加。Fluc随细胞数目的增多,荧光表达量增加;但随时间的延长,荧光表达量变化不大。体外活体成像结果显示:Gluc-Fluc双荧光素酶质粒已转染入MB49膀胱癌细胞,经过G418加压筛选获得稳定表达的细胞株。结论双荧光素酶基因的构建并未改变Gluc的自身荧光表达特性。转染双荧光素酶质粒的MB49膀胱癌细胞,由于其Fluc在活体成像时的定位优势和Gluc易分泌、检测灵敏度高的定量优势,为后期动态检测肿瘤生长变化以及评价药物治疗效果提供了一个可靠的基石和平台。; 关键词双荧光素酶转染活体成像膀胱癌; Keywords dual luciferase plasmid transfection living imaging bladder cancer; 分类号 R737.14 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源膀胱癌特异性抗体基因库被引量：2: 6; 作者蓝开健张哲欢梁中锟王俊洁娄海波周元平刘叔文李长征谭万龙周辰; 机构南方医科大学南方医院南方医科大学汕头市中心医院南方医科大学药学院南方医科大学中医药学院南方医科大学杭州环捷科技有限公司; 出处《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期684-691,共8页; 基金广东省自然科学基金(S2011010003912,S2012040006972) 教育部高等学校博士学科点专项科研基金(20124433120002) +2 种基金南方医科大学科研启动计划; 文摘目的构建大容量且能高效展示于哺乳动物细胞表面的全长人源膀胱癌特异性抗体基因库。方法分离膀胱癌患者的外周血单核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,用RT-PCR方法扩增全套IgG1重链可变区(VH)和Kappa型轻链全长(LCκ)基因,经过相应的限制性内切酶酶切后分别插入pDGB-HC-TM载体,分别构建膀胱癌特异性的抗体重链基因库和轻链基因库(一级抗体库)。随机挑取20个单克隆测定抗体基因序列,并瞬时转染FCHO细胞,结合流式细胞仪检测细胞表面抗体的表达。将上述构建好的轻重链基因库通过4片段连接方法插入双表达载体pDGB4,构建二级抗体库,转染FCHO后用流式细胞仪检测细胞表面抗体表达。结果分别成功构建了膀胱癌特异性的重链基因库和轻链基因库,随机挑取的轻重链单克隆各有7个和9个含有正确的抗体基因编码序列,且能展示于哺乳动物细胞表面,理论库容量达到3.32×10^(11)[(1.7×10~6×70%)×(3.1×10~5×90%)]。成功构建了膀胱癌二级抗体库,库容量为9×10~5。结论利用哺乳动物细胞表面展示技术,我们成功构建了膀胱癌特异性的全长人源抗体基因库,一级抗体库的库容量达到3.32×10^(11),二级抗体库库容量达到9×10~5,为下一步筛选特异性、高亲和力抗膀胱癌抗体奠定了基础。; 关键词膀胱癌哺乳动物细胞表面展示全长人源抗体流式细胞仪检测; Keywords bladder cancer mammalian cell display full-length human antibody flow cytometry; 分类号 R737.14 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	腺病毒滴度不同测定方法比较	孙鹏宇张艳玲荆玉明张信基张哲欢黎诚耀陈白虹谭万龙李红卫	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	21	在线阅读下载PDF 职称材料
2	计算机辅助精液分析精子运动参数在体外受精中的应用	袁平庆张哲欢罗琛全松褚庆军赵善超	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2013	13	在线阅读下载PDF 职称材料
3	采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库	陈振瑞李长征贺微周烨张哲欢刘叔文谭万龙周辰	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2010	9	在线阅读下载PDF 职称材料
4	哺乳动物细胞表面展示全长类风湿关节炎抗体库的构建	周烨陈振瑞贺微娄海波张哲欢刘叔文姜世勃吴曙光李长征周辰	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	4	在线阅读下载PDF 职称材料
5	Gluc-Fluc双荧光素酶质粒转染MB49细胞后荧光表达特性	张信基石小军孙鹏宇张哲欢付昕阳谭万龙	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	3	在线阅读下载PDF 职称材料
6	采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源膀胱癌特异性抗体基因库	蓝开健张哲欢梁中锟王俊洁娄海波周元平刘叔文李长征谭万龙周辰	《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2013	2	在线阅读下载PDF 职称材料