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猪源A型产气荚膜梭菌β2毒素与宿主细胞互作蛋白的筛选鉴定
被引量：
4
1
作者
曾秀
张兰桥
+3 位作者
周姣
王婧祺
戴益民
张锦华
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第12期1204-1209,共6页
产气荚膜梭菌产生的β2毒素在仔猪肠炎中起着重要作用,为研究该毒素侵入宿主细胞的作用机制,本研究以β2为诱饵蛋白,将其与酿酒酵母转录因子GAL4的BD(DNA binding domain)融合表达,利用猪肠上皮细胞系IPEC-1的cDNA文库与GAL4的AD区(Acti...
产气荚膜梭菌产生的β2毒素在仔猪肠炎中起着重要作用,为研究该毒素侵入宿主细胞的作用机制,本研究以β2为诱饵蛋白,将其与酿酒酵母转录因子GAL4的BD(DNA binding domain)融合表达,利用猪肠上皮细胞系IPEC-1的cDNA文库与GAL4的AD区(Activation domain)融合表达,通过酵母双杂交系统筛选鉴定与β2毒素相互作用的猪肠上皮细胞蛋白。筛选得到的阳性转化子经提取质粒和测序后,比对其所包含的编码蛋白序列,得到4个潜在的与β2毒素存在相互作用的细胞蛋白,分别为S20、LGALS1、L12和Atrophin-1。其中S20、L12和Atrophin-1是位于细胞内的核蛋白,而LGALS1是一种存在于细胞膜外侧的半乳糖凝集素,可能是毒素的作用位点。对LGALS1进行回交验证,结果显示其C端与β2毒素的相互作用强于其完整蛋白与β2毒素的相互作用。本研究结果对研究β2毒素的致病机制奠定了基础。
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关键词
β2毒素
产气荚膜梭菌
IPEC-1
酵母双杂交系统
半乳糖凝集素(LGALS1)
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职称材料
胞内劳森菌鞭毛素蛋白FliC与猪肠上皮细胞互作蛋白的研究
2
作者
于振兴
张兰桥
+3 位作者
杨莹莹
张锦华
何后军
戴益民
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第12期1324-1329,共6页
为鉴定胞内劳森菌鞭毛蛋白FliC与猪肠上皮细胞中的互作蛋白,本研究利用PCR方法从回肠炎疫苗提取的DNA中扩增胞内劳森菌鞭毛素基因LI0710,并将其克隆至原核表达载体pET32a(+)中构建重组质粒pET32aLI0710,经双酶切及测序鉴定正确后转化大...
为鉴定胞内劳森菌鞭毛蛋白FliC与猪肠上皮细胞中的互作蛋白,本研究利用PCR方法从回肠炎疫苗提取的DNA中扩增胞内劳森菌鞭毛素基因LI0710,并将其克隆至原核表达载体pET32a(+)中构建重组质粒pET32aLI0710,经双酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导并经SDS-PAGE检测。结果显示,获得可溶且与硫氧还蛋白-6×His-S标签(Trx-His-S)融合表达的重组FliC蛋白(Trx-His-S-FliC)。采用镍柱亲和层析法纯化Trx-His-S和Trx-His-S-FliC,并分别与猪肠上皮细胞(IPEC-J2)裂解液孵育后,利用anti-His抗体进行免疫共沉淀试验(Co-IP),并对沉淀物利用液质联用串联质谱(LC/MS/MS)技术分析与FliC互作的宿主蛋白,利用Proteome Discoverer 1.4软件在UniProtKB/Swiss-Prot数据库中对互作的宿主蛋白进行肽指纹图谱分析。Co-IP结果显示,检测到了多个与Trx-His-S-FliC互作的宿主蛋白,且通过LC/MS/MS技术共鉴定到50个与FliC互作的蛋白。这些互作蛋白包括蛋白酶、多个核糖体蛋白和线粒体蛋白,广泛参与了细胞质糖酵解、氨基酸代谢、ATP跨膜转运等功能。为了证明质谱数据的可靠性,选择与FliC互作最强的胰蛋白酶经western blot验证,结果显示,胰蛋白酶与FliC蛋白确实存在互作,表明质谱数据可靠。本研究首次鉴定到多个与胞内劳森菌鞭毛蛋白FliC互作的宿主蛋白,为研究FliC蛋白的功能奠定了基础。
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关键词
增生性肠炎
胞内劳森菌
鞭毛素蛋白FliC
免疫共沉淀
病原菌-宿主相互作用
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职称材料
题名
猪源A型产气荚膜梭菌β2毒素与宿主细胞互作蛋白的筛选鉴定
被引量：
4
1
作者
曾秀
张兰桥
周姣
王婧祺
戴益民
张锦华
机构
江西农业大学动物科学技术学院
江西农业大学生物科学与工程学院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第12期1204-1209,共6页
基金
国家自然科学基金(31860694、31660720)。
文摘
产气荚膜梭菌产生的β2毒素在仔猪肠炎中起着重要作用,为研究该毒素侵入宿主细胞的作用机制,本研究以β2为诱饵蛋白,将其与酿酒酵母转录因子GAL4的BD(DNA binding domain)融合表达,利用猪肠上皮细胞系IPEC-1的cDNA文库与GAL4的AD区(Activation domain)融合表达,通过酵母双杂交系统筛选鉴定与β2毒素相互作用的猪肠上皮细胞蛋白。筛选得到的阳性转化子经提取质粒和测序后,比对其所包含的编码蛋白序列,得到4个潜在的与β2毒素存在相互作用的细胞蛋白,分别为S20、LGALS1、L12和Atrophin-1。其中S20、L12和Atrophin-1是位于细胞内的核蛋白,而LGALS1是一种存在于细胞膜外侧的半乳糖凝集素,可能是毒素的作用位点。对LGALS1进行回交验证,结果显示其C端与β2毒素的相互作用强于其完整蛋白与β2毒素的相互作用。本研究结果对研究β2毒素的致病机制奠定了基础。
关键词
β2毒素
产气荚膜梭菌
IPEC-1
酵母双杂交系统
半乳糖凝集素(LGALS1)
Keywords
beta2 toxin
Clostridium Perfringen
IPEC-1
yeast two-hybrid system
LGALS1
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
胞内劳森菌鞭毛素蛋白FliC与猪肠上皮细胞互作蛋白的研究
2
作者
于振兴
张兰桥
杨莹莹
张锦华
何后军
戴益民
机构
江西农业大学动物科学技术学院
江西农业大学生物科学与工程学院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第12期1324-1329,共6页
基金
国家自然科学基金(31660720)。
文摘
为鉴定胞内劳森菌鞭毛蛋白FliC与猪肠上皮细胞中的互作蛋白,本研究利用PCR方法从回肠炎疫苗提取的DNA中扩增胞内劳森菌鞭毛素基因LI0710,并将其克隆至原核表达载体pET32a(+)中构建重组质粒pET32aLI0710,经双酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导并经SDS-PAGE检测。结果显示,获得可溶且与硫氧还蛋白-6×His-S标签(Trx-His-S)融合表达的重组FliC蛋白(Trx-His-S-FliC)。采用镍柱亲和层析法纯化Trx-His-S和Trx-His-S-FliC,并分别与猪肠上皮细胞(IPEC-J2)裂解液孵育后,利用anti-His抗体进行免疫共沉淀试验(Co-IP),并对沉淀物利用液质联用串联质谱(LC/MS/MS)技术分析与FliC互作的宿主蛋白,利用Proteome Discoverer 1.4软件在UniProtKB/Swiss-Prot数据库中对互作的宿主蛋白进行肽指纹图谱分析。Co-IP结果显示,检测到了多个与Trx-His-S-FliC互作的宿主蛋白,且通过LC/MS/MS技术共鉴定到50个与FliC互作的蛋白。这些互作蛋白包括蛋白酶、多个核糖体蛋白和线粒体蛋白,广泛参与了细胞质糖酵解、氨基酸代谢、ATP跨膜转运等功能。为了证明质谱数据的可靠性,选择与FliC互作最强的胰蛋白酶经western blot验证,结果显示,胰蛋白酶与FliC蛋白确实存在互作,表明质谱数据可靠。本研究首次鉴定到多个与胞内劳森菌鞭毛蛋白FliC互作的宿主蛋白,为研究FliC蛋白的功能奠定了基础。
关键词
增生性肠炎
胞内劳森菌
鞭毛素蛋白FliC
免疫共沉淀
病原菌-宿主相互作用
Keywords
proliferative enteropathy
Lawsonia intracellularis
flagellin protein FliC
Co-immunoprecipitation
pathogen-host interaction
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪源A型产气荚膜梭菌β2毒素与宿主细胞互作蛋白的筛选鉴定
曾秀
张兰桥
周姣
王婧祺
戴益民
张锦华
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
胞内劳森菌鞭毛素蛋白FliC与猪肠上皮细胞互作蛋白的研究
于振兴
张兰桥
杨莹莹
张锦华
何后军
戴益民
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
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