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一株草鱼呼肠孤病毒弱毒株的分离、鉴定及免疫原性初步分析 被引量:32
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作者 曾伟伟 王庆 +4 位作者 刘永奎 张乐生 刘宝芹 石存斌 吴淑勤 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期790-795,共6页
从江西南昌患出血病草鱼体内分离出的草鱼病毒(暂命名为JX09-01)能使草鱼肾脏细胞(CIK)、草鱼肝细胞(L8824)、草鱼吻端成纤维细胞(PSF)产生明显的细胞病变效应(CPE)。感染CIK细胞固定后经电镜观察,发现细胞质内有大量病毒聚集,形态和排... 从江西南昌患出血病草鱼体内分离出的草鱼病毒(暂命名为JX09-01)能使草鱼肾脏细胞(CIK)、草鱼肝细胞(L8824)、草鱼吻端成纤维细胞(PSF)产生明显的细胞病变效应(CPE)。感染CIK细胞固定后经电镜观察,发现细胞质内有大量病毒聚集,形态和排列方式与已报道的草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)相似。针对GCRV 873株S6基因设计的简并引物可以从病料组织和感染细胞中扩增出目的条带,而针对GCRV HZ08株S6基因设计特异性引物未能扩增出目的条带。对JX09-01株的S6全基因进行序列分析表明,其核苷酸序列同GCRV 873株和HZ08株的同源性分别是99.3%和30.4%,推导出的氨基酸序列同源性分别是98.6%和30%,说明草鱼病毒JX09-01株为草鱼呼肠孤病毒。用JX09-01株接种当年8—10 cm左右的草鱼,没有明显的临床症状,不能致草鱼死亡。用传代至15代的CIK细胞病毒液进行免疫保护试验,结果显示其对强毒株的免疫保护率达到86.7%。实验结果初步显示,新分离到的JX09-01为草鱼呼肠孤病毒弱毒株,可作为弱毒疫苗的候选毒株。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 分离 鉴定 序列分析 免疫原性
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草鱼呼肠孤病毒JX-0901株FQ-PCR检测方法的建立及其在定量分析中的应用 被引量:5
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作者 刘宝芹 曾伟伟 +5 位作者 王庆 张乐生 王英英 石存斌 李华 吴淑勤 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期139-143,共5页
根据GCRV JX-0901株S7基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了针对GCRV JX-0901株病毒的TaqMan实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并利用FQ-PCR方法对该毒株在不同鱼类细胞中的增殖情况和不同温度条件下的稳定性进行了定量分析。... 根据GCRV JX-0901株S7基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了针对GCRV JX-0901株病毒的TaqMan实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并利用FQ-PCR方法对该毒株在不同鱼类细胞中的增殖情况和不同温度条件下的稳定性进行了定量分析。结果显示,建立的FQ-PCR方法的Ct值与标准品在1.0×101~1.0×108拷贝/μL浓度范围呈良好的线性关系,R2高达0.999;该方法有较好的敏感性和特异性,最低模板检出量为10个拷贝,只能特异地检测出GCRV JX-0901,不能检出其他鱼类常见病毒。该毒株能在10种常见鱼类细胞中增殖,其中在L8824细胞中的增殖量最大,含量达到4.1933×107拷贝/μL;此外,该毒株对温度敏感性较弱,病毒在48、56℃条件下放置96 h后才失去对CIK细胞感染性,而在4、15、28、37℃条件下放置32d,-20℃条件下储存2年仍具有较高的含量和较强的感染性。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 JX-0901株 FQ-PCR 定量分析
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草鱼呼肠孤病毒HZ08株S4基因序列分析 被引量:4
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作者 曾伟伟 王庆 +5 位作者 张超 张乐生 刘宝芹 刘永奎 石存斌 吴淑勤 《生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第2期12-17,共6页
草鱼呼肠孤病毒HZ08株是本实验室从患出血病草鱼体内分离到的一个新毒株,已完成部分基因序列的分析,其氨基酸序列的同源性和873株相比,仅为20%~30%之间。因序列差异较大,无法通过设计特异性引物来扩增和分析其基因序列,采用单引物扩增... 草鱼呼肠孤病毒HZ08株是本实验室从患出血病草鱼体内分离到的一个新毒株,已完成部分基因序列的分析,其氨基酸序列的同源性和873株相比,仅为20%~30%之间。因序列差异较大,无法通过设计特异性引物来扩增和分析其基因序列,采用单引物扩增技术,对HZ08株S4基因进行序列分析表明:S4全长为2263 bp,最大的ORF编码717个氨基酸,推导出其表达的蛋白约为79 kDa。正如其他基因节段,基因末端也含有保守碱基序列5'(GUAAUUU…UUCAUC),3'。S4基因推导的氨基酸序列与同宿主的其他呼肠孤病毒的非结构蛋白NS1同源性最大,其次是和哺乳动物正呼肠孤病毒的非结构蛋白mu-NS以及禽呼肠孤病毒非结构蛋白NS1同源性较大,表明S4可能表达细胞骨架相关蛋白。基于S4推导出的氨基酸序列构建的系统进化树HZ08株单独作为一个分支,与同宿主的其他呼肠孤病毒亲缘关系比较近,而与其他呼肠孤病毒则相对较远。这提示HZ08株可能是多个毒株的遗传信息经长期的遗传进化而得,综合其它已知序列信息,推测HZ08株可能为呼肠孤病毒的一个新成员。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 S4基因 序列分析 遗传进化树
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羟基磷灰石糊剂充填感染根管临床疗效观察 被引量:4
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作者 张乐生 郭军 朱贤杰 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期294-295,共2页
羟基磷灰石糊剂充填感染根管临床疗效观察扬州市人民医院口腔科张乐生,郭军,朱贤杰我科自1987年开始将羟基磷灰石等材料制成糊剂,应用于根尖周病治疗的根管充填,获得满意效果,现将治疗结果报告如下:1临床资料和方法1.1适... 羟基磷灰石糊剂充填感染根管临床疗效观察扬州市人民医院口腔科张乐生,郭军,朱贤杰我科自1987年开始将羟基磷灰石等材料制成糊剂,应用于根尖周病治疗的根管充填,获得满意效果,现将治疗结果报告如下:1临床资料和方法1.1适应证:适用于各类根尖感染性病变。1... 展开更多
关键词 羟基磷灰石 糊剂 根管疗法 疗效
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慢性鸡新城疫的流行及其预防
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作者 张乐生 张华 《畜牧兽医科技信息》 2021年第9期199-199,共1页
随着养鸡数量的增加,疾病发生的情况也随之增多,新城疫是其中比较常发且危害严重的疾病,而慢性新城疫的危害也比较严重,应注意了解和掌握相应的有效预防措施。
关键词 慢性鸡新城疫 流行 预防
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猪附红细胞体病的诊断与防治 被引量:5
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作者 张华 张乐生 《畜牧兽医科技信息》 2021年第9期158-158,共1页
附红细胞体病也称附红体病,病原主要就是附红细胞体,可以在人和动物的红细胞表面、血浆及骨髓中寄生,属于人畜共患传染病,临床特征就是出现高热、贫血症状,并且伴随有黄疸的变化。临床生产中猪感染的情况非常多见,所以应该重视对猪附红... 附红细胞体病也称附红体病,病原主要就是附红细胞体,可以在人和动物的红细胞表面、血浆及骨髓中寄生,属于人畜共患传染病,临床特征就是出现高热、贫血症状,并且伴随有黄疸的变化。临床生产中猪感染的情况非常多见,所以应该重视对猪附红体病传染的认识,并且掌握相应有效的防治措施,供参考。 展开更多
关键词 附红细胞体病 诊断 防治
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