目的探讨内质网自噬在大鼠胃窦Cajal间质细胞(ICCs)内质网应激(ERS)过程中的作用,为改善胃动力障碍提供新靶标。方法采用酶解法分离大鼠胃窦ICCs并行免疫荧光鉴定,使用衣霉素(TM)诱导ICCs构建ERS模型,三甲基腺嘌呤(3-MA)阻断自噬,雷帕霉...目的探讨内质网自噬在大鼠胃窦Cajal间质细胞(ICCs)内质网应激(ERS)过程中的作用,为改善胃动力障碍提供新靶标。方法采用酶解法分离大鼠胃窦ICCs并行免疫荧光鉴定,使用衣霉素(TM)诱导ICCs构建ERS模型,三甲基腺嘌呤(3-MA)阻断自噬,雷帕霉素(Rapa)促进自噬。随机将细胞分为4组并分别给予不同的处理,ICCs组正常培养,ERS组给予2μg/m L TM处理ICCs,3-MA组给予2μg/m L TM和4μmol/m L 3-MA联合作用,Rapa组给予2μg/m L TM和2μmol/m L Rapa联合作用,每组作用时间均为6 h;通过实时荧光定量PCR法检测ERS相关因子GRP78、自噬相关因子LC3B的mRNA表达;CCK-8法检测各组细胞活性。结果成功分离并鉴定ICCs。与ICCs组比较,ERS组、3-MA组和Rapa组的GRP78和LC3B表达均升高(P均<0.05),细胞活性降低(P均<0.05)。与ERS组比较,3-MA组GRP78表达升高(P<0.05),LC3B表达、ICCs细胞活性降低(P均<0.05);Rapa组GRP78表达降低(P<0.05),LC3B表达、ICCs细胞活性升高(P均<0.05)。结论 ICCs的ERS过程伴发内质网自噬,内质网自噬可减轻ICCs的ERS损伤作用。展开更多
文摘目的探讨内质网自噬在大鼠胃窦Cajal间质细胞(ICCs)内质网应激(ERS)过程中的作用,为改善胃动力障碍提供新靶标。方法采用酶解法分离大鼠胃窦ICCs并行免疫荧光鉴定,使用衣霉素(TM)诱导ICCs构建ERS模型,三甲基腺嘌呤(3-MA)阻断自噬,雷帕霉素(Rapa)促进自噬。随机将细胞分为4组并分别给予不同的处理,ICCs组正常培养,ERS组给予2μg/m L TM处理ICCs,3-MA组给予2μg/m L TM和4μmol/m L 3-MA联合作用,Rapa组给予2μg/m L TM和2μmol/m L Rapa联合作用,每组作用时间均为6 h;通过实时荧光定量PCR法检测ERS相关因子GRP78、自噬相关因子LC3B的mRNA表达;CCK-8法检测各组细胞活性。结果成功分离并鉴定ICCs。与ICCs组比较,ERS组、3-MA组和Rapa组的GRP78和LC3B表达均升高(P均<0.05),细胞活性降低(P均<0.05)。与ERS组比较,3-MA组GRP78表达升高(P<0.05),LC3B表达、ICCs细胞活性降低(P均<0.05);Rapa组GRP78表达降低(P<0.05),LC3B表达、ICCs细胞活性升高(P均<0.05)。结论 ICCs的ERS过程伴发内质网自噬,内质网自噬可减轻ICCs的ERS损伤作用。
