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用于三维电镜及X射线显微镜的完整小鼠耳蜗块染方法
被引量：
1
1
作者
丁旭
王方方
+5 位作者
王皓煜
梁雅坤
常海双
黄治物
华云峰
吴皓
《听力学及言语疾病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第3期321-325,共5页
目的优化大尺寸脑组织样品的制备方法,将其用于小鼠耳蜗,获得适用于三维电镜和X射线显微镜成像的样品,用于耳蜗组织超微结构的病理及相关听觉疾病的研究。方法取3只野生型成年CBA/Ca小鼠耳蜗,经含0.08 M二甲胂酸盐缓冲液、2%多聚甲醛、2...
目的优化大尺寸脑组织样品的制备方法,将其用于小鼠耳蜗,获得适用于三维电镜和X射线显微镜成像的样品,用于耳蜗组织超微结构的病理及相关听觉疾病的研究。方法取3只野生型成年CBA/Ca小鼠耳蜗,经含0.08 M二甲胂酸盐缓冲液、2%多聚甲醛、2.5%戊二醛的4℃混合固定液灌注固定,添加了5%乙二胺四乙酸的混合液中低温短暂脱钙,采用还原性锇块染和铅染、脱水及树脂包埋。根据X射线显微镜和扫描电镜在不同尺度下的成像质量,对制备过程中步骤及时长进行了优化。结果X射线显微镜下首次获得了具有毛细胞分辨率的完整小鼠耳蜗三维结构样品,其具有高染色对比度和均一性;扫描电镜及透射电镜下,样品中各结构,包括听神经髓鞘、传入传出突触、毛细胞静纤毛、线粒体结构形态均清晰可见。结论优化的完整小鼠耳蜗电镜块染样品制备方法使介观到微观的耳蜗三维超微结构的研究成为可能,为耳科疾病的病理结构研究提供了新方法。
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关键词
耳蜗
超微结构
重金属块染
电镜
X射线显微镜
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职称材料
基于高压冷冻固定的脑组织体电镜样品制备方法
2
作者
王方方
梁雅坤
+2 位作者
朱宏
华云峰
常海双
《电子显微学报》
2025年第5期596-602,共7页
高压冷冻(high pressure freezing,HPF)是生物样品固定的前沿方法,制备的样品主要用于电子显微镜观察。相比于传统化学固定,高压冷冻固定的样品被认为更接近其生理状态,这对于细胞超微结构的研究至关重要。本研究尝试对快速分离的小鼠...
高压冷冻(high pressure freezing,HPF)是生物样品固定的前沿方法,制备的样品主要用于电子显微镜观察。相比于传统化学固定,高压冷冻固定的样品被认为更接近其生理状态,这对于细胞超微结构的研究至关重要。本研究尝试对快速分离的小鼠大脑皮层组织进行高压冷冻固定,并进行冷冻替代、重金属染色和树脂包埋。通过连续超薄切片以及电子断层扫描成像,首次获得了接近在体状态的完整神经突触重构。实验结果表明,该样品制备方案获取脑组织大尺度体电镜数据具有可行性,为后续的神经连接组学以及突触形态组学研究提供了坚实、可靠的技术支撑。
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关键词
高压冷冻固定
脑组织样品制备
连续超薄切片
电子断层扫描
神经突触
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职称材料
题名
用于三维电镜及X射线显微镜的完整小鼠耳蜗块染方法
被引量：
1
1
作者
丁旭
王方方
王皓煜
梁雅坤
常海双
黄治物
华云峰
吴皓
机构
上海交通大学医学院附属第九人民医院耳鼻咽喉头颈外科
上海交通大学医学院耳科学研究所
上海市耳鼻疾病转化医学重点实验室
上海精准医学研究院
出处
《听力学及言语疾病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第3期321-325,共5页
基金
国家自然科学基金(81800901)。
文摘
目的优化大尺寸脑组织样品的制备方法,将其用于小鼠耳蜗,获得适用于三维电镜和X射线显微镜成像的样品,用于耳蜗组织超微结构的病理及相关听觉疾病的研究。方法取3只野生型成年CBA/Ca小鼠耳蜗,经含0.08 M二甲胂酸盐缓冲液、2%多聚甲醛、2.5%戊二醛的4℃混合固定液灌注固定,添加了5%乙二胺四乙酸的混合液中低温短暂脱钙,采用还原性锇块染和铅染、脱水及树脂包埋。根据X射线显微镜和扫描电镜在不同尺度下的成像质量,对制备过程中步骤及时长进行了优化。结果X射线显微镜下首次获得了具有毛细胞分辨率的完整小鼠耳蜗三维结构样品,其具有高染色对比度和均一性;扫描电镜及透射电镜下,样品中各结构,包括听神经髓鞘、传入传出突触、毛细胞静纤毛、线粒体结构形态均清晰可见。结论优化的完整小鼠耳蜗电镜块染样品制备方法使介观到微观的耳蜗三维超微结构的研究成为可能,为耳科疾病的病理结构研究提供了新方法。
关键词
耳蜗
超微结构
重金属块染
电镜
X射线显微镜
Keywords
Cochlear
Ultrastructure
Heavy metal en-bloc staining
Electron microscopy
X-ray microscopy
分类号
R764 [医药卫生—耳鼻咽喉科]
R-332 [医药卫生]
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职称材料
题名
基于高压冷冻固定的脑组织体电镜样品制备方法
2
作者
王方方
梁雅坤
朱宏
华云峰
常海双
机构
上海交通大学医学院
出处
《电子显微学报》
2025年第5期596-602,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.82171133)。
文摘
高压冷冻(high pressure freezing,HPF)是生物样品固定的前沿方法,制备的样品主要用于电子显微镜观察。相比于传统化学固定,高压冷冻固定的样品被认为更接近其生理状态,这对于细胞超微结构的研究至关重要。本研究尝试对快速分离的小鼠大脑皮层组织进行高压冷冻固定,并进行冷冻替代、重金属染色和树脂包埋。通过连续超薄切片以及电子断层扫描成像,首次获得了接近在体状态的完整神经突触重构。实验结果表明,该样品制备方案获取脑组织大尺度体电镜数据具有可行性,为后续的神经连接组学以及突触形态组学研究提供了坚实、可靠的技术支撑。
关键词
高压冷冻固定
脑组织样品制备
连续超薄切片
电子断层扫描
神经突触
Keywords
high⁃pressure freezing fixation
preparation of brain tissue
serial sectioning
electron tomography
synapse
分类号
Q24 [生物学]
Q-336 [生物学—细胞生物学]
Q952
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
用于三维电镜及X射线显微镜的完整小鼠耳蜗块染方法
丁旭
王方方
王皓煜
梁雅坤
常海双
黄治物
华云峰
吴皓
《听力学及言语疾病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基于高压冷冻固定的脑组织体电镜样品制备方法
王方方
梁雅坤
朱宏
华云峰
常海双
《电子显微学报》
2025
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