羊源牛恶性卡他热的病理学观察及病原核酸检测 被引量：2

1

作者 申丹妮 金山 +3 位作者 娜仁其木格 希尼尼根 海鹰 吉林台 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期52-59,共8页

羊源恶性卡他热(SA-MCF)是一种由绵羊γ疱疹病毒2型(OvHV-2)引起的可致反刍动物死亡的淋巴增生性疾病。通过病理学检查和病原体核酸检测,对发生于内蒙古鄂尔多斯市某牧场的疑似恶性卡他热的2头病牛进行诊断,同时对同群饲养的绵羊鼻拭子... 羊源恶性卡他热(SA-MCF)是一种由绵羊γ疱疹病毒2型(OvHV-2)引起的可致反刍动物死亡的淋巴增生性疾病。通过病理学检查和病原体核酸检测,对发生于内蒙古鄂尔多斯市某牧场的疑似恶性卡他热的2头病牛进行诊断,同时对同群饲养的绵羊鼻拭子进行病原体核酸检测。结果表明,2头病死牛生前高热,并伴有失明流泪,鼻腔和口腔黏膜糜烂等头部黏膜炎症,病理剖检后发现呼吸道和消化道黏膜潮红脱落形成假膜等病理变化,具有典型的恶性卡他热病特征。组织病理学显示,病死牛伴随有非化脓性脑炎,重要的是淋巴结、肺脏、肾脏、脾脏等多个器官组织出现明显的小血管坏死性炎症。病原体核酸检测结果显示,2头牛的多种组织和绵羊鼻拭子中均扩增出OvHV-2病毒的ORF75 DNA片段,这些发现表明2头病死牛患有由OvHV-2引起的恶性卡他热,且极有可能是羊源OvHV-2传播到了牛。 展开更多

关键词 恶性卡他热 绵羊γ疱疹病毒2型 诊断 组织病理学

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牛源副结核分枝杆菌MAP3732c基因的原核表达与多克隆抗体的制备

2

作者 马聿田 李阳 +4 位作者 李晓宇 其勒木格 吉林台 张文彦 希尼尼根 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期42-49,共8页

为表达副结核分枝杆菌MAP3732c蛋白,研究构建原核表达质粒pET28a-MAP3732c,诱导表达鉴定后采用His标签亲和层析纯化获得MAP3732c重组蛋白,多次免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA方法检测其抗体效价。结果表明,成功构建克隆重... 为表达副结核分枝杆菌MAP3732c蛋白,研究构建原核表达质粒pET28a-MAP3732c,诱导表达鉴定后采用His标签亲和层析纯化获得MAP3732c重组蛋白,多次免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA方法检测其抗体效价。结果表明,成功构建克隆重组质粒T1-MAP3732c与表达重组质粒p ET28a-MAP3732c;在IPTG终浓度为0.5 mmol·L^(-1)、37℃条件下成功诱导MAP3732c重组蛋白表达;SDS-PAGE结果表明,MAP3732c重组蛋白大小约为28 ku,且以包涵体形式存在;Western blot鉴定结果显示,重组蛋白与His抗体和牛源副结核病阳性血清均有良好免疫反应、阴性血清无非特异性结合;ELISA方法检测结果显示,抗MAP3732c多克隆抗体效价为1:204800。研究为副结核分枝杆菌MAP3732c蛋白免疫原性分析及副结核病检测方法建立提供理论参考。 展开更多

关键词 副结核分枝杆菌 MAP3732c 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体

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猪IL-2真核表达质粒构建及对PRRSV-ORF5基因疫苗免疫佐剂作用的研究 被引量：7

3

作者 希尼尼根 程安春 +7 位作者 汪铭书 陈希文 豆文波 李雪梅 刘伍梅 张平英 刘菲 陈孝跃 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1003-1008,共6页

本研究应用真核表达载体pcDNA3.1(+)和猪白细胞介素2(IL-2)基因成功构建了IL-2的真核表达质粒(pcDNA-IL-2),探讨了pcDNA-IL-2作为分子免疫佐剂对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5)免疫猪的增强作用。经间接EL... 本研究应用真核表达载体pcDNA3.1(+)和猪白细胞介素2(IL-2)基因成功构建了IL-2的真核表达质粒(pcDNA-IL-2),探讨了pcDNA-IL-2作为分子免疫佐剂对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5)免疫猪的增强作用。经间接ELISA法、MTT比色法及流式细胞仪分别对pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5共同免疫猪、pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5单独免疫猪、pcDNA3.1(+)空载体和灭菌水免疫对照猪的血清抗PRRSV抗体IgG、外周血T淋巴细胞的增殖活性、CD4+和CD8+细胞比例进行检测,结果表明pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5共同免疫猪的IgG含量、外周血T淋巴细胞的增殖活性、CD4+和CD8+细胞比例与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5单独免疫猪相比有显著差异(P<0.05)。说明pcDNA-IL-2能显著增强pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5基因疫苗免疫猪的体液和细胞免疫应答,可作为PRRSV基因疫苗的良好佐剂。 展开更多

关键词 IL-2 pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5基因疫苗 免疫

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黑白花奶牛白细胞介素-2基因的克隆和表达 被引量：8

4

作者 希尼尼根 申宏旺 关平原 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第35期15389-15390,15404,共3页

[目的]克隆牛白细胞介素-2基因(IL-2),并观察其在原核细胞中的表达。[方法]应用RT-PCR技术从黑白花奶牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增编码牛IL-2基因,并将其克隆到pGEX-2T原核表达质粒中,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析。... [目的]克隆牛白细胞介素-2基因(IL-2),并观察其在原核细胞中的表达。[方法]应用RT-PCR技术从黑白花奶牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增编码牛IL-2基因,并将其克隆到pGEX-2T原核表达质粒中,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析。[结果]通过RT-PCR扩增获得500 bp的目的片段,所克隆的IL-2基因在原核细胞中成功表达,表达产物为分子量约43 kD的融合蛋白。[结论]该研究为IL-2基因的进一步研究提供了理论依据和物质基础。 展开更多

关键词 黑白花奶牛 白细胞介素-2 克隆 原核表达

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猪繁殖与呼吸综合征的研究进展 被引量：20

5

作者 希尼尼根 程安春 汪铭书 《养猪》 2004年第4期36-38,共3页

关键词 猪繁殖与呼吸综合征 病毒 PRRSV 病原学 流行病学 病理变化

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不同剂量猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗肌肉注射诱导仔猪细胞免疫的研究

6

作者 希尼尼根 程安春 +7 位作者 汪铭书 陈希文 豆文波 李雪梅 刘伍梅 张平英 刘菲 陈孝跃 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期296-299,304,共5页

将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5)分别以200μg、100μg和50μg3种剂量肌肉注射免疫21日龄仔猪,同时设空载体对照和生理盐水空白对照。于免疫后7d、15d、30d、45d、60d和70d采用流式细胞仪(FACS)和... 将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5)分别以200μg、100μg和50μg3种剂量肌肉注射免疫21日龄仔猪,同时设空载体对照和生理盐水空白对照。于免疫后7d、15d、30d、45d、60d和70d采用流式细胞仪(FACS)和淋巴细胞增殖试验(MTT法)分别对免疫猪外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞数和淋巴细胞的转化功能进行检测。结果表明3个不同剂量的pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5基因疫苗免疫仔猪后均能诱导产生良好的细胞免疫应答,实验组与对照组比较差异极显著(p<0.01)或显著(p<0.05)。大剂量基因疫苗免疫仔猪的外周血T淋巴细胞的增殖能力及CD4+、CD8+百分含量高于中剂量和小剂量基因疫苗免疫的仔猪,表现出一定的量效关系。 展开更多

关键词 细胞免疫 PRRSV OFR5 基因疫苗

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基因枪与肌肉注射猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗诱导小鼠体液及细胞免疫的比较研究 被引量：10

7

作者 陈希文 程安春 +6 位作者 汪铭书 刘菲 希尼尼根 豆文波 刘伍梅 李雪梅 张平英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期812-818,共7页

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-ORF5)以不同免疫途径(基因枪和肌肉注射)免疫BALB/c小鼠,以PBS和空载质粒pcDNA3.1(+)为对照,采用流式细胞仪(FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法)及间接ELISA试验分别对小鼠外周血中CD4+、C... 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-ORF5)以不同免疫途径(基因枪和肌肉注射)免疫BALB/c小鼠,以PBS和空载质粒pcDNA3.1(+)为对照,采用流式细胞仪(FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法)及间接ELISA试验分别对小鼠外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞数、T淋巴细胞的转化功能及小鼠血清中特异性PRRSV血清抗体IgG动态变化进行了检测。结果表明,pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗接种小鼠后外周血对ConA有明显的反应性,试验组与对照组比较差异极显著(P<0.01)或显著(P<0.05),CD4+T淋巴细胞数在免疫后7d高于对照组(P<0.01),CD8+T淋巴细胞在免疫后28d高于对照组,不同途径基因疫苗接种小鼠后均诱导小鼠产生PRRSV特异性IgG。在诱导细胞免疫方面,基因枪和肌肉注射各组间无明显差异;在诱导体液免疫方面,基因枪法优于肌肉注射。研究表明制备的pcDNA-PRRSV-ORF5基因疫苗免疫小鼠能够诱导其机体产生良好的体液和细胞免疫应答,基因枪法较肌肉注射更能诱导体液免疫应答的产生。 展开更多

关键词 基因枪 肌肉注射 猪 繁殖呼吸综合征 ORF5基因疫苗 小鼠 体液免疫 细胞免疫

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猪IL-2真核表达质粒对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗诱导小鼠细胞免疫增强作用的研究 被引量：7

8

作者 陈希文 程安春 +6 位作者 汪铭书 希尼尼根 豆文波 张平英 李雪梅 王刚 刘伍梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期60-63,共4页

目的 :研究猪白细胞介素 2真核表达质粒 (pcDNA IL 2 )对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )诱导BALB/c小鼠产生细胞免疫应答的影响。方法 :用pcDNA IL 2与PRRSVORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )共同免疫BALB/c小... 目的 :研究猪白细胞介素 2真核表达质粒 (pcDNA IL 2 )对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )诱导BALB/c小鼠产生细胞免疫应答的影响。方法 :用pcDNA IL 2与PRRSVORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )共同免疫BALB/c小鼠 ,以空载质粒pcDNA为阴性对照 ,PBS为空白对照 ;采用流式细胞仪 (FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法 )分别对小鼠外周血中CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞数和淋巴细胞的转化功能进行了检测。结果 :pcDNA IL 2与pcDNA PRRSV ORF5共同免疫小鼠后外周血对ConA有明显的反应性 ,CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞数在免疫后 7天显著超过对照组 ,共同组与单独pcDNA PRRSV ORF5组有显著差异 (P <0 0 1)。结论 :pcDNA PRRSV ORF5免疫小鼠能够诱导其机体产生良好的细胞免疫应答 ,猪pcDNA IL 2能够显著增强pcDNA PRRSV ORF5诱导小鼠细胞免疫的能力。 展开更多

关键词 猪白细胞介素2真核表达质粒 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗 细胞免疫 小鼠

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益生菌对仔猪肠道免疫的作用方式 被引量：6

9

作者 王发明 季海峰 +4 位作者 希尼尼根 王晓兰 王四新 张董燕 侯璐 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第2期44-46,共3页

作者综述和分析了饲用益生菌对仔猪肠道免疫的作用方式,探讨了益生菌促进仔猪肠道免疫的作用机理。当饲用益生菌进入仔猪肠道后,首先对肠黏膜进行黏附,然后刺激肠黏膜内T细胞分化,产生与免疫相关的细胞因子和活性物质,促进肠道免疫和免... 作者综述和分析了饲用益生菌对仔猪肠道免疫的作用方式,探讨了益生菌促进仔猪肠道免疫的作用机理。当饲用益生菌进入仔猪肠道后,首先对肠黏膜进行黏附,然后刺激肠黏膜内T细胞分化,产生与免疫相关的细胞因子和活性物质,促进肠道免疫和免疫协同作用,从而提高了机体免疫力,降低了仔猪腹泻率,最终提高了仔猪健康水平和生长性能。 展开更多

关键词 仔猪 益生菌 肠道免疫

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牛白细胞介素-2基因的克隆与序列分析 被引量：3

10

作者 申宏旺 希尼尼根 +5 位作者 苏丽娅 关平原 李平安 乌日汗 李海念 于富丽 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第4期12-13,共2页

关键词 白细胞介素-2 序列分析 克隆 基因 生物学活性 T淋巴细胞 细胞因子 免疫细胞

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宏基因组技术及其在奶牛乳房炎诊断中的应用 被引量：2

11

作者 于景丽 希尼尼根 赵吉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期567-570,共4页

现代医学认为,疾病的发生发展与菌群结构变化密切相关[1-4]。Aebi等利用DNA印迹杂交（Southern-blot hybridization）技术证明特定牛群支原体乳腺炎暴发和奶源介导的支原体群落感染有关[5]。发展不依赖于培养（Culture-independent）而... 现代医学认为,疾病的发生发展与菌群结构变化密切相关[1-4]。Aebi等利用DNA印迹杂交（Southern-blot hybridization）技术证明特定牛群支原体乳腺炎暴发和奶源介导的支原体群落感染有关[5]。发展不依赖于培养（Culture-independent）而且能够准确跟踪疾病发生发展过程中全部菌群变化的宏基因组学（Metagenomics）鉴别技术对疾病的早期防控至关重要。 展开更多

关键词 牛乳房炎 宏基因组 菌群结构 微生物群落 牛群 亚临床型乳房炎 DNA 细菌群落 变形菌 印迹杂交

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不同哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展 被引量：6

12

作者 乌云其其格 李向臣 +4 位作者 跃华 刘鹏 希尼尼根 关伟军 马月辉 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第9期55-58,共4页

卵母细胞孤雌激活是核移植的关键技术之一,卵母细胞激活率的高低直接影响核移植的效率。作者主要对卵母细胞孤雌激活的机制、激活途径及不同哺乳动物卵母细胞孤雌激活进行概括性的分析。

关键词 卵母细胞 孤雌生殖 孤雌激活

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禽流感的诊断检测及防治研究进展 被引量：9

13

作者 索永兵 樊树芳 +1 位作者 陈化兰 希尼尼根 《畜牧兽医科技信息》 2008年第5期9-10,共2页

高致病力禽流感(HPAI)被国际兽疫局列为A类烈性传染病,本文对HPAI的诊断检测技术及防制对策进行了综述,总结了禽流感诊断方法如病原学、血清学、分子生物学等方面的最新研究进展,分析了禽流感疫苗预防禽流感的效果和缺点。

关键词 禽流感 诊断 检测 病原学 血清学 分子生物学 防制

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BVDV、BRV和BCoV TaqMan三重RT-qPCR检测方法的建立 被引量：4

14

作者 孙亚杰 关平原 +3 位作者 周伟光 徐晓静 希尼尼根 于景丽 《中国动物检疫》 CAS 2021年第3期99-106,共8页

为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛轮状病毒(BRV)和牛冠状病毒(BCoV)的快速检测方法,根据GenBank中登录的BVDV 5'-UTR、BRV NSP5和BCoV N基因序列设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和条件,建立了同时检测上述3种病毒的TaqMan三... 为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛轮状病毒(BRV)和牛冠状病毒(BCoV)的快速检测方法,根据GenBank中登录的BVDV 5'-UTR、BRV NSP5和BCoV N基因序列设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和条件,建立了同时检测上述3种病毒的TaqMan三重RT-qPCR方法。该方法仅对BVDV 5'-UTR、BRV NSP5和BCoV N基因扩增呈阳性,而对牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒、魏氏梭菌(A型、B型和D型)、多杀性巴氏杆菌(A型和B型)等犊牛腹泻相关病原扩增均呈阴性;最低检出限为10拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于2%。利用本研究建立的TaqMan三重RT-qPCR方法对29份临床样品进行检测,获得BVDV、BRV、BCoV的4种混合感染型,其中BVDV与BCoV的混合感染率最高(27.6%);与已有单重RT-qPCR方法比较,发现两种方法检测BVDV、BRV和BCoV的符合率分别为100%、96.5%、100%。结果表明,本研究建立的TaqMan三重RT-qPCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好、可行性高等优点,可为今后BVDV、BRV和BCoV共感染引起的牛腹泻性疾病的鉴别诊断和流行病学调查提供新技术手段。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 牛轮状病毒 牛冠状病毒 TaqMan三重RT-qPCR 混合感染

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