期刊文献+
共找到5篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
基于D-loop区多态性分析新疆地区7个哈萨克牛群体遗传结构和母系起源
1
作者 王盼盼 沙拉玛提· +2 位作者 巴合提·博代 李振伟 吾热力哈孜·哈孜汗 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1166-1179,共14页
【目的】利用线粒体DNA(mtNDA)D-loop区序列多态性作为标记,探究新疆7个哈萨克牛群体间遗传结构和母系起源,为新疆黄牛品种合理利用和生物多样性保护提供资料。【方法】采集哈萨克牛血液提取DNA,测定179头哈萨克牛个体mtDNA D-loop序列... 【目的】利用线粒体DNA(mtNDA)D-loop区序列多态性作为标记,探究新疆7个哈萨克牛群体间遗传结构和母系起源,为新疆黄牛品种合理利用和生物多样性保护提供资料。【方法】采集哈萨克牛血液提取DNA,测定179头哈萨克牛个体mtDNA D-loop序列,利用SnapGene软件对所获序列与参考序列进行比对、校正,确定mtDNA D-loop区序列的长度和位置,并统计碱基含量;利用DnaSP 5.10软件统计哈萨克牛种群单核苷酸多态性(SNP)位点,并计算单倍型数(H)、核苷酸多样性(Pi)、单倍型多样度(Hd)等参数;利用Arlequin 3.0软件分析哈萨克牛种群的遗传结构;采用Mega 11.0软件计算mtDNA D-loop区哈萨克牛种群的遗传距离,并构建Neighbor-Joining(NJ)系统进化树。【结果】哈萨克牛群体mtDNA D-loop区全序列长909~911 bp,其A、G、T、C 4种碱基平均含量分别为32.8%、13.8%、28.8%和24.6%,AT含量高于GC含量,179个个体共检测到131个SNPs,其中变异位点占所测核苷酸全长的14.40%,定义了89种单倍型,Hd和Pi分别为0.974和0.01288,表明哈萨克牛群体的遗传多样性十分丰富。分子变异分析结果表明,97.13%的变异属于群体内,2.87%则来自群体间变异,遗传距离为0.0109~0.0186,群体间遗传分化指数(F st)为―0.0053~0.0782,且均无显著分化(P>0.05)。系统发生树显示,新疆地区7个哈萨克牛群体有普通牛和瘤牛两大母系起源。【结论】新疆地区哈萨克牛源于两个母系,遗传多样性丰富。尽管群体间存在遗传分化,但并未形成明显的地理隔离,且遗传结构差异正在缩小。本研究结果为保护和利用哈萨克牛遗传资源提供了理论依据。 展开更多
关键词 哈萨克牛 线粒体DNA D-loop区 遗传多样性 系统进化
在线阅读 下载PDF
抑制素α主动和被动免疫对哈萨克羊生殖激素含量的影响 被引量:3
2
作者 丽娜·沙肯 巴合提·博代 +3 位作者 杨华 解津刚 董巧燕 吾热力哈孜·哈孜汗 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第2期658-667,共10页
为了研究抑制素α(INHα)主动和被动免疫对哈萨克羊生殖激素含量的影响,本试验在对抑制素α重组质粒表达菌株进行诱导表达的基础上,将经纯化、鉴定的抑制素α重组蛋白免疫接种新疆双峰骆驼,制备驼抗抑制素α多克隆抗体,并对其进行纯化,... 为了研究抑制素α(INHα)主动和被动免疫对哈萨克羊生殖激素含量的影响,本试验在对抑制素α重组质粒表达菌株进行诱导表达的基础上,将经纯化、鉴定的抑制素α重组蛋白免疫接种新疆双峰骆驼,制备驼抗抑制素α多克隆抗体,并对其进行纯化,检测抗体效价,验证抗体的特异性。之后选择3~5岁、发情时间相近并处于间情期的45只成年哈萨克羊随机分为3组,分别作为抑制素α多克隆抗体免疫组(A组)、抑制素α重组蛋白免疫组(B组)及对照组(C组),每隔10 d连续进行3次加强免疫,应用ELISA法检测在绵羊繁殖活动中具有重要功能的5种生殖激素:促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、孕酮素(P 4)、雌激素(E 2)、抑制素(INH),并检测血液生化指标。结果显示,IPTG的最佳诱导浓度是0.6 mmol/L,在4 h时诱导出产量较高的抑制素α包涵体蛋白,纯化后的抑制素α重组蛋白纯度较高,并具有较好的免疫原性,经进一步验证发现,制备的抑制素α抗体效价为1∶512000,该抗体可与抑制素α重组蛋白特异性结合。说明成功制备了具有免疫原性的抑制素α重组蛋白和高效价的驼抗抑制素α多克隆抗体。免疫后A组LH、P 4含量和B组FSH、LH、P 4、E 2、INH含量与C组相比差异不显著(P>0.05),而A组FSH含量和E 2含量显著高于C组(P<0.05),INH含量显著低于C组(P<0.05)。通过血液生化指标检测发现,抑制素α蛋白和抑制素α抗血清两种免疫制剂免疫后,试验动物均没有出现不良症状。说明两种抑制素α抗原均可对哈萨克羊血液生殖激素的分泌产生良好效果,相比之下抑制素α抗血清免疫效果更佳。 展开更多
关键词 抑制素α 免疫 哈萨克羊 多克隆抗体 生殖激素
在线阅读 下载PDF
抑制素α基因诱导表达及其多克隆抗体的制备
3
作者 丽娜·沙肯 巴合提·博代 +2 位作者 杨华 解津刚 吾热力哈孜·哈孜汗 《畜禽业》 2020年第4期1-4,共4页
目的为获得诱导表达的绵羊卵泡抑制素基因蛋白及其多克隆抗体。方法试验首先对绵羊卵泡抑制素α基因原核表达产物进行诱导表达及可溶性分析,其次运用以镍柱亲层析和尿素透析的方法收集其表达蛋白并用弗氏佐剂对其进行乳化,最后将乳化后... 目的为获得诱导表达的绵羊卵泡抑制素基因蛋白及其多克隆抗体。方法试验首先对绵羊卵泡抑制素α基因原核表达产物进行诱导表达及可溶性分析,其次运用以镍柱亲层析和尿素透析的方法收集其表达蛋白并用弗氏佐剂对其进行乳化,最后将乳化后的蛋白免疫制剂对新疆双峰骆驼进行多次加强免疫,以获得卵泡抑制素α基因多克隆抗体。结果绵羊卵泡抑制素α基因原核表达产物在IPTG诱导作用下呈包涵体形式存在,蛋白纯度较高,免疫后血清抗体效价为5.12×10^6,SDS-PAGE电泳分析结果显示,在39 ku有常规抗体的条带存在,在26 ku处存在纳米抗体的条带。结论绵羊卵泡抑制素α蛋白经纯化后对双峰骆驼免疫可以获得高效价、高纯度的抑制素α多克隆抗体。 展开更多
关键词 抑制素α基因 诱导表达 免疫 多克隆抗体
在线阅读 下载PDF
抑制素α亚基特异性纳米抗体基因筛选与鉴定
4
作者 马继福 巴合提·博代 +2 位作者 黑子别克·哈孜别克 李振伟 吾热力哈孜·哈孜汗 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1532-1542,共11页
【目的】从新疆双峰驼淋巴细胞基因组中筛选出抑制素α亚基(INHα)特异性纳米抗体(VHH)基因,制备新型抑制素免疫制剂,以期间接提高动物血液促卵泡素(FSH)水平、排卵率和产羔率。【方法】利用pET32a-INHA原核表达载体诱导表达INHα蛋白... 【目的】从新疆双峰驼淋巴细胞基因组中筛选出抑制素α亚基(INHα)特异性纳米抗体(VHH)基因,制备新型抑制素免疫制剂,以期间接提高动物血液促卵泡素(FSH)水平、排卵率和产羔率。【方法】利用pET32a-INHA原核表达载体诱导表达INHα蛋白并纯化,纯化后的INHα蛋白经尿素溶液复性后免疫新疆双峰驼。通过对免疫前和免疫后全血中淋巴细胞VHH基因进行巢式PCR扩增、高通量测序并建立VHH氨基酸差异数据库;分别对免疫前和免疫后血清及从免疫后血清中筛选出的INHα特异性抗体进行液相色谱质谱/质谱联用(LC-MS/MS)分析获得质谱数据;对质谱数据进行蛋白数据库检索和数据分析后建立INHα特异性抗体和免疫后特异性抗体的肽段库和蛋白库;通过将VHH氨基酸差异数据库分别与INHα特异性抗体和免疫后特异性抗体的肽段库进行序列比对,筛选出INHα特异性纳米抗体基因;对筛选出的VHH基因进行序列比对、三维结构预测和蛋白-蛋白模拟对接。【结果】试验成功诱导表达并纯化了INHα蛋白,INHα蛋白免疫新疆双峰驼获得的抗体效价达1∶1024000;成功从淋巴细胞中克隆出VHH基因,从免疫后血清中筛选出INHα特异性抗体;通过高通量测序、质谱分析及数据处理筛选出5个INHα特异性VHH基因,其氨基酸序列比对结果显示,整体相似性为70.98%,其中互补决定区1(CDR1)长10~13个氨基酸,CDR2长12~13个氨基酸,CDR3长12~22个氨基酸,CDR3在3个互补决定区中氨基酸序列差异最大;系统进化树显示,选择的5条氨基酸序列具有丰富的多样性;蛋白-蛋白模拟对接结果表明,除VHH-267外其余4株纳米抗体均可与INHα配对连接,且主要作用力为疏水相互作用和氢键。【结论】本研究首次通过高通量测序技术联合质谱分析从新疆双峰驼淋巴细胞基因组中筛选出5个INHα特异性VHH基因。本研究结果可为提高动物机体FSH水平及排卵率提供理论指导和技术支持,对繁殖免疫学的发展具有一定参考价值。 展开更多
关键词 抑制素α亚基(INHα) 双峰驼 纳米抗体 高通量测序 质谱分析
在线阅读 下载PDF
基于噬菌体展示技术筛选抑制素α亚基特异性纳米抗体
5
作者 马继福 阿德力·克坦 +3 位作者 解津刚 巴合提·博代 李振伟 吾热力哈孜·哈孜汗 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2032-2043,共12页
【目的】通过噬菌体展示技术构建抗抑制素α亚基(INHα)纳米抗体文库,并筛选出针对绵羊INHα的特异性纳米抗体,以期制备出新型抑制素免疫制剂,为提高绵羊外周血促卵泡素(FSH)水平和排卵率做前期准备。【方法】利用pET32a-INHA原核表达... 【目的】通过噬菌体展示技术构建抗抑制素α亚基(INHα)纳米抗体文库,并筛选出针对绵羊INHα的特异性纳米抗体,以期制备出新型抑制素免疫制剂,为提高绵羊外周血促卵泡素(FSH)水平和排卵率做前期准备。【方法】利用pET32a-INHA原核表达载体诱导表达INHα蛋白,并对诱导表达的INHα蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定;用Ni琼脂糖凝胶纯化后的INHα蛋白免疫新疆双峰驼。通过巢式PCR扩增制备骆驼噬菌体展示纳米抗体文库,通过三轮免疫亲和淘选及噬菌体ELISA从该文库中富集和筛选INHα特异性纳米抗体,并通过测序得知纳米抗体的基因序列;用蛋白-蛋白模拟对接初步鉴定该纳米抗体与INHα蛋白的亲和性。【结果】通过原核诱导表达及Ni琼脂糖凝胶纯化得到了大小为36 ku的INHα重组蛋白,通过Western blotting检测到约36 ku的蛋白条带;双峰驼通过6次INHα蛋白免疫抗体效价达到1∶1024000;通过巢式PCR获得了400 bp左右的VHH基因,通过电转化等试验构建了库容量为1.05×10^(12)CFU的纳米抗体文库,文库阳性率为94%;通过三轮免疫亲和淘选获得3.0×10^(8)CFU的抗INHα纳米抗体文库,利用噬菌体ELISA获得了4株(VHH-4、VHH-29、VHH-89、VHH-108)INHα特异性纳米抗体,且4株INHα特异性纳米抗体基因序列相似度为80.31%;通过蛋白-蛋白模拟对接鉴定发现4株纳米抗体均与INHα具有较强的亲和性。此外,VHH-4与INHα的总自由能为-576.28 kJ/mol,是4种VHH中的最佳抗体。【结论】成功构建了抗INHα纳米抗体库,并从该库中获取了VHH-4、VHH-29、VHH-89和VHH-1084株INHα特异性纳米抗体。本研究结果可为纳米抗体在生殖免疫学中的应用提供参考。 展开更多
关键词 抑制素α亚基(INHα) 纳米抗体 噬菌体展示技术
在线阅读 下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部