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survivin短发夹状RNA真核表达载体的构建及其对宫颈癌细胞survivin表达的影响 被引量:6
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作者 宋晖 辛晓燕 +3 位作者 肖锋 王德堂 岳乔红 郭会玲 《医学研究生学报》 CAS 2008年第8期795-799,I0001,共6页
目的:构建survivin基因短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,并观察其对宫颈癌细胞survivin表达的抑制作用。方法:设计、合成2对survivin特异性微小片段RNA引物(s1、s2),退火连接后利用DNA重组技术,将其分别克隆入真核表达载体pSilencer 2.1... 目的:构建survivin基因短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,并观察其对宫颈癌细胞survivin表达的抑制作用。方法:设计、合成2对survivin特异性微小片段RNA引物(s1、s2),退火连接后利用DNA重组技术,将其分别克隆入真核表达载体pSilencer 2.1-U6 neo,酶切、鉴定测序后,经脂质体转染宫颈癌HeLa细胞,G418筛选阳性克隆,半定量RT-PCR检测survivin mRNA表达,Western blot检测survivin蛋白表达。结果:成功构建了survivin shRNA真核表达载体pSilencer2.1-s1和pSilencer2.1-s2,G418筛选24 d后出现阳性克隆,转染pSilencer2.1-s1和pSilencer2.1-s2的HeLa细胞中,survivin表达呈现不同程度下调,pSilencer2.1-s2的干涉效果较好。结论:成功构建并筛选出干涉效果较好的survivin shRNA真核表达载体,为进一步研究其对宫颈癌细胞生物学行为的影响奠定了实验基础。 展开更多
关键词 SURVIVIN 短发夹状RNA 真核表达载体 宫颈肿瘤
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人高迁移率族蛋白1诱导血管内皮细胞肿瘤坏死因子α的分泌规律 被引量:4
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作者 别良峰 岳乔红 +3 位作者 程晓东 于文彬 苏明权 郝晓柯 《医学研究生学报》 CAS 2004年第8期688-690,共3页
目的 :探讨人高迁移率族蛋白 1(HMGB1)诱导血管内皮细胞肿瘤坏死因子α(TNF α)的分泌规律及其在脓毒症中的作用。 方法 :HMGB1的剂量效应组分别用含有 0、0 .1mg/L、1.0mg/L、10mg/L、2 0mg/L、5 0mg/LHMGB1的培养液与人脐静脉内皮细... 目的 :探讨人高迁移率族蛋白 1(HMGB1)诱导血管内皮细胞肿瘤坏死因子α(TNF α)的分泌规律及其在脓毒症中的作用。 方法 :HMGB1的剂量效应组分别用含有 0、0 .1mg/L、1.0mg/L、10mg/L、2 0mg/L、5 0mg/LHMGB1的培养液与人脐静脉内皮细胞株ECV 30 4共培养 10h ,分别收取HMGB1刺激孔及对照孔细胞和培养液上清 ,用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF α含量 ,采用流式细胞技术观察HMGB1诱导血管内皮细胞的凋亡情况。人HMGB1的时间效应组以含有 2 0mg/LHMG1的培养液、阳性对照组以含有 10 0mg/L脂多糖 (LPS)的培养液、阴性对照组以不含HMGB1的培养液分别培养EVC 30 4细胞 0、2、4、6、8、10、12和 2 4h ,同上留取离心后的培养液上清用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF α含量。 结果 :将HMGB1加入到血管内皮细胞培养液中能明显刺激其TNF α的分泌。在 0 .1~ 5 0mg/L范围内 ,HMGB1诱导EVC 30 4的TNF α分泌增加 ,呈明显的剂量依赖性关系 ;HMGB1组EVC 30 4的TNF α分泌在 0~ 2 4h间呈时间依赖性关系 ;5 0mg/LHMGB1能明显诱导EVC 30 4细胞凋亡。 结论 :人HMGB1能诱导血管内皮细胞TNF α的分泌与凋亡 ,证实HMGB1在脓毒症的发生、发展中发挥作用。 展开更多
关键词 高迁移率族蛋白1 血管内皮细胞 肿瘤坏死因子 脓毒症
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人羧肽酶A1的毕赤酵母可溶表达 被引量:2
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作者 易静 刘家云 +4 位作者 缪应叶 张青 苏明权 岳乔红 郝晓柯 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期324-326,336,共4页
目的应用毕赤酵母表达系统表达人羧肽酶A1(carboxypeptidase A1,CPA1)蛋白。方法从pGEX-CPA1重组质粒中扩增出CPA1基因,亚克隆入酵母表达载体pPIC9K,酵母重组表达载体pPIC9K-CPA1电转化入毕赤酵母SMD1168,并进行营养缺陷筛选和G418抗性... 目的应用毕赤酵母表达系统表达人羧肽酶A1(carboxypeptidase A1,CPA1)蛋白。方法从pGEX-CPA1重组质粒中扩增出CPA1基因,亚克隆入酵母表达载体pPIC9K,酵母重组表达载体pPIC9K-CPA1电转化入毕赤酵母SMD1168,并进行营养缺陷筛选和G418抗性筛选,对高拷贝整合的重组酵母表达菌株诱导表达。结果构建得到酵母融合重组表达载体pPIC9K-CPA1,经G418浓度梯度筛选得到串联整合16个重组表达载体的重组酵母表达菌株,诱导表达后得到CPA1蛋白。结论在毕赤酵母中成功表达了CPA1,为进一步研究CPA1在抗体导向酶-前体药物疗法中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 羧肽酶A1 巴斯德毕赤酵母 基因表达
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提取结核分枝杆菌DNA 3种方法的比较 被引量:1
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作者 苏明权 苏哲 +3 位作者 岳乔红 樊新 杨柳 郝晓柯 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期215-215,共1页
关键词 结核分枝杆菌 十二烷基硫酸钠 胰酶 聚合酶链反应 细菌DNA 实验室检查
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