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利用家蚕生产慈姑蛋白酶抑制剂
被引量：
1
1
作者
季平
张志芳
+2 位作者
何家禄
宓怡德
吴祥甫
《蚕业科学》
CAS
CSCD
1995年第4期223-227,共5页
将慈姑蛋白酶抑制剂Ｂ（ＡｒｒｏｗｈｅａｄＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｂ，ＡＩＢ）基因插入转移载体ｐＵＢＭ—４中，得到重组转移载体ｐＵＢＭ（ＡＩＢ）；与Ｂｍ—ＮＰＶＤＮＡ共转染家蚕细胞，经空斑纯化，得到不含...
将慈姑蛋白酶抑制剂Ｂ（ＡｒｒｏｗｈｅａｄＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｂ，ＡＩＢ）基因插入转移载体ｐＵＢＭ—４中，得到重组转移载体ｐＵＢＭ（ＡＩＢ）；与Ｂｍ—ＮＰＶＤＮＡ共转染家蚕细胞，经空斑纯化，得到不含多角体的重组病毒ＢｍＮＰＶ（ＡＩＢ）；感染家蚕幼虫，利用家蚕高效表达了ＡＩＢ，其表达量为１．０×１０５Ｕ／ｍＬ血淋巴，比活为３．２９×１０３Ｕ／ｍｇ。
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关键词
慈姑蛋白酶
抑制剂B
家蚕
核型多角体病毒
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职称材料
应用昆虫杆状病毒载体在昆虫细胞中表达乙肝表面抗原
被引量：
1
2
作者
周耐明
宓怡德
+2 位作者
金伟
李载平
吴祥甫
《浙江农业大学学报》
CSCD
1995年第1期81-84,共4页
人乙型肝炎病毒（ａｄｒ亚型）表面抗原Ｓ基因克隆到ＰｕＡＣ－５苜蓿尺蠖核型多角体病毒转移载体上，所构建的重组转移载体质粒与野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染Ｓｆ－２１细胞，经空斑法筛选和纯化，得到了含ＨＢＶＳ基因的重组病毒Ａ...
人乙型肝炎病毒（ａｄｒ亚型）表面抗原Ｓ基因克隆到ＰｕＡＣ－５苜蓿尺蠖核型多角体病毒转移载体上，所构建的重组转移载体质粒与野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染Ｓｆ－２１细胞，经空斑法筛选和纯化，得到了含ＨＢＶＳ基因的重组病毒ＡｃＮＰＶＳ．用放射免疫法测定了ＡｃＮＰＶＳ感染的Ｓｆ－２１细胞及其培养液中的ＨＢｓＡｇ，总表达量为１．２２μｇ／１０￣６细胞．
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关键词
乙型肝炎病毒
表面抗原
昆虫细胞
基因表达
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职称材料
人尿激酶原cDNA在昆虫杆状病毒真核表达系统中的高效表达
被引量：
7
3
作者
徐扬
张洪涛
+2 位作者
宓怡德
吴祥甫
胡美浩
《生物化学杂志》
CSCD
1993年第6期709-713,共5页
人尿激酶原(pro-urokinase,pro-UK)是一种新型溶栓剂,优于尿激酶,具有血纤维蛋白特异性。为了在昆虫杆状病毒表达系统中高效表达pro-UK,我们在pAc373基础上,插入野生型AcMNPV polyhedrin启动子区-7～1碱基序列,构建了一个高表达转移载体...
人尿激酶原(pro-urokinase,pro-UK)是一种新型溶栓剂,优于尿激酶,具有血纤维蛋白特异性。为了在昆虫杆状病毒表达系统中高效表达pro-UK,我们在pAc373基础上,插入野生型AcMNPV polyhedrin启动子区-7～1碱基序列,构建了一个高表达转移载体pAcYT。分别经三次克隆将pro-UK cDNA正向插入到转移载体pAc373或PAcYT的BarnHI-KpnI位点上。用LiPofectin将pAcyT-UKDNA或pAc373-UK DNA与AcMNPV DNA共转染到昆虫Sf9细胞中,空斑法筛出重组病毒阳性克隆株。高效表达结果是:1.ELISA法确定重组病毒Sf9细胞分泌表达产物pro-UK为96mg/L培养基上清,平板法测定溶圈活性为1600IU/mL培养基上清;2.亲和层析一步法纯化表达产物,回收率选70％,以上,比活约为60000IU/mg;3.纯化的pro-UK,无论是否经还原处理,其SDS-PAGE图谱均为相同的单一条带,MR 50000;4.Western blot与SDS-PAGE图谱吻合。
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关键词
昆虫
杆状病毒
表达
尿激酶原
CDNA
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职称材料
题名
利用家蚕生产慈姑蛋白酶抑制剂
被引量：
1
1
作者
季平
张志芳
何家禄
宓怡德
吴祥甫
机构
中国农业科学院蚕业研究所
出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
1995年第4期223-227,共5页
文摘
将慈姑蛋白酶抑制剂Ｂ（ＡｒｒｏｗｈｅａｄＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｂ，ＡＩＢ）基因插入转移载体ｐＵＢＭ—４中，得到重组转移载体ｐＵＢＭ（ＡＩＢ）；与Ｂｍ—ＮＰＶＤＮＡ共转染家蚕细胞，经空斑纯化，得到不含多角体的重组病毒ＢｍＮＰＶ（ＡＩＢ）；感染家蚕幼虫，利用家蚕高效表达了ＡＩＢ，其表达量为１．０×１０５Ｕ／ｍＬ血淋巴，比活为３．２９×１０３Ｕ／ｍｇ。
关键词
慈姑蛋白酶
抑制剂B
家蚕
核型多角体病毒
Keywords
Arrowhead proteinase inhibitor B cDNA sequence BmNPV Plaque assay Gene expression
分类号
S884.5 [农业科学—特种经济动物饲养]
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职称材料
题名
应用昆虫杆状病毒载体在昆虫细胞中表达乙肝表面抗原
被引量：
1
2
作者
周耐明
宓怡德
金伟
李载平
吴祥甫
机构
浙江农业大学蚕学系
出处
《浙江农业大学学报》
CSCD
1995年第1期81-84,共4页
文摘
人乙型肝炎病毒（ａｄｒ亚型）表面抗原Ｓ基因克隆到ＰｕＡＣ－５苜蓿尺蠖核型多角体病毒转移载体上，所构建的重组转移载体质粒与野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染Ｓｆ－２１细胞，经空斑法筛选和纯化，得到了含ＨＢＶＳ基因的重组病毒ＡｃＮＰＶＳ．用放射免疫法测定了ＡｃＮＰＶＳ感染的Ｓｆ－２１细胞及其培养液中的ＨＢｓＡｇ，总表达量为１．２２μｇ／１０￣６细胞．
关键词
乙型肝炎病毒
表面抗原
昆虫细胞
基因表达
Keywords
Autographa californica nuclear polyhedros is virus
hepatitis B virus surface anti-gen
insect cell
gene expression
分类号
R373.2 [医药卫生—病原生物学]
Q962 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
人尿激酶原cDNA在昆虫杆状病毒真核表达系统中的高效表达
被引量：
7
3
作者
徐扬
张洪涛
宓怡德
吴祥甫
胡美浩
机构
北京大学生物系生化教研室
上海生化所
出处
《生物化学杂志》
CSCD
1993年第6期709-713,共5页
基金
863高科技项目赞助
文摘
人尿激酶原(pro-urokinase,pro-UK)是一种新型溶栓剂,优于尿激酶,具有血纤维蛋白特异性。为了在昆虫杆状病毒表达系统中高效表达pro-UK,我们在pAc373基础上,插入野生型AcMNPV polyhedrin启动子区-7～1碱基序列,构建了一个高表达转移载体pAcYT。分别经三次克隆将pro-UK cDNA正向插入到转移载体pAc373或PAcYT的BarnHI-KpnI位点上。用LiPofectin将pAcyT-UKDNA或pAc373-UK DNA与AcMNPV DNA共转染到昆虫Sf9细胞中,空斑法筛出重组病毒阳性克隆株。高效表达结果是:1.ELISA法确定重组病毒Sf9细胞分泌表达产物pro-UK为96mg/L培养基上清,平板法测定溶圈活性为1600IU/mL培养基上清;2.亲和层析一步法纯化表达产物,回收率选70％,以上,比活约为60000IU/mg;3.纯化的pro-UK,无论是否经还原处理,其SDS-PAGE图谱均为相同的单一条带,MR 50000;4.Western blot与SDS-PAGE图谱吻合。
关键词
昆虫
杆状病毒
表达
尿激酶原
CDNA
Keywords
Baculovirus
Autographa californica nuclear polyhedrosis virus
Polyhe-drin promotor
Spodoptera frugiperda cells
pAcYT DNA
Pro-urokinase cDNA
Ex-pression of human pro-urokinase gene
分类号
Q7 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用家蚕生产慈姑蛋白酶抑制剂
季平
张志芳
何家禄
宓怡德
吴祥甫
《蚕业科学》
CAS
CSCD
1995
1
在线阅读
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职称材料
2
应用昆虫杆状病毒载体在昆虫细胞中表达乙肝表面抗原
周耐明
宓怡德
金伟
李载平
吴祥甫
《浙江农业大学学报》
CSCD
1995
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
人尿激酶原cDNA在昆虫杆状病毒真核表达系统中的高效表达
徐扬
张洪涛
宓怡德
吴祥甫
胡美浩
《生物化学杂志》
CSCD
1993
7
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职称材料
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