为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要结构蛋白GP5的第二胞外区在病毒复制中的作用及机制,利用PiggyBac Transposon System Vectors构建了表达删除84—119氨基酸残基的截短型GP5的重组质粒(pPBGP5Δ84-119),转染Marc-145细胞通过嘌...为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要结构蛋白GP5的第二胞外区在病毒复制中的作用及机制,利用PiggyBac Transposon System Vectors构建了表达删除84—119氨基酸残基的截短型GP5的重组质粒(pPBGP5Δ84-119),转染Marc-145细胞通过嘌呤霉素抗性筛选和3次亚克隆,筛选稳定表达GP5Δ84-119的Marc-145细胞系,并利用cck-8试剂盒检测细胞的增殖情况;用PRRSV SD16株感染筛选的细胞,通过病毒基因拷贝数和病毒滴度检测GP5Δ84-119表达对PRRSV复制影响;通过Real-time PCR和ELISA检测病毒感染前后细胞IFN-α、IFN-β、IFN-γ的表达情况。经RT-PCR、Western blot和IFA检测,GP5Δ84-119在Marc-145细胞中获得稳定表达,将此细胞命名为Marc-145-GP5Δ84-119;细胞增殖曲线显示GP5Δ84-119的表达不影响细胞的增殖;对病毒基因拷贝数和病毒滴度检测发现GP5Δ84-119的表达可以抑制PRRSV的复制,这种抑制作用可能是通过上调IFN特别是IFN-β的表达而实现的。研究表明GP5第二胞外区在PRRSV复制中发挥重要作用。展开更多
采用支撑液膜技术建立了进料相、膜相、反萃取相三相体系,实现了对洁霉素的分离提纯。该体系采用了洁霉素+异构烷烃(Isopar L)+HCl的反应体系,验证了进料浓度(Cbf)、进料相溶液pH、反萃取相溶液pH、萃取剂组成等因素对分配系数(D)的影...采用支撑液膜技术建立了进料相、膜相、反萃取相三相体系,实现了对洁霉素的分离提纯。该体系采用了洁霉素+异构烷烃(Isopar L)+HCl的反应体系,验证了进料浓度(Cbf)、进料相溶液pH、反萃取相溶液pH、萃取剂组成等因素对分配系数(D)的影响。同时,优化了膜组件实现萃取实验的操作条件,根据传质过程建立了数学模型。结果显示:当洁霉素Cbf为11.9 mmol/L、Isopar L体积分数(VF)为80%、进料相pH为10.1、反萃取相pH为1.2时,D最大为2.34。确定了膜组件操作条件为:管程流量Vf=520 m L/min,壳程流量Vs=500 m L/min。根据所建的数学模型分析了各部分传质阻力,其中管程传质阻力为6.7×10~5s/m,壳程传质阻力为3.7×10~5s/m,跨膜传质阻力为2.7×10~6s/m,跨膜传质阻力起主要作用。展开更多
文摘采用支撑液膜技术建立了进料相、膜相、反萃取相三相体系,实现了对洁霉素的分离提纯。该体系采用了洁霉素+异构烷烃(Isopar L)+HCl的反应体系,验证了进料浓度(Cbf)、进料相溶液pH、反萃取相溶液pH、萃取剂组成等因素对分配系数(D)的影响。同时,优化了膜组件实现萃取实验的操作条件,根据传质过程建立了数学模型。结果显示:当洁霉素Cbf为11.9 mmol/L、Isopar L体积分数(VF)为80%、进料相pH为10.1、反萃取相pH为1.2时,D最大为2.34。确定了膜组件操作条件为:管程流量Vf=520 m L/min,壳程流量Vs=500 m L/min。根据所建的数学模型分析了各部分传质阻力,其中管程传质阻力为6.7×10~5s/m,壳程传质阻力为3.7×10~5s/m,跨膜传质阻力为2.7×10~6s/m,跨膜传质阻力起主要作用。
