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卵黄蛋白原1(vtg1)启动子调控绿色荧光蛋白表达的转基因斑马鱼的构建 被引量:12
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作者 陈浩 杨健 +3 位作者 王跃祥 蒋璆 徐绘 宋后燕 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第10期965-970,共6页
环境雌激素严重危害人类的健康.为了简便直观地检测水环境中的雌激素污染,构建了一种转基因斑马鱼,在这种鱼的体内,利用卵黄蛋白原1(vitellogenin1,vtg1)的启动子调控报告基因绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)的表达... 环境雌激素严重危害人类的健康.为了简便直观地检测水环境中的雌激素污染,构建了一种转基因斑马鱼,在这种鱼的体内,利用卵黄蛋白原1(vitellogenin1,vtg1)的启动子调控报告基因绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)的表达.用1ng/L的17!-炔雌醇(17'-ethynylestradiol,EE2)诱导4天后,仔鱼肝脏中出现绿色荧光.RT-PCR和整体原位杂交实验证实,仔鱼体内EGFP和vtg1的时空表达模式相同.通过在显微镜下观察转基因鱼的绿色荧光,可以直观判断水环境中是否含有雌激素活性物质.该研究为环境雌激素的监测提供了一种简便直观的新型工具. 展开更多
关键词 转基因斑马鱼 绿色荧光蛋白 卵黄蛋白原 启动子 环境雌激素
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重组链激酶在重度脑室内出血外科治疗中的应用 被引量:16
2
作者 张义 陈衔城 +2 位作者 吴劲松 宋后燕 任军 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期129-132,共4页
目的研究重组链激酶(rSK)在脑室内出血治疗中的应用。方法对15例重度脑室内出血(IVH),于发病后16小时内进行双侧或单侧脑室外引流术,并辅以rSK脑室内纤溶治疗。结果CT复查示,14例于术后4日脑室内积血减少... 目的研究重组链激酶(rSK)在脑室内出血治疗中的应用。方法对15例重度脑室内出血(IVH),于发病后16小时内进行双侧或单侧脑室外引流术,并辅以rSK脑室内纤溶治疗。结果CT复查示,14例于术后4日脑室内积血减少约60%,7例积血1周内完全消失,7例于2周内消失,1例死亡,随访13例中优良11例,脑积水3例行脑室腹腔分流术。结论早期脑室外引流及应用rSK纤溶治疗重度IVH效果良好,无明显副反应发生。 展开更多
关键词 重组链激酶 脑室内出血 脑室引流术 纤溶治疗
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视黄酸影响斑马鱼胚胎心脏房室分化 被引量:7
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作者 张立凤 桂永浩 +5 位作者 钟涛 王跃祥 蒋球 崇梅 孙淑娜 宋后燕 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期88-91,共4页
目的观察外源性视黄酸对斑马鱼心脏前后轴发育即心脏房室分化的影响。方法采用化学遗传学方法在斑马鱼胚胎发育至12.5hpf(hours post fertilization)给予5×10-8mol/L和10-7mol/L外源性视黄酸处理1.5h。应用胚胎整体原位杂交观察视... 目的观察外源性视黄酸对斑马鱼心脏前后轴发育即心脏房室分化的影响。方法采用化学遗传学方法在斑马鱼胚胎发育至12.5hpf(hours post fertilization)给予5×10-8mol/L和10-7mol/L外源性视黄酸处理1.5h。应用胚胎整体原位杂交观察视黄酸对心脏特异基因vmhc,amhc,nkx2.5和nppa表达的影响。结果vmhc,amhc探针的整体原位杂交结果显示视黄酸处理会导致斑马鱼胚胎心脏的前后轴发育异常,表现为vmhc表达细胞的范围缩小,amhc表达细胞的范围明显增大。视黄酸可以明显增强nppa在心脏的表达。视黄酸对心脏房室分化的影响在48hpf后表现得明显。结论5×10-8mol/L和10-7mol/L视黄酸在12.5hpf处理斑马鱼胚胎对斑马鱼心脏早期发生没有影响。斑马鱼发育过程中,视黄酸对心脏的房室分化过程起着重要的调控作用,视黄酸支持心房的分化和发育,同时抑制心室发育。 展开更多
关键词 视黄酸 斑马鱼 心脏发育 整体原位杂交
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内皮祖细胞在体外培养成血管样结构的初步观察 被引量:10
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作者 杨德业 张怀勤 +3 位作者 季亢挺 黄晓燕 徐力辛 宋后燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1970-1974,共5页
目的:探索体外培养脐血、外周血内皮祖细胞(EPCs)的方法,观察其形成血管样结构的可能性及条件。方法:采用贴壁选择法培养人脐血及兔外周血内皮祖细胞,光镜下观察细胞形态,用荧光显微镜、流式细胞仪分析贴壁细胞CD34、VEGFR-2、AC133、... 目的:探索体外培养脐血、外周血内皮祖细胞(EPCs)的方法,观察其形成血管样结构的可能性及条件。方法:采用贴壁选择法培养人脐血及兔外周血内皮祖细胞,光镜下观察细胞形态,用荧光显微镜、流式细胞仪分析贴壁细胞CD34、VEGFR-2、AC133、血管内皮钙粘素(VE-cadherin)的表达,D iI-ac-LDL吞噬试验及Ⅷ因子免疫组化证实细胞属性。结果:体外成功培养出人脐血及兔外周血内皮祖细胞,形成条索状、管状结构,兔外周血EPCs分化较成熟,形成典型铺路石形状及血管样结构。结论:脐血、兔外周血内皮祖细胞可在体外培养成功并表现成血管倾向,可能是血管组织工程的潜在资源。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 细胞培养 组织工程
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大鼠局灶性脑缺血早期脑内HO-1蛋白的表达 被引量:4
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作者 符荣 陈衔城 +3 位作者 任惠民 宋后燕 金复生 季耀东 《复旦学报(医学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第1期53-56,F003,共5页
目的 研究局灶性脑缺血血红素氧合酶 (HO)在脑内的表达。方法 采用大鼠大脑中动脉栓塞致脑缺血 ,对缺血早期不同时间点进行HO 1免疫组化及病理学研究 ,并应用计算机图像分析技术计算HO 1表达的强弱。结果 栓塞后 3 0min皮质及海马即... 目的 研究局灶性脑缺血血红素氧合酶 (HO)在脑内的表达。方法 采用大鼠大脑中动脉栓塞致脑缺血 ,对缺血早期不同时间点进行HO 1免疫组化及病理学研究 ,并应用计算机图像分析技术计算HO 1表达的强弱。结果 栓塞后 3 0min皮质及海马即有HO 1阳性神经元和胶质细胞 ,且随着时间推移 ,HO 1的表达逐渐增强 ,HO 1主要分布在灶周皮质、梗死皮质区、梨状皮质内的神经元及胶质细胞 ,丘脑、下丘脑、海马齿状回的神经元及对测海马也出现HO 1的表达。结论 脑缺血时脑内HO 展开更多
关键词 局灶性脑缺血 一氧化碳 血红素氧合酶-1 免疫组织 化学 大鼠
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新的高血压相关基因-Slc7a8的实验研究 被引量:6
6
作者 洪承吕 陈长曦 +4 位作者 杨德业 余祖善 张怀勤 黄晓燕 宋后燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2122-2125,共4页
目的:探讨高血压致病相关基因。方法:提取13周龄SHR和WKY的2、3级肠系膜动脉和肾脏总RNA,利用含10000个基因大鼠表达谱芯片检测2组2、3级肠系膜动脉和肾脏组织基因表达水平不同的基因,并用定量RT-PCR的方法排除假阳性候选基因。结果:芯... 目的:探讨高血压致病相关基因。方法:提取13周龄SHR和WKY的2、3级肠系膜动脉和肾脏总RNA,利用含10000个基因大鼠表达谱芯片检测2组2、3级肠系膜动脉和肾脏组织基因表达水平不同的基因,并用定量RT-PCR的方法排除假阳性候选基因。结果:芯片发现19个基因在SHR中上调,其中涉及分子伴侣、离子通道和小分子转运、生长因子、细胞信号转导的蛋白和核转录因子、脂蛋白等基因。用定量RT-PCR验证示Slc7a8基因的表达水平在SHR组中比WKY组上调9.3倍。结论:Slc7a8可能与高血压的形成有关,深入研究Slc7a8基因及其功能将为进一步了解高血压病的分子机制提供新的思路和线索。 展开更多
关键词 高血压 基因 Slc7a8 大鼠
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注射用重组葡激酶的中试研究 被引量:6
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作者 于敏 张小璇 +4 位作者 任军 蔡旭 孙翠娥 朱运松 宋后燕 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第1期45-48,共4页
在已获得了高效表达重组葡激酶工程菌的基础上建立了快速、高效的注射用重组葡激酶中试生产规程。工程菌经机械破碎和离心后,上清液经硫酸铵分级沉淀,一步凝胶过滤和一步阴离子交换即可获得高纯度、高活性的半成品,加入稳定剂后过滤... 在已获得了高效表达重组葡激酶工程菌的基础上建立了快速、高效的注射用重组葡激酶中试生产规程。工程菌经机械破碎和离心后,上清液经硫酸铵分级沉淀,一步凝胶过滤和一步阴离子交换即可获得高纯度、高活性的半成品,加入稳定剂后过滤除菌、分装、冻干即得成品。蛋白质回收率和活性回收率均为40%以上,由于选用径向色谱柱,色谱参数可直接放大至工业化生产。 展开更多
关键词 重组葡激酶 中试研究 SAK 葡激酶
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室间隔缺损新的相关基因-蛋白酪氨酸激酶的实验研究 被引量:4
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作者 杨德业 张怀勤 +2 位作者 黄伟剑 黄晓燕 宋后燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期117-119,共3页
目的 :了解蛋白酪氨酸激酶在心脏发育中的作用 ,探索室间隔缺损的特异相关基因及其信号转导途径。方法 :使用基因芯片 (microarray)的方法筛选ALK3下游基因 ,并用RT -PCR和定量RT -PCR的方法排除假阳性候选基因。结果 :在心脏特异的ALK... 目的 :了解蛋白酪氨酸激酶在心脏发育中的作用 ,探索室间隔缺损的特异相关基因及其信号转导途径。方法 :使用基因芯片 (microarray)的方法筛选ALK3下游基因 ,并用RT -PCR和定量RT -PCR的方法排除假阳性候选基因。结果 :在心脏特异的ALK3基因敲除下 ,11 5d小鼠胚胎心脏中 ,蛋白酪氨酸激酶 (PTK)基因的表达水平比正常对照组高 3 7倍。结论 :蛋白酪氨酸激酶基因是骨形态形成蛋白信号途径的调控因子 ,并与室间隔缺损的形成有关。 展开更多
关键词 室间隔缺损 蛋白质酪氨酸激酶 先天性心脏病 发病机理 骨形态形成蛋白受体IA 蛋白酪氨酸激酶基因
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叶酸缺乏对斑马鱼体轴发育的影响 被引量:3
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作者 孙淑娜 桂永浩 +2 位作者 蒋璆 钱林溪 宋后燕 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期663-669,共7页
目的构建叶酸缺乏斑马鱼模型,观察叶酸缺乏斑马鱼胚胎的体轴发育情况,初步探讨叶酸缺乏导致胚胎体轴发育异常的机制。方法分别应用二氢叶酸还原酶(dhfr)抑制剂甲氨蝶呤(MTX)以及二氢叶酸还原酶(dhfr)基因阻抑技术,通过下调二氢叶酸还原... 目的构建叶酸缺乏斑马鱼模型,观察叶酸缺乏斑马鱼胚胎的体轴发育情况,初步探讨叶酸缺乏导致胚胎体轴发育异常的机制。方法分别应用二氢叶酸还原酶(dhfr)抑制剂甲氨蝶呤(MTX)以及二氢叶酸还原酶(dhfr)基因阻抑技术,通过下调二氢叶酸还原酶功能构建叶酸缺乏斑马鱼模型。在胚胎发育至17 hpf时在显微镜下观察胚胎的体轴偏移情况。利用特异性探针通过胚胎整体原位杂交的方法标记肝脏、胰脏以及心脏,以观察其位于中线两侧的位置。利用胚胎整体原位杂交和Real-time PCR的方法检测与体轴发育密切相关的Nodal信号通路下游因子ntl和gsc的表达情况。结果叶酸缺乏组一定比例胚胎存在体轴偏移以及肝脏、胰脏和心脏左右轴异位。叶酸缺乏组Nodal信号通路下游因子ntl以及gsc的表达强度无明显变化,但表达的空间模式发生改变,提示轴中胚层发育紊乱。结论叶酸缺乏可导致斑马鱼胚胎体轴发育异常以及轴中胚层发育紊乱,但对Nodal信号通路无明显干扰作用。 展开更多
关键词 叶酸 二氢叶酸还原酶 体轴 Nodal信号通路
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傅里叶变换红外光谱法研究PLGA微球中葡激酶突变体(K35R)的二级结构 被引量:6
10
作者 贺进田 王改珍 宋后燕 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第7期1209-1212,共4页
用复乳溶剂挥发法制备了葡激酶突变体(K35R,DGR)的PLGA微球,并用傅里叶变换红外光谱法(FTIR)定量研究了PLGA微球内DGR的二级结构。将可增强分辨率的傅里叶去卷积技术与高斯曲线拟合技术共同用于对微球内DGR酰胺Ⅰ带的定量分析,发现DGR... 用复乳溶剂挥发法制备了葡激酶突变体(K35R,DGR)的PLGA微球,并用傅里叶变换红外光谱法(FTIR)定量研究了PLGA微球内DGR的二级结构。将可增强分辨率的傅里叶去卷积技术与高斯曲线拟合技术共同用于对微球内DGR酰胺Ⅰ带的定量分析,发现DGR酰胺Ⅰ带共包含9个红外吸收峰,并对各组份进行了归属。此外,还对微球内DGR结构稳定性相关的1 623和1 650 cm-1吸收峰进行了讨论。 展开更多
关键词 葡激酶 微球 傅里叶变换红外光谱
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重组链激酶在脑内血肿动物模型中的局部应用 被引量:11
11
作者 陈衔城 张义 +3 位作者 张福林 宋后燕 汤其群 任军 《上海医科大学学报》 CSCD 1996年第2期87-89,共3页
观察重组链激酶对人凝血块的溶化作用及对脑组织的毒性反应。分别用重组链激酶(实验组)和生理盐水(对照组)注入人凝血块制成的猫额叶脑内血肿内,观察血肿溶化效果。结果:实验组10例中6例血肿完全溶化,对照组10例血肿均未溶... 观察重组链激酶对人凝血块的溶化作用及对脑组织的毒性反应。分别用重组链激酶(实验组)和生理盐水(对照组)注入人凝血块制成的猫额叶脑内血肿内,观察血肿溶化效果。结果:实验组10例中6例血肿完全溶化,对照组10例血肿均未溶化。病理组织学观察,实验组血肿周围脑组织病理改变轻于对照组。结论:重组链激酶对动物模型脑内血肿局部应用有良好的溶化人凝血块的作用,而对周围脑组织无毒性反应。 展开更多
关键词 重组链激酶 脑内血肿 动物模型
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hand2基因对斑马鱼胚胎发育影响的实验研究 被引量:3
12
作者 孙淑娜 桂永浩 +2 位作者 宋后燕 蒋璆 王跃祥 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期325-329,共5页
目的观察hand2在斑马鱼胚胎内的表达情况,验证显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸(Morpholi-no oligonucleotides,MO)使hand2表达下调的有效性。观察hand2表达下调后斑马鱼胚胎发育的异常表型,初步探讨hand2在斑马鱼胚胎发育中的作用,为... 目的观察hand2在斑马鱼胚胎内的表达情况,验证显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸(Morpholi-no oligonucleotides,MO)使hand2表达下调的有效性。观察hand2表达下调后斑马鱼胚胎发育的异常表型,初步探讨hand2在斑马鱼胚胎发育中的作用,为利用斑马鱼开展hand2的功能研究提供线索。方法采用胚胎整体原位杂交的方法观察hand2在斑马鱼胚胎内的表达情况。利用向斑马鱼受精卵显微注射MO的方法使hand2表达下调,并进行hand2表达下调的效率验证。将斑马鱼单细胞受精卵分为4组进行显微注射,即对照MO(Con MO)注射组、hand2MO注射组、hand2-GFP mRNA注射组和hand2-GFP mRNA+hand2MO注射组。在荧光显微镜下观察hand2-GFP mRNA注射组和hand2-GFP mRNA+hand2MO注射组的荧光表达情况以验证hand2表达下调的效率。在显微镜下观察hand2MO注射组斑马鱼胚胎的各器官发育情况并进行评定。结果hand2在斑马鱼胚胎的侧板中胚层、咽弓、心脏和鳍有较强表达。hand2-GFP mRNA注射组在8hpf(hours post fertilization)时胚胎有较强的荧光表达,而hand2-GFP mRNA+hand2MO注射组胚胎几乎无荧光表达。与Con MO注射组相比,hand2MO注射组斑马鱼胚胎的心脏、血管、血细胞、鳍以及体节有明显的发育异常。结论向斑马鱼受精卵显微注射hand2MO的方法可有效的使hand2表达下调。hand2在斑马鱼胚胎的心脏、血管、血细胞、鳍以及体节的发育过程中有重要作用。 展开更多
关键词 hand2 斑马鱼 胚胎发育 吗啡啉修饰的反义核苷酸
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t PA、u PA/u PAR及其抑制剂PAI 1在乳腺肿瘤的表达 被引量:3
13
作者 唐辉滨 何诚 +4 位作者 廖劲晖 田昱 应其龙 宋后燕 朱运松 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 1999年第3期237-240,共4页
目的 研究组织型纤溶酶原激活剂(tPA) 、尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA) 及其受体uPAR、1 型纤溶酶原激活剂抑制剂PAI1 在乳腺肿瘤中的分布及酶学活性。 方法 用免疫组织化学ABC方法,分析4 种因子在... 目的 研究组织型纤溶酶原激活剂(tPA) 、尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA) 及其受体uPAR、1 型纤溶酶原激活剂抑制剂PAI1 在乳腺肿瘤中的分布及酶学活性。 方法 用免疫组织化学ABC方法,分析4 种因子在乳腺肿瘤组织中的定位及半定量表达,用发色底物法测定乳腺肿瘤组织提取物中的tPA 和uPA 的活性。 结果 tPA、uPA、PAI1 主要分布在正常腺上皮及癌上皮细胞的胞质中,uPAR 则在癌细胞的胞膜及胞浆中;总PA 活性和tPA 活性在乳腺良、恶性组织中均无显著性改变,但uPA,uPAR 和PAI1 在乳腺癌组织中的表达明显高于良性组织及癌旁组织;uPA/uPAR在转移灶中的表达较原发灶有不同程度的下降,而PAI1 在转移灶中却较原发灶中为高。 结论 tPA 可能与乳腺癌的恶性表型无关。而uPA/uPAR 与恶性表型相关;uPA/uPAR 和PAI1的相互制约及平衡在调节肿瘤原发灶癌细胞的移动中可能起到重要作用。 展开更多
关键词 t-PA U-PA U-PAR PAI-1 乳腺癌 抑制剂 基因表达
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人组织因子在毕赤酵母中的表达和纯化 被引量:4
14
作者 王羽雄 于敏 +1 位作者 顾银良 宋后燕 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期811-814,共4页
目的制备具有凝血活性的重组人组织因子(recombinant tissue factor,r-TF)用于构建PT试剂盒。方法将人组织因子胞外区编码基因与酵母表达载体重组,构建酵母表达质粒pPIC9K-TF,利用电穿孔法转化宿主菌Pichia pastorisGS115,转化子经G41... 目的制备具有凝血活性的重组人组织因子(recombinant tissue factor,r-TF)用于构建PT试剂盒。方法将人组织因子胞外区编码基因与酵母表达载体重组,构建酵母表达质粒pPIC9K-TF,利用电穿孔法转化宿主菌Pichia pastorisGS115,转化子经G418抗性筛选后,获得高表达克隆。工程菌在摇瓶中经甲醇诱导,表达r-TF,表达产物经纯化后,鉴定生物活性。结果SDS-PAGE证实表达产物的分子量为37 000~45 000,Western blot证明其为人组织因子衍生物,纯化后,r-TF经脂化后,具有促凝血活性,为研制凝血活酶时间测定试剂盒及研究TF的构效关系创造条件。结论用毕赤酵母高效表达具有活性的rTF,表达量达到182 mg/L。纯化工艺简便易行,蛋白回收率高,纯化后的rTF可用于组装PT测定试剂盒。 展开更多
关键词 组织因子 外源性凝血 毕赤酵母 凝血酶原时间
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纳豆激酶原的基因克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:16
15
作者 刘北域 官孝群 宋后燕 《上海医科大学学报》 CSCD 1999年第6期401-404,共4页
目的 构建纳豆激酶原基因克隆 ,实现其在大肠杆菌中的表达。方法 从纳豆芽胞杆菌中分离纯化基因组DNA ,作为模板通过PCR扩增纳豆激酶原基因。运用重组DNA技术 ,构建表达质粒pESX 1,转化大肠杆菌JF112 5 ,温度诱导表达目的蛋白。结果... 目的 构建纳豆激酶原基因克隆 ,实现其在大肠杆菌中的表达。方法 从纳豆芽胞杆菌中分离纯化基因组DNA ,作为模板通过PCR扩增纳豆激酶原基因。运用重组DNA技术 ,构建表达质粒pESX 1,转化大肠杆菌JF112 5 ,温度诱导表达目的蛋白。结果 琼脂糖凝胶电脉及核苷酸序列分析证实 pESX 1为含纳豆激酶原基因的阳性克隆。在大肠杆菌中表达纳豆激酶原 ,经自体加工产生具有纤溶活性的纳豆激酶。结论 成功地构建了纳豆激酶原基因克隆 ,实现了在大肠杆菌中的表达。 展开更多
关键词 纳豆激酶原 基因克隆 大肠杆菌 基因表达
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重组血管生成抑制因子r-K4K5的分离纯化与功能鉴定 被引量:2
16
作者 官孝群 王跃祥 +2 位作者 莫炜 吴良成 宋后燕 《复旦学报(医学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第1期1-4,共4页
目的 分离纯化r K4K5 ,探讨r K4K5对牛毛细血管内皮 (BCE)细胞、鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )新生血管生成及实验性人肺腺癌SPC Al生长的抑制作用。方法 通过盐析、凝胶过滤提纯r K4K5 ,BCE细胞在含r K4K5的DMEM中培养 2 4、48、72h后分别计... 目的 分离纯化r K4K5 ,探讨r K4K5对牛毛细血管内皮 (BCE)细胞、鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )新生血管生成及实验性人肺腺癌SPC Al生长的抑制作用。方法 通过盐析、凝胶过滤提纯r K4K5 ,BCE细胞在含r K4K5的DMEM中培养 2 4、48、72h后分别计数 ;孵化 7d的鸡胚加r K4K5后继续孵育 72h ,观察新生血管生成 ;已经接种人SPC Al肺腺癌组织的荷瘤裸小鼠 (Balb/c ,nu/nu) ,瘤旁注射r K4K5继续饲养 ,观察肿瘤生长变化。结果 r K4K5抑制BCE细胞增殖 ,48~ 72h作用明显 ;r K4K5处理的CAM组中直径小于 5 0 μm的小血管明显减少 ;高剂量r K4K5治疗的荷瘤裸小鼠组 ,平均瘤重与对照组比较有统计学意义。结论 r K4K5能够抑制BCE细胞增殖 ,抑制鸡胚CAM新生血管生成 ,抑制实验性人SPC Al肺腺癌生长。 展开更多
关键词 重组血管生成抑制因子 r-K4K5 分离 纯化 鉴定 肺腺癌
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人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在大肠杆菌中的表达和分离纯化 被引量:3
17
作者 田昱 沈俊卿 +2 位作者 李平 宋后燕 朱运松 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第5期536-541,共6页
用PCR方法从pPAIJ.7中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)cDNA,与pUC18重组,经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析,获得全长人PAI-2cDNA.PAI-2cDNA与原核表达载体重组,构建原... 用PCR方法从pPAIJ.7中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)cDNA,与pUC18重组,经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析,获得全长人PAI-2cDNA.PAI-2cDNA与原核表达载体重组,构建原核表达质粒并转化大肠杆菌.经温度诱导表达,重组PAI-2占全菌总蛋白的14%,以可溶性形式存在,具纤溶抑制活性.工程菌发酵、压榨后,用硫酸铵分级沉淀,沉淀物经分子筛、离子交换和疏水性色谱的分离,每升菌液可获得约30mg纯度达90%的蛋白质,比活性为11866AIU/mg蛋白质,得率为19.2%. 展开更多
关键词 原核表达 分离纯化 PAI-2 大肠杆菌
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二氢叶酸还原酶基因在斑马鱼神经系统发育过程中的作用 被引量:4
18
作者 孙淑娜 桂永浩 +2 位作者 蒋璆 钱林溪 宋后燕 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2010年第2期127-130,I0006,I0007,共6页
目的观察二氢叶酸还原酶基因(DHFR)功能阻抑斑马鱼胚胎的颅脑部发育情况,初步探讨二氢叶酸还原酶基因在斑马鱼神经系统发育过程中的作用。方法采用显微注射吗啡啉修饰的反义核苷酸(MO)的方法进行DHFR表达阻抑。胚胎发育至受精后48hpf观... 目的观察二氢叶酸还原酶基因(DHFR)功能阻抑斑马鱼胚胎的颅脑部发育情况,初步探讨二氢叶酸还原酶基因在斑马鱼神经系统发育过程中的作用。方法采用显微注射吗啡啉修饰的反义核苷酸(MO)的方法进行DHFR表达阻抑。胚胎发育至受精后48hpf观察胚胎的颅部发育情况,在60hpf时经石蜡切片进一步观察胚胎的脑发育状况。利用胚胎整体原位杂交的方法检测影响神经系统发育的关键因子ngn1和huc的表达情况。结果显微注射MO可成功的进行DHFR表达阻抑。DHFR表达阻抑组胚胎存在颅脑部发育明显异常和ngn1、huc的表达强度明显减弱,且与显微注射的MO剂量呈正相关。结论DHFR在斑马鱼颅脑发育中有重要作用;其功能阻抑可导致胚胎颅脑部发育异常,其机理与ngn1和huc的的表达减弱有关。 展开更多
关键词 二氢叶酸还原酶基因 神经系统 斑马鱼
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视黄酸缺乏对斑马鱼心脏房室分化的影响 被引量:3
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作者 侯佳 桂永浩 +3 位作者 张立凤 王跃祥 刘东 宋后燕 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第5期365-368,I0002,共5页
目的通过化学遗传学方法建立视黄酸缺乏的斑马鱼模型,探讨视黄酸缺乏对斑马鱼胚胎心脏前后轴发育即房室分化的影响。方法在斑马鱼胚胎孵育的5 hpf,用不同浓度梯度的视黄醛脱氢酶2抑制剂DEAB(1×10-6、5×10-6、10×10-6、25... 目的通过化学遗传学方法建立视黄酸缺乏的斑马鱼模型,探讨视黄酸缺乏对斑马鱼胚胎心脏前后轴发育即房室分化的影响。方法在斑马鱼胚胎孵育的5 hpf,用不同浓度梯度的视黄醛脱氢酶2抑制剂DEAB(1×10-6、5×10-6、10×10-6、25×10-6mol/L)处理斑马鱼胚胎,实时观察斑马鱼胚胎发育的全过程。通过给予斑马鱼胚胎外源性视黄酸,观察其对DEAB的拮抗作用。应用胚胎整体原位杂交观察视黄酸缺乏对心脏特异基因vmhc和amhc表达的影响。结果斑马鱼胚胎的生存率随着DEAB处理浓度的增加而降低,当DEAB浓度≥5×10-6mol/L时,斑马鱼的畸胎率达100%。5×10-6mol/L DEAB的致畸作用能够被1×10-9mol/L外源性视黄酸所拮抗。整体原位杂交结果显示视黄酸缺乏会导致斑马鱼胚胎心脏房室分化异常,表现为vmhc表达细胞的范围增大,amhc表达细胞的范围缩小。结论通过外源性DEAB处理能有效地建立视黄酸缺乏的斑马鱼模型,DEAB影响胚胎发育存在剂量依赖性。视黄酸在斑马鱼心脏前后轴发育过程中起重要调控作用,心脏发育早期视黄酸缺乏会抑制心房的发育而支持心室的发育,出现房室分化异常。 展开更多
关键词 视黄酸缺乏 斑马鱼 心脏发育 整体原位杂交
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丁酸钠对杂交瘤细胞增殖及抗体分泌的影响 被引量:2
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作者 丁皓 吴晓俐 +2 位作者 陈幼妹 朱运松 宋后燕 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第6期346-348,共3页
用含不同浓度丁酸钠完全培养液和无血清培养液培养分泌抗组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)单克隆抗体的杂交瘤细胞。当丁酸钠浓度为0.25~0.5 mmol/L时,对杂交瘤细胞分泌抗体能力具有刺激作用,提高抗体效价2~4倍,对细胞生长无抑制作用。表... 用含不同浓度丁酸钠完全培养液和无血清培养液培养分泌抗组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)单克隆抗体的杂交瘤细胞。当丁酸钠浓度为0.25~0.5 mmol/L时,对杂交瘤细胞分泌抗体能力具有刺激作用,提高抗体效价2~4倍,对细胞生长无抑制作用。表明丁酸钠可作为一种添加剂用以提高杂交瘤细胞分泌抗体的能力。 展开更多
关键词 丁酸钠 抗体分泌 杂交瘤 细胞
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