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利用激光扫描共聚焦显微成像系统的正交切割成像确证GFP标记细菌在植物根内定殖 被引量：5
1
作者 安千里 杨学健 +3 位作者 冯利 毛碧增 匡柏健 李久蒂 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期354-360,共7页
用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测绿色荧光蛋白(GFP)标记的细菌常用来确证植物内生细菌的内生特性。本文通过用GFP标记的内生细菌侵染植物根,用LSCM分别检测植物的根段或根的徒手横切片,显示LSCM系统的无损伤光学切片和正交切割成像适... 用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测绿色荧光蛋白(GFP)标记的细菌常用来确证植物内生细菌的内生特性。本文通过用GFP标记的内生细菌侵染植物根,用LSCM分别检测植物的根段或根的徒手横切片,显示LSCM系统的无损伤光学切片和正交切割成像适用于确证GFP标记细菌在植物根内定殖,显示徒手切片对揭示细菌定殖模式及其入侵途径的不良影响,并依此更新LSCM检测GFP标记细菌在植物根内定殖的方法。 展开更多
关键词 内生细菌 绿色荧光蛋白 激光扫描共聚焦显微镜 正交切割
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玉米联合固氮工程菌的研究 被引量：3
2
作者 李久蒂 李永兴 +11 位作者 董越梅 安千里 王继文 张燕 匡柏健 隋文志 卢林纲 钟鄂荣 唐颖 卢明峰 王焱 林琳 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第12期47-50,共4页
用分子生物学手段改造玉米联合固氮菌, 解除铵对固氮酶合成的阻遏作用, 以期增加对宿主的氮素供应, 改善与宿主根系的相互关系。经接合转移法把载有组成型表达nifA 基因的pCK3 质粒导入从玉米根分离到的根际联合固氮菌Enterobactergergo... 用分子生物学手段改造玉米联合固氮菌, 解除铵对固氮酶合成的阻遏作用, 以期增加对宿主的氮素供应, 改善与宿主根系的相互关系。经接合转移法把载有组成型表达nifA 基因的pCK3 质粒导入从玉米根分离到的根际联合固氮菌Enterobactergergoviae577,得到耐铵工程菌E7 。E7 在50m mol/LNH+4 下恢复76% 固氮酶活性,接种E7 使玉米固氮率增加14% ,并促进玉米次生根分化及根系生长。E7 的接种效应与玉米品种有关。连续三年在白浆土、砂壤土低产田田间小区接种实验表明,在相同施肥水平条件下接种工程菌E7 比接种野生型菌平均增产8-8 % ,比不接菌对照平均增产12-3% ,生物统计差异显著(P= 0-05) 。在相同产量条件下,接种工程菌E7 比无菌对照节省15% ～20% 氮肥,比接种野生型菌节省15% 展开更多
关键词 耐铵工程菌 玉米 联合固氮菌 施肥 细菌肥料
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喷施3种商品化纳米颗粒对黄瓜绿斑驳花叶病毒病的防效初探
3
作者 罗金燕 谢婷 +5 位作者 陈磊 杜伟 张健男 朱洁 安千里 李斌 《浙江农业科学》 2023年第3期670-673,共4页
黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)属我国进境检疫性有害生物,主要危害西瓜、甜瓜、瓠瓜等葫芦科作物,给瓜类生产造成严重的经济损失。本研究通过在西瓜叶面喷施商品化的纳米氧化锌(ZnO NPs)、纳米二氧化钛... 黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)属我国进境检疫性有害生物,主要危害西瓜、甜瓜、瓠瓜等葫芦科作物,给瓜类生产造成严重的经济损失。本研究通过在西瓜叶面喷施商品化的纳米氧化锌(ZnO NPs)、纳米二氧化钛(TiO_(2)NPs)、纳米二氧化硅(SiO_(2)NPs),以评价3种纳米颗粒对感染CGMMV的西瓜植株生物量、叶绿素含量以及病毒积累量的影响。试验结果表明,经TiO_(2)NPs和SiO_(2)NPs预处理的感染CGMMV的西瓜植株的生物量与叶绿素含量均显著高于对照,TiO_(2)NPs、SiO_(2)NPs和ZnO NPs处理组的CGMMV外壳蛋白积累量显著低于对照组,而ZnO NPs处理组的植株生物量、叶绿素含量与对照组无明显差异,各处理组植株的株高与对照组无显著差异。本研究为黄瓜绿斑驳花叶病毒病的防控提供了新的思路,对于后续利用纳米材料辅助抗CGMMV具有一定的参考意义。 展开更多
关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 西瓜 纳米氧化锌 纳米二氧化钛 纳米二氧化硅 防效
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郁金香和百合主要病害、病原及鉴定方法 被引量：4
4
作者 廖天蓝 罗金燕 +3 位作者 陈磊 朱洁 李斌 安千里 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1-9,共9页
郁金香和百合是最重要的百合科球根花卉。病害是制约郁金香和百合产业健康发展的重要因素。本文介绍了国内为害郁金香和百合的主要病害和病原。国内为害郁金香和百合的主要病原真菌有镰刀菌、灰霉和炭疽菌;主要病原细菌有萎蔫短小杆菌... 郁金香和百合是最重要的百合科球根花卉。病害是制约郁金香和百合产业健康发展的重要因素。本文介绍了国内为害郁金香和百合的主要病害和病原。国内为害郁金香和百合的主要病原真菌有镰刀菌、灰霉和炭疽菌;主要病原细菌有萎蔫短小杆菌、果胶杆菌属和迪基氏属软腐细菌;主要病毒有郁金香碎色病毒、百合斑驳病毒、百合无症病毒和黄瓜花叶病毒等RNA病毒。主要植物病原线虫有短体线虫、茎线虫和滑刃线虫。线虫取食伤害郁金香和百合的根、鳞茎和芽,促进病原真菌和细菌对植物的复合侵染;毛刺属和拟毛刺属线虫除侵害郁金香和百合,还作为介体向植物传播烟草脆裂病毒。为害郁金香和百合的线虫,南芥菜花叶病毒、草莓潜隐环斑病毒和番茄环斑病毒等RNA病毒是与郁金香和百合相关的主要进境检疫性有害生物。本文也介绍了鉴定这些病原的常规方法和新方法,为建立郁金香和百合主要病原的检测检疫体系提供技术理论支持。 展开更多
关键词 郁金香 百合 球根花卉 病害 病原鉴定
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浙江省甘薯上发现瓜类细菌性果斑病菌 被引量：3
5
作者 洪纤纤 吴秀芹 +5 位作者 罗金燕 王艳丽 孙国仓 安千里 邱文 李斌 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第7期1112-1118,共7页
通过对浙江宁海县疑似甘薯茎腐病等检疫性病害的调查,在甘薯病株上分离纯化获得能够引起烟草过敏反应的4株分离物,通过菌落形态观察、革兰氏染色反应、16S rRNA序列分析以及致病性测定等细菌学测定,将这4株菌株都鉴定为西瓜噬酸菌( Acid... 通过对浙江宁海县疑似甘薯茎腐病等检疫性病害的调查,在甘薯病株上分离纯化获得能够引起烟草过敏反应的4株分离物,通过菌落形态观察、革兰氏染色反应、16S rRNA序列分析以及致病性测定等细菌学测定,将这4株菌株都鉴定为西瓜噬酸菌( Acidovorax citrulli ,原 Acidovorax avenae subsp . citrulli ),序列同源性高达99.00%~100.00%。瓜类细菌性果斑病菌为我国的检疫性有害生物,务必引起高度重视,以保障浙江重要经济作物西甜瓜产业的健康发展。 展开更多
关键词 甘薯 西瓜噬酸菌 西瓜果斑病 鉴定 检疫
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胡萝卜软腐果胶杆菌lux发光菌株的构建和应用 被引量：1
6
作者 钟灵坤 徐翠虹 +2 位作者 黄泽铭 安千里 梁岩 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期566-576,共11页
胡萝卜软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum)是世界十大植物细菌性病原之一。为了便于观察该病原菌侵染过程以及进行早期活体定量检测,本研究构建了表达luxCDABE基因的胡萝卜软腐果胶杆菌发光菌株。首先构建了含有luxCDABE基因操... 胡萝卜软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum)是世界十大植物细菌性病原之一。为了便于观察该病原菌侵染过程以及进行早期活体定量检测,本研究构建了表达luxCDABE基因的胡萝卜软腐果胶杆菌发光菌株。首先构建了含有luxCDABE基因操纵子的重组质粒,然后转入胡萝卜软腐果胶杆菌LMG2404中,命名为LMG2404-LUX。与LMG2404相比,LMG2404-LUX的生长速率、生物膜形成和游动性无明显差异;光信号强度与菌液浓度呈线性相关;在菌适宜生长条件下,光信号不受温度和pH的影响;经过10次继代培养后,光信号强度无明显减弱。LMG2404-LUX接种植物后,其致病性与LMG2404无明显差异,侵染初期的光信号强度与该菌侵染增殖呈线性相关。综上所述,LMG2404-LUX可以用于胡萝卜软腐果胶杆菌的快速定量以及植物体内的活体检测,为该菌的相关研究提供了新的工具。 展开更多
关键词 胡萝卜软腐果胶杆菌 荧光素酶 生物发光 luxCDABE元件 软腐病
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猕猴桃溃疡病病菌的多样性及其检测技术 被引量：2
7
作者 胡施祺 戴德江 +3 位作者 罗金燕 朱洁 安千里 李斌 《浙江农业科学》 2022年第11期2652-2657,共6页
猕猴桃细菌性溃疡病是全球重要的植物检疫性病害,丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种被认为是引起猕猴桃细菌性溃疡病的主要病原菌,准确、快速、灵敏的检测方法对预防其扩散和传播至关重要。本文结合国内外相关研究报道,就猕猴桃细菌性溃疡... 猕猴桃细菌性溃疡病是全球重要的植物检疫性病害,丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种被认为是引起猕猴桃细菌性溃疡病的主要病原菌,准确、快速、灵敏的检测方法对预防其扩散和传播至关重要。本文结合国内外相关研究报道,就猕猴桃细菌性溃疡病菌的多样性及其检测技术进行了系统的综述,重点分析比较了现有不同检测技术的优缺点,展望了猕猴桃细菌性溃疡病菌检测技术未来的发展方向,为准确、快速、灵敏地检测猕猴桃细菌性溃疡病菌提供了基础。 展开更多
关键词 猕猴桃细菌性溃疡病 遗传多样性 检测技术 丁香假单胞杆菌
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利用实时荧光定量PCR和数字PCR检测鉴定水稻细菌性条斑病菌 被引量：3
8
作者 张健男 王依名 +5 位作者 张洁净 陈磊 罗金燕 易建平 李斌 安千里 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期55-64,共10页
白叶枯病和条斑病是水稻重要的细菌性病害。水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)和水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)属于同种下的2个致病变种。鉴别Xoo和Xoc对检疫和防控这2种病害至关重要。Xoo... 白叶枯病和条斑病是水稻重要的细菌性病害。水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)和水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)属于同种下的2个致病变种。鉴别Xoo和Xoc对检疫和防控这2种病害至关重要。Xoo和Xoc中的铁-红酵母酸/铁-粪生素受体基因fhuE在进化过程中因不同程度地缺失而成为假基因。针对Xoc中有而Xoo中缺失的fhuE部分序列设计引物,筛选出Xoc特异引物XocFhuE-F(5’-ATCGAACGATGTCACCAGGG-3’)和XocFhuE-R(5’-AGAAACGTGCGGCCAGATAA-3’)。用XocFhuE-F/XocFhuE-R能只从Xoc菌株中仅扩增出159 bp片段,并结合荧光染料建立了SYBR Green实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和EvaGreen微滴数字PCR(digital PCR,dPCR)方法来检测鉴定Xoc。在20μL反应体系中加1μL模板,qPCR检测菌悬液中Xoc的下限是1.6×10^(4)CFU/mL,检测带菌种子中Xoc的下限是1.2×10^(3)CFU/粒;d PCR检测菌悬液中Xoc的下限是1.6×10^(3)CFU/mL,检测带菌种子中Xoc的下限是1.2×10^(2)CFU/粒。综上所述,基于Xoc特异引物XocFhuE-F/XocFhuE-R建立的SYBR Green qPCR和EvaGreen dPCR为检疫Xoc和监测预警水稻条斑病提供了高效的检测方法。 展开更多
关键词 水稻条斑病 水稻白叶枯病 水稻黄单胞菌 保守标志蛋白 铁-粪生素受体
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