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肾综合症出血热患者血清可溶性CD226/PTA1的检测及意义 被引量:10
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作者 宁双飞 贾卫 +5 位作者 刘京梅 张新海 杨琨 李琦 刘雪松 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期283-284,共2页
关键词 肾综合症出血热 HFRS CD226/PTA1 检测
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检测可溶型CD226双mAb夹心ELISA的建立及初步应用 被引量:3
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作者 宁双飞 贾卫 +4 位作者 张新海 杨琨 李琦 刘雪松 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期192-194,共3页
目的 :建立一种检测可溶型CD2 2 6 (sCD2 2 6 )的双mAb夹心ELISA ,并用于临床标本的检测。方法 :确定包被mAbLeoA1和HRP mAbFMU3的最佳工作浓度及最佳稀释液后 ,建立双mAb夹心ELISA ,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行鉴定。再以建... 目的 :建立一种检测可溶型CD2 2 6 (sCD2 2 6 )的双mAb夹心ELISA ,并用于临床标本的检测。方法 :确定包被mAbLeoA1和HRP mAbFMU3的最佳工作浓度及最佳稀释液后 ,建立双mAb夹心ELISA ,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行鉴定。再以建立的方法检测临床标本。结果 :包被mAbLeoA1的最佳工作浓度为 2 .5mg/L ,HRP mAbFMU3的最佳工作浓度 1∶4 0 0 ,标准品及HRP mAb的最佳稀释液分别为 1g/LBSA 1mL/LTween2 0 PBS和 30 g/LPEG PBS .建立的双mAb夹心ELISA ,其特异性 (与人IgG无交叉反应 ,阻断实验中阻断效应呈剂量依赖性 )、敏感性 (检出下限为 110ng/L标准品CD2 2 6 /Fc融合蛋白 )及稳定性 (CV <10 .2 % )均较良好。对部分临床标本的检测中 ,发现 6例类风湿关节炎(RA)患者血清sCD2 2 6的水平升高 ,与正常人血清sCD2 2 6水平相比差异显著 (P <0 .0 1)。结论 :建立一种特异性高、重复性好、较敏感的检测sCD2 2 6的双mAb夹心ELISA 。 展开更多
关键词 可溶型CD226 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验 临床应用 类风湿性关节炎
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小鼠CD226(PTA1)的基因克隆及其异型 被引量:4
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作者 张新海 李德敏 +6 位作者 欧阳为明 贾卫 谢鑫 陈丽华 宁双飞 张赟 金伯泉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期371-375,共5页
目的 :克隆小鼠CD2 2 6 (PTA1)分子。方法 :从GenBank中检索出与人CD2 2 6分子在氨基酸水平上有 5 1%同源性的EST序列 ,设计并合成特异性引物 ,采用快速扩增cDNA末端的RACE方法 ,从 4周龄BALB c小鼠的胸腺中扩增小鼠CD2 2 6cDNA序列。结... 目的 :克隆小鼠CD2 2 6 (PTA1)分子。方法 :从GenBank中检索出与人CD2 2 6分子在氨基酸水平上有 5 1%同源性的EST序列 ,设计并合成特异性引物 ,采用快速扩增cDNA末端的RACE方法 ,从 4周龄BALB c小鼠的胸腺中扩增小鼠CD2 2 6cDNA序列。结果 :克隆出完整的小鼠CD2 2 6cDNA ,长 2 2 2 3bp ,其中开放读框为 10 0 2bp ,编码含信号肽在内的 333个氨基酸 ,属免疫球蛋白超家族分子 ,较人CD2 2 6分子少了 3个氨基酸 ,在氨基酸水平上有 5 3%的同源性。此外 ,还克隆了小鼠CD2 2 6分子的 3种异型。结论 :成功克隆出小鼠CD2 2 6 (PTA1)cDNA ,并发现 3种异型 ,全面探讨该分子生物学特性 ,进行体内功能实验 ,基因敲除小鼠和转基因小鼠的研究提供了坚实的基础。 展开更多
关键词 CD226 血小板 T细胞活化抗原1 基因克隆 异型 PTA1
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9.1C3/LAIR-1的真核表达、纯化及单克隆抗体的制备和鉴定 被引量:3
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作者 薛江楠 欧阳为明 +6 位作者 贾卫 张新海 谢鑫 曹云新 宁双飞 李琦 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期614-616,共3页
目的 表达并纯化 9.1C3/LAIR 1胞膜外区与人的IgG1Fc段的融合蛋白 ,制备针对 9.1C3/LAIR 1胞膜外区的单克隆抗体 (mAb)。方法 构建真核表达载体 pIg/ 3C 9.1C3/LAIR 1,表达并纯化 9.1C3/LAIR 1 Fc融合蛋白。以 9.1C3/LAIR 1 Fc融合蛋... 目的 表达并纯化 9.1C3/LAIR 1胞膜外区与人的IgG1Fc段的融合蛋白 ,制备针对 9.1C3/LAIR 1胞膜外区的单克隆抗体 (mAb)。方法 构建真核表达载体 pIg/ 3C 9.1C3/LAIR 1,表达并纯化 9.1C3/LAIR 1 Fc融合蛋白。以 9.1C3/LAIR 1 Fc融合蛋白免疫BALB/c小鼠 ,制备。以间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性 ,以竞争结合实验鉴定mAb识别LAIR 1的表位。结果表达并纯化了 9.1C3/LAIR 1 hIgFc融合蛋白 ,以其免疫BALB/c小鼠 ,获得 1株针对 9.1C3/LAIR 1胞膜外区的mAb 4H7。4H7对HL 6 0细胞和经 9.1C3/LAIR 1cDNA转染的COS7细胞上的表位识别 ,与已报道的抗 9.1C3mAb体不同。结论 成功地构建了 9.1C3/LAIR 1胞膜外区基因的真核表达载体 ,并表达纯化了 9.1C3/LAIR 1 hIgFc融合蛋白。获得一株针对 9.1C3/LAIR 1胞膜外区的mAb ,为进一步研究9.1C3/LAIR 展开更多
关键词 9.1C3/LAIR-1 真核表达 纯化 单克隆抗体 鉴定
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