石鲽、牙鲆精子冷冻保存研究及其在人工杂交中的应用 被引量：20

1

作者 季相山 陈松林 +1 位作者 赵燕 邓寒 《海洋水产研究》 CSCD 北大核心 2005年第1期13-16,共4页

对石鲽(Kareius bicoloratus )和牙鲆(Paralichthys olivaceus)精子冷冻保存技术进行了研究,筛选到一个优良的稀释液MPRS,用MPRS冷冻保存石鲽、牙鲆精子,冻后成活率在70%以上。在石鲽冻精和牙鲆卵的杂交实验中,杂交组受精率是 28 4%... 对石鲽(Kareius bicoloratus )和牙鲆(Paralichthys olivaceus)精子冷冻保存技术进行了研究,筛选到一个优良的稀释液MPRS,用MPRS冷冻保存石鲽、牙鲆精子,冻后成活率在70%以上。在石鲽冻精和牙鲆卵的杂交实验中,杂交组受精率是 28 4%±4 55(n=3),孵化率是 42 7%±7 35(n=3),胚胎发育正常;5 000尾杂交鱼苗有102尾成功度过变态期。在牙鲆冻精和大菱鲆卵的杂交实验中,杂交组的受精率只有2 7%,部分受精卵虽能孵化出膜,但仔鱼全为畸形。这两个杂交实验,特别是石鲽冻精和牙鲆卵的杂交实验,证实了冷冻保存的精子完全可以应用在杂交育种工作中。 展开更多

关键词 精子 冷冻保存 石鲽 牙鲆 杂交

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美国研究生课堂教学特点及启示 被引量：8

2

作者 季相山 王慧 熊玉英 《中国农业教育》 2012年第3期36-38,共3页

研究生课堂教学作为研究生培养的重要组成部分,是研究生获得知识、技能和培养创新能力的一个关键环节。美国研究生课堂教学具有任教师资学术水平高、教学内容侧重内在联系、互动式开放教学盛行、课程考核评价方法科学合理等特点,这些对... 研究生课堂教学作为研究生培养的重要组成部分,是研究生获得知识、技能和培养创新能力的一个关键环节。美国研究生课堂教学具有任教师资学术水平高、教学内容侧重内在联系、互动式开放教学盛行、课程考核评价方法科学合理等特点,这些对提高中国研究生课堂教学质量具有一定的借鉴作用。 展开更多

关键词 美国 研究生 课堂教学

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半滑舌鳎精子冷冻保存 被引量：14

3

作者 田永胜 陈松林 +2 位作者 季相山 孙礼娟 翟介明 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2009年第6期97-102,共6页

半滑舌鳎精子冷冻保存对于人工繁殖育苗、杂交育种、雌核发育及其性别控制研究具有重要的意义,为此,本文对半滑舌鳎精子冷冻保存方法进行了研究。分别利用2.8mol/L的二甲基亚砜(DMSO)、甘油(Gly)和1,2-丙二醇(PG)冷冻保存该鱼精子。结... 半滑舌鳎精子冷冻保存对于人工繁殖育苗、杂交育种、雌核发育及其性别控制研究具有重要的意义,为此,本文对半滑舌鳎精子冷冻保存方法进行了研究。分别利用2.8mol/L的二甲基亚砜(DMSO)、甘油(Gly)和1,2-丙二醇(PG)冷冻保存该鱼精子。结果显示,DMSO冷冻保存精子的活力较高。利用MPRS+2.8mol/L DMSO以1∶0.5、1∶1、1∶1.5和1∶2的比例稀释并冷冻精子,1∶1比例在冻前能够抑制精子的运动,冻后活力可达82.50±3.54%,显著高于其他稀释比例(P<0.05)。分别利用冷冻保存液A(MPRS+2.8mol/L DMSO)和B(TS-2+2.8mol/L DMSO)稀释平衡精子,精子在A中的冻前快速运动时间、寿命分别为37.75±6.45s和145.00±78.98s,与鲜精无显著差异(P>0.05)。利用以上两种冷冻稀释液冷冻保存精子,精子在A液中的冻后活力和寿命分别可达53.50±6.69%和98.00±13.51s,冷冻效果优于B液(P<0.05)。冷冻后精子的受精率和孵化率分别为55.00±5.00%和35.00±13.23%,受精率与鲜精无显著性差异(P>0.05),因此认为MPRS+2.8mol/LDMSO可用于半滑舌鳎精子的冷冻保存。 展开更多

关键词 半滑舌鳎 精子 冷冻保存

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高温诱导对尼罗罗非鱼性别分化及生长的影响 被引量：8

4

作者 党广成 刘羽清 +6 位作者 付佩胜 程安达 刘洋 赵燕 朱永安 宋憬愚 季相山 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2011年第5期32-37,共6页

采用自雌鱼口腔中取出受精卵人工孵化的方法建立了尼罗罗非鱼家系20个。受精后9d,将各家系鱼苗分成两份,分别在28℃(对照组)和36℃(高温诱导组)下养殖,诱导处理12d后,统计高温诱导期成活率并将实验鱼转入自然水温下培育,养殖60～120d后... 采用自雌鱼口腔中取出受精卵人工孵化的方法建立了尼罗罗非鱼家系20个。受精后9d,将各家系鱼苗分成两份,分别在28℃(对照组)和36℃(高温诱导组)下养殖,诱导处理12d后,统计高温诱导期成活率并将实验鱼转入自然水温下培育,养殖60～120d后对各实验组的雄性率及生长情况进行测定。结果表明,高温处理对仔鱼的成活率没有影响,但能显著提高某些家系的雄性率,如F27(诱导组88%,对照组49%)、F37(诱导组90%,对照组53%)和F41(诱导组91%,对照组53%);高温处理后多数家系的雄性率略有升高,但不显著;有两个家系高温诱导组雄性率低于对照组,分别是F8(诱导组43%,对照组46%)和F35(诱导组29%,对照组38%),这显示了尼罗罗非鱼性别分化受遗传和环境因子共同作用。生长情况测定结果表明,高温诱导对发育初期罗非鱼的生长没有显著影响。本研究结果说明,高温处理能显著提高某些家系的雄性率,高温诱导和家系选择有望成为高雄性率尼罗罗非鱼新品种培育的新的技术手段。 展开更多

关键词 尼罗罗非鱼 高温诱导 成活率 性比 生长

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大菱鲆精子低温短期保存 被引量：8

5

作者 赵燕 季相山 陈松林 《海洋水产研究》 CSCD 北大核心 2006年第4期48-52,共5页

大菱鲆(Scophthalmusmaximus)精子仅能体外存活10min左右,根本来不及从养殖场带回实验室,而生产单位的实验条件又有限,这严重限制了大菱鲆精子的实验研究。本文利用TS19做稀释液,6%DMSO作抗冻剂,在4℃下保存大菱鲆精子,每隔一段时间观察... 大菱鲆(Scophthalmusmaximus)精子仅能体外存活10min左右,根本来不及从养殖场带回实验室,而生产单位的实验条件又有限,这严重限制了大菱鲆精子的实验研究。本文利用TS19做稀释液,6%DMSO作抗冻剂,在4℃下保存大菱鲆精子,每隔一段时间观察1次被保存精子的成活率。结果发现,大菱鲆精子体外存活时间可延长到3h。用保存3h的大菱鲆精子做授精实验,在各种精卵比的情况下,受精率与鲜精对照组没有显著差异。本实验保存大菱鲆精子的方法完全满足了大菱鲆精子短距离运输的要求。 展开更多

关键词 大菱鲆 精子 成活率 低温保存

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鲈鱼胚胎程序化冷冻保存的研究 被引量：8

6

作者 于过才 陈松林 +2 位作者 孔晓瑜 田永胜 季相山 《海洋水产研究》 CSCD 2004年第1期1-8,共8页

对鲈鱼(Lateolabraxjaponicus)胚胎的程序降温冷冻保存进行了研究。通过稀释液的筛选实验 ,选择了一种培养效果好的稀释液DS1液。研究了不同发育阶段胚胎对抗冻液的毒性耐受力 ,表明肌肉效应期胚胎的耐受力最强。测定了心跳期胚胎在抗冻... 对鲈鱼(Lateolabraxjaponicus)胚胎的程序降温冷冻保存进行了研究。通过稀释液的筛选实验 ,选择了一种培养效果好的稀释液DS1液。研究了不同发育阶段胚胎对抗冻液的毒性耐受力 ,表明肌肉效应期胚胎的耐受力最强。测定了心跳期胚胎在抗冻液A1 、A2 、B1 、B2 中的平衡处理时间 ,为进行鲈鱼胚胎冻前平衡提供了参考时间。比较了植冰和不植冰对鲈鱼胚胎冷冻保存结果的影响及不同洗脱方法洗脱胚胎的效果。结果表明 ,在冷冻过程中诱导植冰的胚胎成活率高于未植冰组 ,两步法洗脱效果优于一步法和三步法。用不同降温速率进行了鲈鱼胚胎的超低温冷冻保存实验 ,结果表明 ,采用 1 .5℃ /min的降温速率降温 ,在液氮中冷冻保存 30min的 72粒心跳期胚胎中有 3粒成活 ,成活率为 4.2 %。 展开更多

关键词 鲈鱼 胚胎 程序冷冻

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花鲈冷冻精液受精鱼苗与鲜精受精鱼苗的同工酶比较分析 被引量：1

7

作者 陈艳翠 高天翔 +3 位作者 陈松林 季相山 田永胜 邓寒 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2008年第3期27-31,共5页

采用水平凝胶电泳技术对花鲈(Lateolabrax maculatus)冷冻精液受精鱼苗与鲜精受精鱼苗进行了同工酶分析。本实验选取肌肉和肝脏两种组织,检测了IDHP、PGM、LDH、GPI、MDH、G3PDH、ME、HK、SOD、G6PD和SDH等11种酶,得到13个位点:IDHP*、P... 采用水平凝胶电泳技术对花鲈(Lateolabrax maculatus)冷冻精液受精鱼苗与鲜精受精鱼苗进行了同工酶分析。本实验选取肌肉和肝脏两种组织,检测了IDHP、PGM、LDH、GPI、MDH、G3PDH、ME、HK、SOD、G6PD和SDH等11种酶,得到13个位点:IDHP*、PGM-1*、PGM-2*、LDH*、GPI-1*、GPI-2*、MDH*、G3PDH*、ME*、HK*、SOD*、G6PD*和SDH*。结果显示在0.99水平,SDH*和PGM-2*位点在两种受精鱼苗中均表现为多态,多态位点比例均为0.1538;平均预期杂合度分别为0.0460和0.0407,但未观测到杂合子,观测杂合度均为0,遗传偏离指数均为-1;有效等位基因数分别为1.0720和1.0850,花鲈冷冻精液受精鱼苗与鲜精受精鱼苗的遗传相似度为0.9991,遗传距离为0.0010。由此可见,花鲈的冷冻精液受精鱼苗和鲜精受精鱼苗间未出现同工酶水平上的遗传差异,冷冻保存精液完全适用于花鲈育苗生产。 展开更多

关键词 花鲈(Lateolabrax maculatus) 冷冻精液受精鱼苗 鲜精受精鱼苗 同工酶

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土霉素在大菱鲆体内的代谢与合理用药研究 被引量：1

8

作者 王雪鹏 丁雷 +2 位作者 王巍 季相山 岳永生 《海洋水产研究》 CSCD 北大核心 2008年第5期33-38,共6页

报道了土霉素（Oxytetracycline，OTC）在大菱鲆体内的残留及代谢规律。在水温14～16℃的条件下，用50mg／kg体重的剂量，对大菱鲆口灌土霉素3d，每天两次。用紫外吸收法测定土霉素在大菱鲆体内的残留量。结果表明，土霉素在各组织中最... 报道了土霉素（Oxytetracycline，OTC）在大菱鲆体内的残留及代谢规律。在水温14～16℃的条件下，用50mg／kg体重的剂量，对大菱鲆口灌土霉素3d，每天两次。用紫外吸收法测定土霉素在大菱鲆体内的残留量。结果表明，土霉素在各组织中最高残留量和消除速率不一。给药后36h，土霉素在各组织中的含量达到最高；然后随着时间的推移急剧下降，第840h时，土霉素在各组织中的残留量已经降到较低水平；40d后，土霉素在各组织中的残留量已低于100ug／kg（国家无公害食品标准NY5070），所以，建议临床休药期为40d以上。 展开更多

关键词 土霉素 残留 消除 大菱鲆

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以渔养水的测水配方技术在富营养化水体治理中的应用研究 被引量：2

9

作者 朱鹏 孙姚佳代 +4 位作者 付佩胜 叶海斌 段美萍 季相山 王慧 《科学养鱼》 2018年第3期54-56,共3页

以渔养水是一种通过放养滤食性、草食性、杂食性优质鱼类,吸收水体中的藻类和氮、磷等有机物,减轻水域环境的富营养化达到增加水域生物资源数量、改善生物群落结构、修复水域生态环境目的的措施。

关键词 水体治理 富营养化 配方技术 养水 生物群落结构 应用 测水 水域生态环境

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青虾生长蜕壳期同类相残行为的关键影响因素研究与对策探讨 被引量：1

10

作者 朱鹏 孙姚佳代 +2 位作者 季相山 王方鹏 王慧 《科学养鱼》 2016年第10期51-53,共3页

青虾由山东省泰安市黄前水库提供。选取健康活泼、体制优良、规格相近个体1000尾，在水族箱中驯养14天，驯养期间每日投喂人工配合颗粒饲料2次（8：00和16：00）。

关键词 影响因素 同类相残 青虾 行为 蜕壳 生长 配合颗粒饲料 黄前水库

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尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a原核表达与蛋白纯化 被引量：2

11

作者 王金 文春根 +3 位作者 赵燕 王慧 王艺雅 季相山 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2014年第4期45-50,共6页

为表达和纯化尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a蛋白,本研究从尼罗罗非鱼卵巢提取总RNA,反转录获得cDNA模板后,利用设计的引物PCR扩增cyp19a1a ORF区1200 bp片段,双酶切后连接到pET-28a(+)表达载体上,经酶切验证和DNA测序鉴定... 为表达和纯化尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a蛋白,本研究从尼罗罗非鱼卵巢提取总RNA,反转录获得cDNA模板后,利用设计的引物PCR扩增cyp19a1a ORF区1200 bp片段,双酶切后连接到pET-28a(+)表达载体上,经酶切验证和DNA测序鉴定,证明成功构建了pET-28a-cyp19a1a原核表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌(E.coli)BL21中,优化IPTG诱导浓度和诱导时间。结果显示,在0.5 mmol/L IPTG诱导8 h后,cyp19a1a重组蛋白大量表达,并以包涵体形式存在。通过Ni2+-NTA层析柱和切胶纯化,获得与预期片段大小一致的表达蛋白,并用Western blotting验证了纯化的蛋白为目的蛋白。本研究为制备cyp19a1a抗体和研究高温对cyp19a1a蛋白表达的影响提供了重要的基础。 展开更多

关键词 尼罗罗非鱼 cyp19a1a 原核表达 蛋白纯化

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精子冷冻保存对大菱鲆后代遗传结构影响的微卫星分析 被引量：7

12

作者 陈松林 刘云国 季相山 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期87-91,共5页

用微卫星技术对大菱鲆冻精和鲜精受精鱼苗的遗传结构进行了分析比较,以期间接地检验冷冻保存没有对精子的遗传结构产生影响.精子冷冻按三步法进行,冻后成活率为65%(对照为85%).精子在液氮中保存半小时后解冻授精,冻精受精率和孵化率与... 用微卫星技术对大菱鲆冻精和鲜精受精鱼苗的遗传结构进行了分析比较,以期间接地检验冷冻保存没有对精子的遗传结构产生影响.精子冷冻按三步法进行,冻后成活率为65%(对照为85%).精子在液氮中保存半小时后解冻授精,冻精受精率和孵化率与鲜精的没有显著差异.实验用冻精和鲜精受精鱼苗各15条,且来自相同的父母本,这减少了亲本遗传结构不同对实验结果的干扰.10对微卫星引物的分析结果显示,15条鲜精受精大菱鲆苗共得到等位基因30个,基因型25个,杂合度为0.5747;15条冻精受精大菱鲆苗共得到等位基因30个,基因型25个,杂合度为0.5714.在鲜精受精大菱鲆和冻精受精大菱鲆的30个等位基因中,只有7个等位基因的频率发生了比较显著变化. 展开更多

关键词 冷冻保存 大菱鲆 微卫星分析 精子 结构影响 等位基因 后代 遗传结构 微卫星技术 微卫星引物 分析比较 分析结果 基因型 杂合度 鲜精 冻精 三步法 成活率 孵化率 受精率 父母本 鱼苗 实验 授精 解冻 亲本

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牙鲆自然杀伤细胞增强因子（NKEF）全长cDNA的克隆及表达分析 被引量：1

13

作者 王志坚 陈松林 季相山 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期86-90,共5页

采用快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)的方法,分离和测定了牙鲆自然杀伤细胞增强因子(NKEF)cDNA的全长核苷酸序列,5'RACE扩增分离得到了400bp左右的片段,3'RACE扩增得到了800bp左右的片段,经过拼接得... 采用快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)的方法,分离和测定了牙鲆自然杀伤细胞增强因子(NKEF)cDNA的全长核苷酸序列,5'RACE扩增分离得到了400bp左右的片段,3'RACE扩增得到了800bp左右的片段,经过拼接得到了牙鲆NKEF全长cDNA序列.牙鲆NKEF cDNA全长1028bp(不包含polyA),其中包括67bp的5'非翻译区、597bp的开放阅读框和364bp的3'非翻译区(不包含polyA),整个开放阅读框编码198个氨基酸.RT-PCR分析表明,NKEF基因在牙鲆不同组织中普遍表达,但是表达水平存在着明显的差异.研究结果为提高牙鲆自身免疫防御能力的研究提供了理论依据. 展开更多

关键词 牙鲆 自然杀伤细胞增强因子 快速扩增CDNA末端 CDNA

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