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大鲵虹彩病毒β-丙内酯灭活方法的研究 被引量:16
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作者 孙建滨 曾令兵 +6 位作者 张辉 孟彦 徐进 周勇 王芳 李瑞伟 刘秋凤 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2013年第3期66-71,共6页
为探讨β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)灭活大鲵虹彩病毒(Giant salamander iridovirus,GSIV)的最适条件,研究了BPL对GSIV的灭活方法。采用终浓度分别为0.025%、0.05%、0.1%、0.2%的BPL灭活细胞培养的GSIV,4℃条件下分别灭活24 h、48 h... 为探讨β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)灭活大鲵虹彩病毒(Giant salamander iridovirus,GSIV)的最适条件,研究了BPL对GSIV的灭活方法。采用终浓度分别为0.025%、0.05%、0.1%、0.2%的BPL灭活细胞培养的GSIV,4℃条件下分别灭活24 h、48 h、72 h、96 h,通过细菌培养、细胞培养、病毒核酸PCR扩增以及鱼体感染试验进行灭活病毒的安全性检验,确定最适灭活条件。试验结果表明,GSIV经终浓度为0.1%的BPL 4℃灭活处理72 h后可完全灭活病毒,灭活病毒无细菌污染,接种对GSIV敏感的鲤上皮瘤细胞系(EPC)细胞无细胞病变效应(CPE)出现,病毒主衣壳蛋白(MCP)基因特异性引物PCR反应未扩增出靶基因产物,灭活病毒对健康大鲵的感染试验未出现疾病症状。灭活效果检测结果表明,与未灭活GSIV相比较,最适灭活条件下的GSIV结构蛋白与抗原性未发生显著变化。结论显示BPL可用来灭活GSIV,本研究确立了BPL灭活GSIV的最适条件,为大鲵虹彩病毒细胞培养灭活疫苗研究奠定了重要基础。 展开更多
关键词 大鲵(Andrias davidianus) 虹彩病毒 β-丙内酯 灭活
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患病黄额闭壳龟中产酸克雷伯菌的分离与鉴定 被引量:3
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作者 周勇 曾令兵 +3 位作者 李瑞伟 高正勇 孙建滨 范玉顶 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2012年第3期38-43,共6页
从患病黄额闭壳龟(Cuora galbinifrons)肝脏中分离到一株致病菌HE01,经人工感染健康巴西龟,可复制与自然发病相同的症状,且从人工感染病龟体内再次分离到相同的病原菌。经Biolog微生物自动鉴定系统的鉴定,以及进一步的16 S rDNA基因序... 从患病黄额闭壳龟(Cuora galbinifrons)肝脏中分离到一株致病菌HE01,经人工感染健康巴西龟,可复制与自然发病相同的症状,且从人工感染病龟体内再次分离到相同的病原菌。经Biolog微生物自动鉴定系统的鉴定,以及进一步的16 S rDNA基因序列和系统发育分析都表明,此致病菌为产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)。药物敏感性试验表明,该菌株对头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮等10种药物高度敏感。 展开更多
关键词 黄额闭壳龟(Cuora galbinifrons) 产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca) 分离鉴定 药敏试验
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巴赫平均律钢琴曲的分析与教学 被引量:4
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作者 孙建滨 《齐鲁艺苑(山东艺术学院学报)》 2004年第1期49-52,共4页
平均律钢琴曲历来被视为巴赫全部作品的巅峰之作 ,被世人推崇为钢琴音乐中的“旧约圣经”。那精美的旋律、浓郁的抒情色彩、千锤百炼的主题、精湛的复调音乐技法无与伦比 ,是复调音乐中的百科全书。本文通过对巴赫平均律钢琴曲的析解与... 平均律钢琴曲历来被视为巴赫全部作品的巅峰之作 ,被世人推崇为钢琴音乐中的“旧约圣经”。那精美的旋律、浓郁的抒情色彩、千锤百炼的主题、精湛的复调音乐技法无与伦比 ,是复调音乐中的百科全书。本文通过对巴赫平均律钢琴曲的析解与导读 ,力求使学生走近巴赫 ,逐步掌握复调音乐的各种演奏技法 ,从中学会细心感受和观察巴赫音乐的乐思 ,理解平均律钢琴曲的时代风格 ,领略这位音乐巨人沉思冥想的境界 ,感受那清淡隽永、感人肺腑、韵味无穷的激情和博爱。 展开更多
关键词 平均律 前奏曲与赋格 理解与指导
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论莫扎特钢琴奏鸣曲的演奏风格 被引量:1
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作者 孙建滨 《齐鲁艺苑(山东艺术学院学报)》 2002年第4期36-38,共3页
音乐的风格和其它艺术形式的风格一样 ,是一种以本门艺术内在固有的独特方式呈现艺术形象的总原则。本文所述的演奏风格也是如此 ,钢琴家演奏莫孔特钢琴奏鸣曲时固定不变的方法是没有的 ,评价一首钢琴作品演奏的绝对标准也是不存在的 ,... 音乐的风格和其它艺术形式的风格一样 ,是一种以本门艺术内在固有的独特方式呈现艺术形象的总原则。本文所述的演奏风格也是如此 ,钢琴家演奏莫孔特钢琴奏鸣曲时固定不变的方法是没有的 ,评价一首钢琴作品演奏的绝对标准也是不存在的 ,如果钢琴家完全掌握了莫扎特钢琴奏鸣曲音乐的真实、美感、诗意 ,那么这就意味着演释表达正确 ,一个能做到这点的钢琴家 。 展开更多
关键词 莫扎特 钢琴奏鸣曲 演奏 风格 乐器 体裁
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大鲵虹彩病毒TaqManreal·timePCR检测方法的建立
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作者 周勇 曾令兵 +5 位作者 孟彦 周群兰 张辉 高正勇 肖艺 孙建滨 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2013年第B07期18-25,共8页
利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒(Giantsalamanderiridovirus,GSIV)主要衣壳蛋白(MCP)编码区长度为1392bp的片段,克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T—MCP。经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pMD19-T—MCP重组质粒,作... 利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒(Giantsalamanderiridovirus,GSIV)主要衣壳蛋白(MCP)编码区长度为1392bp的片段,克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T—MCP。经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pMD19-T—MCP重组质粒,作为标准模板进行TaqMan实时荧光定量PCR扩增,制作标准曲线,建立了大鲵虹彩病毒的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。制作的标准曲线有极好的线性关系,且线性范围宽,相关系数为0.99019。组内重复试验的Ct值标准偏差为0.52%。检测结果显示,该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性,与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤鱼上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应,特异性好,检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数,约1.1×10^-3g/μL病毒核酸,较之常规PCR的敏感度高出约1000倍。本研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。 展开更多
关键词 大鲵出血病 虹彩病毒 MCP基因 TaqMan实时荧光定量PCR
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对高等教育改革创新的思考 被引量:1
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作者 孙建滨 《中国成人教育》 北大核心 2003年第8期50-50,共1页
关键词 高等教育 改革 创新 学生 高校 个性发展 教学内容 教材内容 教师 竞争机制 教学质量
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