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低氧诱导因子基因重组腺病毒载体的构建及其在内皮细胞中的表达
1
作者
哈小琴
姜东红
+4 位作者
邓芝云
董菊子
赵勇
彭俊华
杨志华
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第6期654-659,共6页
目的:构建携带低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的腺病毒载体(pAdxsi-GFP-HIF),观察其在内皮细胞中的表达。方法:低氧处理A549细胞后提取总RNA并逆转录为cDNA,以之作为模板,依据基因库公布的HIF-1αcDNA设计引物,分别引入KpnI和BamHI酶切...
目的:构建携带低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的腺病毒载体(pAdxsi-GFP-HIF),观察其在内皮细胞中的表达。方法:低氧处理A549细胞后提取总RNA并逆转录为cDNA,以之作为模板,依据基因库公布的HIF-1αcDNA设计引物,分别引入KpnI和BamHI酶切位点,PCR扩增后将目的基因HIF-1α连接到载体pShuttle-CMV-EGFP上,构建穿梭质粒pShuttle-GFP-HIF。采用细菌内重组方法将目的序列重组到pAdxsi病毒骨架载体上构建携带HIF-1α基因的重组腺病毒载体。检测重组腺病毒效价后,转染人脐静脉内皮细胞ECV304,检测目的基因的转染表达。结果:通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实携带HIF-lα基因的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-HIF构建成功,且构建的重组腺病毒纯度好、效价高。以100 MOI转染ECV304细胞24 h后在荧光显微镜下可观察到细胞有较强的绿色荧光表达,转染48 h时荧光表达更强,且培养上清液中HIF-1蛋白表达水平为(48.93±3.86)ng/mL。结论:本实验构建的携带HIF-1α基因的腺病毒载体pAdxsi-GFPHIF转染效率及目的基因的蛋白表达水平均较高,有望应用于缺血缺氧组织局部。
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关键词
低氧诱导因子一1仅
遗传载体
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职称材料
单侧颈内动脉狭窄患者侧支循环建立及脑血流量和认知功能的相关性
被引量：
2
2
作者
胡晨
董瑞芳
+2 位作者
史方堃
刘红梅
姜东红
《中华老年心脑血管病杂志》
CAS
北大核心
2022年第12期1296-1300,共5页
目的研究血清血管生成素样蛋白(ANGPTL)2、ANGPTL8与单侧颈内动脉狭窄患者侧支循环建立及脑血流量(CBF)和认知功能的相关性。方法采取病例对照研究,选择2021年1月至7月在沧州市中心医院神经内科住院的重度单侧颈内动脉狭窄的缺血性脑血...
目的研究血清血管生成素样蛋白(ANGPTL)2、ANGPTL8与单侧颈内动脉狭窄患者侧支循环建立及脑血流量(CBF)和认知功能的相关性。方法采取病例对照研究,选择2021年1月至7月在沧州市中心医院神经内科住院的重度单侧颈内动脉狭窄的缺血性脑血管病患者120例作为观察组,根据数字减影血管造影检查结果,将观察组又分为侧支循环不良组41例,侧支循环良好组79例;观察组依据蒙特利尔认知评估量表分为认知障碍组49例,认知正常组71例。另选取同期进行健康体检的志愿者120例作为对照组,比较各组不同认知功能及侧支循环情况、血清ANGPTL2、ANGPTL8水平及CBF、脑血容量(CBV)、平均通过时间(MTT)、达峰时间(TTP)的差异,分析血清ANGPTL2、ANGPTL8、CBF与单侧颈内动脉狭窄患者侧支循环建立及认知功能的相关性。结果观察组患者的血清ANGPTL2、ANGPTL8水平显著高于对照组[(471.9±58.2)ng/L vs(271.3±59.2)ng/L,(1955.6±56.0)ng/L vs(663.5±55.0)ng/L,P<0.01];观察组患者的MTT、TTP显著高于对照组,CBV、CBF显著低于对照组(P<0.01)。认知障碍组患者的血清ANGPTL2、ANGPTL8水平显著高于认知正常组(P<0.01);认知障碍组患者的MTT、TTP显著高于认知正常组,CBV、CBF显著低于认知正常组(P<0.05,P<0.01)。侧支循环不良组血清ANGPTL2、ANGPTL8水平显著高于侧支循环良好组[(488.8±42.0)ng/L vs(463.1±42.7)ng/L,(2015.9±51.7)ng/L vs(1924.3±51.8)ng/L,P<0.01];侧支循环不良组患者的MTT、TTP显著高于侧支循环良好组,CBV、CBF显著低于侧支循环良好组。相关性分析显示,ANGPTL2、ANGPTL8与认知功能、侧支循环、MTT、TTP呈正相关,与CBV、CBF呈负相关。结论血清ANGPTL2、ANGPTL8与单侧颈内动脉狭窄患者侧支循环建立及CBF和认知功能呈显著相关性。
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关键词
颈动脉狭窄
侧支循环
脑血管循环
认知
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职称材料
题名
低氧诱导因子基因重组腺病毒载体的构建及其在内皮细胞中的表达
1
作者
哈小琴
姜东红
邓芝云
董菊子
赵勇
彭俊华
杨志华
机构
兰州军区兰州总医院检验医学中心甘肃省干细胞与基因药物重点实验室
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第6期654-659,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(81060015,81273568)
文摘
目的:构建携带低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的腺病毒载体(pAdxsi-GFP-HIF),观察其在内皮细胞中的表达。方法:低氧处理A549细胞后提取总RNA并逆转录为cDNA,以之作为模板,依据基因库公布的HIF-1αcDNA设计引物,分别引入KpnI和BamHI酶切位点,PCR扩增后将目的基因HIF-1α连接到载体pShuttle-CMV-EGFP上,构建穿梭质粒pShuttle-GFP-HIF。采用细菌内重组方法将目的序列重组到pAdxsi病毒骨架载体上构建携带HIF-1α基因的重组腺病毒载体。检测重组腺病毒效价后,转染人脐静脉内皮细胞ECV304,检测目的基因的转染表达。结果:通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实携带HIF-lα基因的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-HIF构建成功,且构建的重组腺病毒纯度好、效价高。以100 MOI转染ECV304细胞24 h后在荧光显微镜下可观察到细胞有较强的绿色荧光表达,转染48 h时荧光表达更强,且培养上清液中HIF-1蛋白表达水平为(48.93±3.86)ng/mL。结论:本实验构建的携带HIF-1α基因的腺病毒载体pAdxsi-GFPHIF转染效率及目的基因的蛋白表达水平均较高,有望应用于缺血缺氧组织局部。
关键词
低氧诱导因子一1仅
遗传载体
Keywords
Hypoxia genetac
inducible factor 1α
Genetic vectors
Endothelial cells
Recombination, Gene expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
单侧颈内动脉狭窄患者侧支循环建立及脑血流量和认知功能的相关性
被引量：
2
2
作者
胡晨
董瑞芳
史方堃
刘红梅
姜东红
机构
沧州市中心医院神经内科
出处
《中华老年心脑血管病杂志》
CAS
北大核心
2022年第12期1296-1300,共5页
基金
沧州市重点研发计划项目(172302141)。
文摘
目的研究血清血管生成素样蛋白(ANGPTL)2、ANGPTL8与单侧颈内动脉狭窄患者侧支循环建立及脑血流量(CBF)和认知功能的相关性。方法采取病例对照研究,选择2021年1月至7月在沧州市中心医院神经内科住院的重度单侧颈内动脉狭窄的缺血性脑血管病患者120例作为观察组,根据数字减影血管造影检查结果,将观察组又分为侧支循环不良组41例,侧支循环良好组79例;观察组依据蒙特利尔认知评估量表分为认知障碍组49例,认知正常组71例。另选取同期进行健康体检的志愿者120例作为对照组,比较各组不同认知功能及侧支循环情况、血清ANGPTL2、ANGPTL8水平及CBF、脑血容量(CBV)、平均通过时间(MTT)、达峰时间(TTP)的差异,分析血清ANGPTL2、ANGPTL8、CBF与单侧颈内动脉狭窄患者侧支循环建立及认知功能的相关性。结果观察组患者的血清ANGPTL2、ANGPTL8水平显著高于对照组[(471.9±58.2)ng/L vs(271.3±59.2)ng/L,(1955.6±56.0)ng/L vs(663.5±55.0)ng/L,P<0.01];观察组患者的MTT、TTP显著高于对照组,CBV、CBF显著低于对照组(P<0.01)。认知障碍组患者的血清ANGPTL2、ANGPTL8水平显著高于认知正常组(P<0.01);认知障碍组患者的MTT、TTP显著高于认知正常组,CBV、CBF显著低于认知正常组(P<0.05,P<0.01)。侧支循环不良组血清ANGPTL2、ANGPTL8水平显著高于侧支循环良好组[(488.8±42.0)ng/L vs(463.1±42.7)ng/L,(2015.9±51.7)ng/L vs(1924.3±51.8)ng/L,P<0.01];侧支循环不良组患者的MTT、TTP显著高于侧支循环良好组,CBV、CBF显著低于侧支循环良好组。相关性分析显示,ANGPTL2、ANGPTL8与认知功能、侧支循环、MTT、TTP呈正相关,与CBV、CBF呈负相关。结论血清ANGPTL2、ANGPTL8与单侧颈内动脉狭窄患者侧支循环建立及CBF和认知功能呈显著相关性。
关键词
颈动脉狭窄
侧支循环
脑血管循环
认知
Keywords
carotid stenosis
collateral circulation
cerebrovascular circulation
cognition
分类号
R743.3 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
低氧诱导因子基因重组腺病毒载体的构建及其在内皮细胞中的表达
哈小琴
姜东红
邓芝云
董菊子
赵勇
彭俊华
杨志华
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
单侧颈内动脉狭窄患者侧支循环建立及脑血流量和认知功能的相关性
胡晨
董瑞芳
史方堃
刘红梅
姜东红
《中华老年心脑血管病杂志》
CAS
北大核心
2022
2
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